2009-2013年山东省H5亚型禽流感抗体检测

陈 华 （山东省畜牧兽医信息中心 山东 济南 250022）陈 静 田夫林 王贵升 王苗利 孙圣福 马慧玲 孔祥华 李玉杰 徐 鸿 蔺晓月（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南）

2009-2013年山东省H5亚型禽流感抗体检测

陈 华 （山东省畜牧兽医信息中心 山东 济南 250022）
陈 静*田夫林 王贵升 王苗利 孙圣福 马慧玲 孔祥华 李玉杰 徐 鸿 蔺晓月（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南）

本研究自2009年起至2013年底对山东省17地市家禽血清抗体进行了监测。共采集家禽血清样品26678份，采用HI试验进行了H5亚型禽流感Re-4株抗体和Re-5株抗体检测，分别检测有25959、25825份样品合格，免疫合格率97.3%和96.8%，2010年秋季之后，家禽血清抗体检测合格率达到了100%。种禽场的免疫合格率明显高于商品化规模场，商品化规模场高于散养户。

山东省 H5亚型禽流感 抗体 监测 分析

禽流感(Avian influenza, AI)是禽流行性感冒的简称，它是指由禽流感病毒引起的一种动物传染病，常发生在禽，有时也发生在低等哺乳类动物，至今在人仅有偶发病例。其主要症状表现为从亚临床感染到轻重度的呼吸道感染，产蛋下降甚至严重致死性疾病，其严重程度取决于病毒毒株以及被感染禽的种类，日龄和有无并发症等因素。其中H5和H7:两个血清型可以引起高致病性禽流感(HPAI)，以传播快、发病快、死亡率高为特征，常可导致感染鸡群的全军覆没，造成严重的经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类烈性传染病，并被列入国际卫生武器公约动物类传染病名单[1]。中致病性的主要指H9N2和 H6N8亚型毒株，其他的毒株均为低的、非致病性的。禽流感病毒不仅会给养禽、畜牧业带来灾难性的破坏，而且对公共健康也构成了严重威胁。因此，禽流感的危害已引起世界各国普遍关注。尤其自1997年香港发生高致病性禽流感后，禽流感感染人不断增多，我国内地近来人群中也出现了禽流感病死病例，流行范围不断扩大，给全球的养禽业市场造成很大冲击，同时给人类安全造成巨大威胁。

禽流感病毒是单股负链分节段的RNA病毒，属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)。正黏病毒科有5个属，即甲型流感病毒属(Influenza virus A)、乙型流感病毒属(Influenza virus B)、丙型流感病毒属(Influenza virus C)、索戈托病毒属(Thogoto virus)[2]和传染性鲑鱼贫血症病毒属(Isa -virus)[3]。根据其病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(MS)抗原性的不同，分为A、B、C 3个血清型[4]。A型流感病毒根据其致病力的不同，分为高致病性病毒(HPAIV)、中致病病毒(MPAIV)和低致病病毒(LPAIV)3种[5]。

禽流感分为非致病性、低致病性、高致病性禽流感三大类，前两类发病症状较轻，对养禽业造成的影响相对较小，属于温和性禽流感，而高致病性禽流感一旦暴发，发病率和死亡率很高，给养禽业造成毁灭性打击，同时危害人类生命安全[6]。本病主要为接触传染，水平传播，其发病受季节的影响，但又不完全受季节的限制，热冷应激常常是诱发本病的重要因素[7]。

禽流感的临床症状与病毒毒力、环境因素、并发感染有关，也与鸡的品种、鸡的年龄、鸡的性别密切相关，因而其临床表现是极不一致的[8]。鸡群常突然发病。流行初期的急性病例可不出现任何症状而死亡。病鸡表现精神沉郁，羽毛蓬乱，不愿走动；食欲减退或废绝；眼睑浮肿，冠、髯肿胀、青紫、出血、坏死；眼结膜充血，分泌物增多；鼻分泌物同时增多，常使病鸡摇头甩颈。病鸡有不同程度的呼吸道症状，咳嗽、喇鼻，打喷嚏，有喘呜音等。病鸡出现或不出现下痢；下痢者，以黄绿色、绿色稀便为主，稀便中常常伴有似血样桔红色条块物(常被误认为球虫)，尿酸盐增多。病鸡腿鳞青紫或呈紫色，有出血点；皮肤常有出血斑点。有的病鸡出现似神经症状的惊厥现象。产蛋鸡产蛋率明显下降，蛋壳褪色，出现畸形蛋、软皮蛋、砂壳蛋等，蛋壳表面胶质层内常出现大量干红斑点，以薄壳蛋为主，极易破碎。

