刘振伟 刘文正 刁蓓蓓
(江苏省徐州市铜山区禽病门诊部 江苏 徐州 221009)
一段时间以来徐州周边不少鸭、鹅养殖户所饲养的鸭、鹅出现了以翻身、瘫痪、头颈强直和关节肿胀等神经症状明显且死亡率较高的疾病病例。通过门诊解剖可发现如下病变:硬膜下积液,脑软化,少数病例伴随化脓性脑炎,多数病例可见脑实质呈现针尖或点片状出血,肝脏肿胀质脆易烂,少数病例有肝周炎、气囊炎现象,有些病例出现关节肿胀同时伴随关节腔积液明显。对此,笔者取病禽的肝脏和脑组织以及关节腔积液等,在化验室进行了细菌纯培养和药敏试验。通过镜检和生化试验后发现大多数病例均为葡萄球菌感染,在药敏试验的基础上经过治疗多数病例取得了较好的疗效。现将化验与处理结果报道如下。
在江苏徐州、山东枣庄及安徽萧县等地区养殖户送检病禽中,采取患禽和病死禽的肝脏及脑组织及关节腔积液在普通琼脂培养基和血液培养基中培养并做进一步鉴别。
原料包括:蛋白质5g、牛肉浸膏10g、氯化钠15g,磷酸二氢钾10g、琼脂 20g,蒸馏水 1000mL、调节p H值至7.2~7.4,在120℃条件下维持20分钟灭菌备用。
高倍显微镜一台、擦镜纸一本、玻片数个、手术剪刀、无菌镊子、酒精灯、接种棒、细菌培养箱、革兰氏染色试剂、染色架和染缸等。
肠舒福友、绿卡、磺天霸、安力素、再林、林可欣、倍能、优多邦和力生康。
细菌生化鉴定管及相应试剂(批号201200322)为杭州微生物试剂有限公司产品。
将已采集的病死禽肝脏、脑组织、心血及关节腔积液等分别接种于不同的营养琼脂培养基或鲜血培养基中,通过培养箱37℃10小时的培养,见有典型菌落长出。
6.2.1 菌落鉴定
菌落生长形态在普通营养琼脂平板上表现为典型的金黄色菌落,厚且有光泽,圆形凸起,直径在0.5~1mm。采取菌体再次画线接种于血平板放置37℃培养箱中做进一步鉴别培养,10小时后发现菌落生长形态在血平板菌落周围形成透明的溶血环。
6.2.2 显微镜鉴定
从平板上挑取上述典型可疑菌进行革兰氏染色,在高倍镜下观察呈革兰氏染色阳性,菌体形态表现为葡萄状排列,无芽孢、荚膜特征,符合金黄色葡萄球菌的形态特性。
6.2.3 生化鉴定
挑取具有典型的金黄色有透明溶血环菌落的菌体接种于不同的生化反应管,置37℃培养箱中培养,24小时后发现葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖皆被分解,且颜色均为紫红色。甲基红反应阳性,V P反应弱阳性。多数菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶等均符合金黄色葡萄球菌特性。
6.3.1 药敏片的制作
无菌操作量取上述药敏试验药品,然后按照药品使用说明将药品稀释为相应浓度,再将药敏试验滤纸放于不同稀释液中充分浸泡,待滤纸充分吸附药液后放置恒温箱中50℃烘干备用。
6.3.2 药敏试验
在无菌操作下将做好的药敏试纸贴于涂布细菌的培养皿上,放置培养箱中37℃培养10个小时后抑菌圈出现,量取药敏片抑菌圈直径大小,判定抑菌作用的强弱。
表1 20个金黄色葡萄球菌分离株药敏实验结果(mm)
金黄色葡萄球菌的致病性菌株分布范围广且有较强的季节性与危害性,本次试验从徐州周边地区不同养殖场中均分离到了上述菌株。通过对不同病例的分析发现,门诊病例中有神经症状的鸭、鹅病例多数为金黄色葡萄球菌引起。经过投服药敏试验的高敏药物后发病禽群均取得了较好的疗效。对发病禽群同时加强饲养管理并喂服充足的维生素制剂能够更好地控制疫病的蔓延并减少损失。