气相色谱法对甘草片中有机氯的测定

麦 妙

(海南省三亚市食品药品监督管理局，海南三亚 572000)

甘草被誉为中药中的“国老”，其性平、味甜，具有益气补中、缓急止痛、润肺止咳、泻火解毒之功效，尤其是其特有的甜味能盖过其他药材的苦味，在儿科处方中较为常见[1]。甘草片属中成药，具有镇咳祛痰作用，主要有效成分为甘草流浸膏。由于甘草品的止咳效果显著，其在临床上的应用十分广泛。正所谓“十方九草”，随着现代科学技术的发展，甘草的临床应用更是越来越广泛[2～4]，正是如此大的需求量，市面上的甘草多为人工种植品。有机氯类农药是被广泛运用的杀虫剂，但对人体百害无一利，该类农药具有难分解、性质稳定的特点，故而残留期长，且容易在人体内累积造成慢性中毒，长期的大量使用对环境已经造成了较大的污染[5]，我国在20世纪80年代已停用了有机氯类农药，但目前仍能在中药中检出该类农药。为探究有机氯在中成药中的残留[6]，本文将气相色谱法用于检测甘草片中有机氯含量，期望通过该检测手段快速、准确地检测中成药中有机氯类农药的残留量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津气相色谱仪GC-2010plus)含气相色谱工作站和电子捕获检测器(Ni-ECD)，农残专用石英毛细管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm)，旋转蒸发仪YRE-202B(上海标和仪器公司)，电子分析天平(上海方瑞仪器厂)，循环水真空泵SHZ-III型(江苏金坛仪器厂)，超声波发生器(江苏金坛仪器厂)，800B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试药

石油醚、丙酮、硫酸、二氯甲烷及无水硫酸钠等均购自广州化学试剂厂，所用试剂均为分析纯;六六六(BHC)包括 α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC 4 种异构体;滴滴涕(DDT)也有4种异构体，分别为PP'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT 和 PP'-DDT;五氯硝基苯(PCNB)浓度均为100 μg/ml。以上有机氯标准品购自国家标准物质研究中心。

2 方法

2.1 色谱条件

岛津气相色谱仪和气相工作站，Ni-ECD检测器，农残检测专用石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);进样口温度250℃，检测器温度300℃，柱温220℃[7]。升温程序为:初始温度120℃，每分钟升温10℃，升到200℃终止，保持终止温度2 min，从200℃以每分钟2℃的速率升温，升到230℃后保持2 min，载气为高纯氮气，流速为1.5 ml/min，压力为100 kPa，尾吹气流量56.3 ml·min－1，进样量 1 μL 不分流进样[8]。

2.2 标准曲线绘制

混合对照品溶液的制备:先制备对照品储备液，精密吸取 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDD、PP'-DDT 和五氯硝基苯 1 ml，置于25 ml容量瓶中，用丙酮与石油醚混合有机溶剂稀释至刻度，储备液浓度为4.0 μg·ml－1;精确吸取一定体积的对照品储备液于25 ml容量瓶中，用石油醚稀释至刻度，分别配置 0.01、0.05、0.10、0.50及1.0 μg·ml－1不同浓度的一系列对照品溶液;在上述的色谱条件下进样1 μL，以浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，建立标准曲线方程[9]。

2.3 精密度实验

精密吸取一定量标准品溶液，相当于含量5 μg/L，按照2.1色谱条件连续进样6次，记录峰高和保留时间，根据峰面积计算RSD值。

2.4 重现性实验

称取甘草片样品3份，每份按照含甘草流浸膏粉100 mg为标准，加入30 ml丙酮与石油醚混合有机溶剂，超声提取25 min过滤弃渣，并用5 ml石油醚洗涤2次并入上述滤液中，滤液放入旋转蒸发瓶中浓缩干，再用石油醚定容并用浓硫酸磺化，2500 r/min离心15 min，静置取上清液中，再按2.1色谱条件连续进样6次，根据峰面积计算RSD值[10]。

2.5 回收率实验

称取相当于含甘草流浸膏粉100 mg的甘草片样品，制备供试品溶液，分别加入浓度为0.05、0.10、0.15 μg/ml的对照品标准溶液，3 个浓度均按2.1色谱条件连续进样6次，记录峰高和峰面积并计算回收率[11]。

3 结果

3.1 线性考察结果

表1显示，对照品混合物的浓度在10～1000 μg·ml－1范围内线性良好，相关系数 r≥0.9961。

表1 标准曲线方程

3.2 精密度和重复性结果

根据对照品混合溶液峰面积计算RSD值在2.18% ～6.45%范围内，检测仪器的精密度良好;样品峰面积计算RSD值为6.17%，检测方法重现性好(精密度和重现性就是通过峰面积计算RSD值，不要单独将各测定峰面积值列出)。

3.3 回收率实验结果

表2显示，样品平均回收率89.7% ～101.2%，该检测方法回收率高且准确、可靠。

3.4 样品检测结果

样品和对照品溶液做随行对照检测，含量计算采用外标法。从色谱图1、2中可见，本甘草片样品中只检测出β-BHC，检测出的残留量为0.008 mg/kg。

4 结论

农药残留会污染药材而影响用药安全，尤其是高毒性的有机氯类农药，会对人体健康和用药安全产生极大影响[12，13]。中成药的质量不仅要相关的有效成分合格，同时农残、重金属等对药品质量都有影响，对人体健康有危害的物质，也应限定在一定范围内。我国是中成药的生产和消费大国，临床疗效也充分证明了中成药的独特作用，但目前中成药的出口和国外对中成药的接受程度均受到限制，其中农残是一个很重要的原因[14]，为此加强中成药的农药残留分析十分必要。世界卫生组织从20世纪80年代就将农残列为检测项目，我国2000版《中国药典》开始对农残进行限量要求，特别是《中药材生产质量管理规范》的实施，对从源头上控制农药残留量起到了至关重要的作用[15]。

图1 混合标准品气相色谱图

图2 样品的色谱图

中成药成分比较复杂，甘草片中就含有阿片粉、樟脑、八角茴香油、苯甲酸钠、甘草酸等许多成分，部分化合物的结构、理化性质等与有机氯农药相似，使得样品与有机氯农药的分离、净化难度增大。为保证检测结果的可靠性，中成药中有机氯农残的处理技术一般较为繁琐，这也是当前有机氯农残检测中普遍存在的问题。繁琐的前处理步骤降低了检测效率和检测的可靠性，不能满足实际需要，而建立简便、快速、可靠的样品前处理和分离检测方法，已成为未来中成药中有机氯农残检测的发展趋势[12]。针对当前中成药有机氯农残检测主要集中在BHC和DDT上的特点，本文以石油醚和丙酮为超声提取溶剂，采用外标法计算含量，并参照《中华人民共和国药典(2010版)》中“有机氯类农药残留检测法”。该检测相对简便、快速，其准确度和可靠性高，在实际检测工作中，不但适用于中成药甘草片的有机氯检测，也可以用于检测其他中成药样品中有机氯的农药残留。

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