我国从2004年起，在全国开始对存栏的禽类进行强制免疫，是预防控制禽流感流行的重要举措。在大面积集中免疫的情况下，由于候鸟和水禽在禽流感传播中具有很重要的角色，而且病毒也不断发生抗原飘移和抗原突变，其影响免疫的因素较多，免疫后抗体产生水平仍然需要进行监测和分析，从而为以后的强制免疫工作和禽流感防治工作提供有益的参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 样品 山东省家禽养殖场(户)，主要是家养的鸡、鸭(以商品代)为主，重点抽检免疫21天后家禽，抽检范围为山东省17地市，规模场每场不少于20份样品，散养户数量不等，比例在10%～50%间，每个样品采血量2ml，抽检时间一般于末次免疫后21d。每次抽样数量如下：2009年春季共采集禽血清样品1792份，来自76个养鸡场、14个养鸭场和3个养鹅场；2009年秋季共采集禽血清样品1884份，来自72个养鸡场、18个养鸭场和1个养鹅场；2010年春季共采集禽血清样品1932份，来自80个养鸡场和17个养鸭场；2010年秋季共采集禽血清样品2098份，来自88个养鸡场、16个养鸭场和2个养鹅场；2011年春季共采集禽血清样品3100份，来自95个养鸡场、17个养鸭场；2011年秋季共采集禽血清样品3048份，来自88个养鸡场、13个养鸭场和2个养鹅场。2012年春季共采集禽血清样品2680份，来自85个养鸡场、14个养鸭场；2012年秋季共采集禽血清样品2841份，来自87个养鸡场、13个养鸭场。2013年春季共采集禽血清样品3805份，来自92个养鸡场、15个养鸭场；2013年秋季共采集禽血清样品3498份，来自87个养鸡场、15个养鸭场。

1.1.2 主要试剂 鸡红细胞悬液、H5型禽流感抗原及阳性血清(由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，效价为l:2048)、疫苗(国内某企业生产的H5亚型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗)。

1.1.3 主要耗材及仪器96孔“V”形微量反应板、定量移液器(25μl)、滴头、微型振荡器、恒温箱、离心机等。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 用血凝试验(HA)检测所购买的禽流感标准抗原的血凝价，然后制备4倍血凝价的抗原液，采用血凝抑制试验(HI)检测血清样品中抗体的效价。血凝试验，血凝抑制试验均按照抑制试验均按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)规定的微量法进行。

1.2.2 结果判定 以完全抑制4IU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。HI价小于或等于3log2判阴性；HI价等于4log2为可疑，进行重复试验；H1价大于或等于5log2判阳性，判定为杭体合格。根据省、市动物疫病监测方案规定，家禽免疫后21d进行免疫效果监测，HI试验免疫抗体大于或等于4log2的样品判为合格。

2 结果与分析

2.1 不同年份抗体合格率

本研究自2009年起至2013年底山东省17地市家禽监测情况进行统计，共采集样品26678份，采用HI试验进行了H5亚型禽流感Re-4株抗体和Re-5株抗体检测，分别检测有25959、25825份样品合格，免疫合格率达到97.31%和96.80%。从时间上看，2009年春季、秋季和2010年春季Re-4株抗体检测的免疫合格率在84.93%～89.60%，Re-5株抗体检测的免疫合格率在83.20%～85.61%，二者均在90%以下；而2010年秋季、2011年春秋、2012年春秋、2013年春秋两季抽测二者抗体的免疫合格率均达到了100%，见表1，图1。

表1 2009-2013年山东省H5亚型禽流感抗体 (份、%)

