校准对电化学发光混合死腔量试剂检测结果的影响

李广权，周卫东，马异云，张林

1.成都三六三医院 检验科，四川 成都610041；2.蓉生药业有限公司，四川成都 610041

0 前言

罗氏Cobas e411全自动电化学发光分析仪具有灵敏度高、特异性高、亲和力高、准确度高、线性范围宽、自动化程度高、无放射污染、操作简便快速、试剂保存期长、应用范围广等优点，是目前先进的标记免疫测定设备[1-2]。其工作原理：利用生物素化的单克隆抗体以及三联吡啶钌标记的抗体与样本中靶抗原形成抗原抗体夹心复合物，再添加包被链霉亲和素的磁珠，与夹心复合物中的生物素结合在一起形成牢固的免疫复合物；仪器吸入测量池中的反应液通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质通过ProCell液去除；给电极加以一定电压，使复合体进行化学发光；根据光强度与分析物中抗原含量的正比关系计算出分析物中的抗原浓度。原装试剂价格昂贵，每盒试剂测试数由二维条形码决定，固定测试数为100次，但实际包装盒内的试剂量常常超出100次测试所用试剂量。当每盒试剂完成100次测试后，仪器就显示该试剂盒剩余测试数为0，但试剂瓶内仍剩余约25%试剂，称之为“死腔量试剂”。这些试剂如果不能再次利用就会造成浪费。本文以降钙素原（Procalcitonin，PCT）试剂为例，研究校准对死腔量试剂检测结果的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

（1）仪器：罗氏Cobas e411全自动电化学发光分析仪。

（2）试剂：罗氏降钙素原（PCT）试剂盒，批号（00168846）。

（3）PCT质控品：罗氏配套质控品。水平1：批号（00168143），e411的靶值为：0.5±0.035；水平2：批号（00168145），e411的靶值为：9.88±0.593。

（4）PCT校准液：罗氏配套校准品，批号（00168846）。

（5）样本来源：随机收集两个工作日内门诊住院病人中需进行PCT项目检测的标本20例，每天各10例（严重黄疸、脂血、溶血标本除外）。各自分离出血清，置于可密闭样本管中，编上编号，放-20 ℃冰箱保存。

1.2 实验方法

（1）复溶收集的20例PCT标本和质控液，新开一盒与死腔量试剂同批号的PCT试剂，用配套校准品校准后，将其用于患者标本和质控液的常规检测，记录PCT检测结果，用PCT新表示。

（2）将放置于冰箱保存的同一批号4盒PCT死腔量试剂（每盒试剂由M、R1、R2三联瓶组成）合并成一盒PCT试剂，将其中任何一盒R2瓶身上粘贴的二维条形码对应的15位数字在仪器上进行手工注册，使仪器将混合PCT死腔量试剂识别为一盒新的与原来单盒死腔量试剂同批号的“原装试剂”。然后将混合死腔量试剂盒装入仪器中，执行试剂扫描，仪器将混合死腔量试剂默认为当前试剂，并对收集的20例标本和质控液进行PCT检测，记录PCT检测结果，用PCT混校前表示。

（3）用配套校准品对混合死腔量试剂进行校准后，再将其用于20例标本和质控液的PCT检测，记录PCT检测结果，用PCT混校后表示。

1.3 统计学方法

对上述PCT测定结果采用SPSS19.0统计软件处理，组间比较采用配对t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组PCT检查结果，见表1。PCT混校前与PCT新结果有显著差异（P=0.04）；PCT混校后与PCT新结果无显著差异（P=0.67）；PCT混校前与 PCT混校后结果有显著差异（P=0.03）。结果表明，混合死腔量试剂校准后PCT检测精度高于校准前，与新开试剂PCT检测精度差别不大，可用于常规PCT项目的检测。

3 讨论

（1）e411电化学发光免疫检测系统采用封闭试剂，试剂信息（包括检测项目、检测量、试剂批号、效期以及厂家做的12点标准曲线等）由条形码阅读器识别[3-4]。死腔量试剂的利用主要依靠R2瓶（黑瓶）上的条形码信息，它包含的试剂信息与M瓶（透明瓶）上的条形码信息（除了试剂盒号不同外）完全相同[5]。

表1 死腔量试剂校准前后PCT检测结果与新开试剂检测PCT结果比较（ng/mL）

（2）e411全自动电化学发光分析仪采用一次性吸头吸取试剂，避免加样针污染试剂，保证了死腔量试剂与原装试剂的一致性。但是试剂开启后通常会放置在仪器上，试剂中包被的单克隆抗体活性会因水分蒸发及温度变化等原因降低进而导致试剂的稳定性降低[5]；另外，死腔量试剂的稳定性还与实验室的样本量有关，样本量越大，试剂放在仪器上的时间就越短，死腔量试剂的稳定性可基本保持不变，检测结果可靠性就越高。PCT说明书提示，开封试剂在分析仪上可稳定4周。若实验室该项目样本量很少，开封试剂在仪器上放置时间就越长，收集的混合死腔量试剂的稳定性就越差，若测定前不进行校准，该项目检测结果的可靠性就很难得到保证[6]。本研究表明，采用配套校准品对PCT混合死腔量试剂校准后再检测，能明显提高PCT检测结果的准确性。

（3）工作实践中观察到每瓶试剂剩余量约为25%左右，将死腔量试剂收集起来再利用，可有效降低检测成本，提高经济效益[7]。实际工作中，若遇到某项目的标本量极少，在完成原装试剂的测试过程中，若质控偏移，中途就需要进行两点校准；这种情况下，死腔量试剂使用前校准就更必不可少了。需要注意的是,对于经过上述处理的死腔量试剂，仪器扫描显示的测试数对应的试剂量与试剂盒里的实际试剂量可能不相符，而仪器吸干了试剂盒里的试剂后才会报警。为保证测试结果的准确性，除了要进行必要的室内质控外，还必须随时注意试剂瓶中的实际试剂量[8]。

[1]李光富,施绍瑞,胡孝彬,等.罗氏e411电化学发光分析仪死腔试剂的性能评价[J].成都医学院学报,2012,7(1):114-115.

[2]郑芝欣,翟保同,周成.环孢素A单克隆全血试剂盒残余试剂再利用研究[J].中国医药导报,2010,7(2):146-149.

[3]谷秀娟,武青青,李芳琴,等.罗氏2010电化学发光分析仪死腔量试剂回收利用探讨[J].延安大学学报(医学科学版),2009,7(1):59-60.

[4]邹珊静.全自动电化学发光免疫分析仪残量试剂再利用可行性探讨[J].医学临床研究,2005,22(10):1444-1445.

[5]尹志军,隋洪,郑文婷,等.罗氏Cobas e411加样/试剂针日常保养的重要性[J].中国医疗设备,2013,28(5):142-143.

[6]彭德珍,林武洲.应用质控品对罗氏混合回收试剂稳定性的观察[J].检验医学与临床,2010,7(4):343-344.

[7]戴淑琴,王军业,何丽容,等.Modular E170死腔量试剂的再应用[J].广州医药,2006,37(6):8-10.

[8]张民军.罗氏1010型电化学发光试剂残量的再利用技巧[J].实用医技杂志,2004,11(10):1969.