图1 2009-2013年不同时间山东省H5亚型禽流感抗体合格率

2.2 不同监测场点抗体合体率比较

山东省家禽饲养以现代规模化养殖为主，但仍然存在农村散养户养殖情况。由于散养分布广，散养户预防免疫意识差，给疾病防控工作带来很大难度，疫情风险比较大，同样是监测防疫的重点对象。市场流通也是疾病防控的重要环节，同样不能忽视。对2009年至2013年山东省规模户、散养户和市场三种不同的监测场点进行监测，抗体检测结果见表2、图2。

表2 2009-2013年山东省不同监测场点H5亚型禽流感抗体(份、%)

从表2中可以看出不同养殖规模的Re-4和Re-5免疫后H5亚型禽流感免疫抗体合格率均达到了91%以上，平均值接近97%。其中种禽场合格率最高，免疫合格率均达到了98%以上；散养户的免疫合格率则较低，只有92%左右。

图2 2009-2013年山东省不同监测场点H5亚型禽流感抗体合格率

由图2可以看出，在种禽场和规模化商品场中，针对Re-4疫苗的抗体合格率要高于Re-5的抗体合格率，而在散养户中，针对Re-5疫苗的抗体合格率则要高于Re-4的抗体合格率，说明在规模化养殖场和散养户中使用的H5亚型禽流感疫苗的种类可能存在差异。

2.3 不同禽类抗体合体率

本研究共采集鸡的血清样品11794份，鸭的血清样品1900份，鹅的血清样品160份，对其进行抗体检测后统计发现，3种家禽体内针对Re-4的抗体合格率按高低顺序为鸡(97.66%)、鸭(95.25%)、鹅(88.75%)，针对Re-5的抗体合格率按高低顺序为鸡(97.14%)、鸭(94.89%)、鹅(88.44%)；在3种家禽中，无论是针对Re-4的抗体合格率，还是针对为Re-5的抗体合格率，鸡群免疫效果明显好于鸭群，而鸭群的免疫效果又明显好于鹅群，见表3、图3。

从图3可以看出，从免疫个鸡、鸭、鹅三种家禽中，针对Re-4的抗体合格率均要稍高于针对Re-5的抗体合格率，显示在2009～2013年间，山东省不同家禽体内Re-4疫苗的免疫效果均要稍好于Re-5疫苗。

表3 2009-2013年山东省不同家禽H5亚型禽流感抗体 (份、%)

图3 2009-2013年山东省不同家禽H5亚型禽流感抗体合格率

3 讨论

（1）使用灭活疫苗免疫家禽以获得针对高致病性禽流感的免疫保护是目前我国进行禽流感防控的主要措施。山东省是我国主要的养禽省份之一，多年来一直按照农业部的部署认真落实禽流感的防疫工作。从本次进行的山东省H5亚型禽流感抗体检测的结果来看，2009年春季、秋季和2010年春季Re-4株抗体检测的免疫合格率在84.93%～89.60%，Re-5株抗体检测的免疫合格率在83.20%～85.61%，二者均在90%以下；而2010年秋季、2011年春秋、2012年春秋、2013年春秋两季抽测二者抗体的免疫合格率均达到了100%，表明山东省H5亚型禽流感的防疫效果呈逐年上升趋势。（2）从监测场点的检测结果来看，种禽场、规模商品场和散养户的样品中规模化养殖场合格率较高，特别是种禽场的抗体水平最高，种鸡场的合格率达到100%，种鸭场的合格率也明显高于商品鸭场，这可能是由于种禽场在养禽业的上游，规模化程度和养殖水平明显高于商品场和散养户，而且，种禽场的禽多为多次免疫，免疫应答也比免疫一两次的商品代家禽的免疫效果好。

4 结论

（1）山东省近年来针对H5亚型禽流感的疫苗防疫工作落实到位，特别是2010年秋季之后，家禽血清抗体检测合格率达到了100%。（2）在免疫合格率达不到100%时，种禽场的免疫合格率明显高于商品化规模场，商品化规模场高于散养户。

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S858.31

A

1007-1733(2014)09-0003-03

2014–06–13）

山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队项目资助，项目编号：SDAIT-13-011-17；种畜禽场疫病净化技术示范与推广项目。

*通讯作者