严全根 朱晓鸣 杨云霞 韩 冬, 3 金俊琰 解绶启 李钟杰
饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼的生长、血液生理指标和鱼体组成的影响
严全根1, 2朱晓鸣1杨云霞1韩 冬1, 3金俊琰1解绶启1李钟杰1
(1. 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室, 武汉 430072; 2. 中国科学院大学, 北京 100049; 3. 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心, 武汉 430070)
以初始体重(100.0±0.29) g的草鱼为研究对象, 通过8周的生长实验, 研究饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼的生长、饲料利用, 血液生理指标和鱼体生化组成的影响。实验设置7种等氮等能饲料, 对照组(C)以鱼粉为唯一蛋白源, 其余6组分别以棉粕替代饲料中鱼粉蛋白的20% (R20)、40% (R40)、60% (R60)、80% (R80)、90% (R90)、100% (R100)。研究结果表明: 随着饲料中棉粕含量的升高, 草鱼特定生长率呈下降的趋势, 当替代比例达到60%, 显著低于对照组(<0.05); 饲料效率、蛋白质贮积率和能量贮积率随着饲料中棉粕含量升高而显著降低(<0.05)。通过折线法分析, 在实验条件下, 棉粕可以替代鱼粉蛋白的43.3%而不影响草鱼的生长。各组草鱼之间血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和甘油三酯含量无显著差异(>0.05); 总胆固醇、高密脂蛋白胆固醇和低密胆固醇呈现下降趋势, 当替代水平达到40%显著低于对照组(<0.05)。棉粕替代鱼粉蛋白显著影响鱼体的水分含量(<0.05), 当替代比例达到80%, 鱼体的水分含量显著高于对照组(<0.05); 各组之间鱼体的蛋白质和灰分含量无显著性差异(>0.05)。R20组的鱼体脂肪和能量含量显著高于对照组(<0.05), R100组的鱼体脂肪和能量含量显著低于对照组(<0.05), 其他各组之间和对照组无显著性差异(>0.05)。
棉粕; 鱼粉; 草鱼; 生长; 血液指标; 鱼体组成
草鱼(), 典型的草食性鱼类, 具有生长速度快, 肉味鲜美等优点, 受到广大养殖户和消费者的青睐。草鱼是我国淡水养殖鱼类, 据统计, 2009年我国草鱼产量4.08×109kg, 2010年产量达4.22×109kg, 是我国第一大水产养殖品种, 占淡水鱼养殖产量的20.45%[13], 在全球的水产饲料中草鱼饲料的使用量最大。本实验以(100.0±0.29) g的草鱼为研究对象, 探讨棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼的生长、饲料利用、形态学、血液生理和鱼体生化组成等的影响。为草鱼配合饲料中合理添加棉粕提供科学依据。
实验用高蛋白棉粕由江西正邦科技股份有限公司提供, 采用溶剂浸提工艺生产, 产地为新疆。鱼粉为美国进口蒸汽白鱼粉, 购于武汉高龙饲料有限公司。表1所示为实验饲料中蛋白源的主要化学组成和氨基酸组成。本实验以棉粕和鱼粉作为蛋白源, 制成7种等氮(蛋白水平33.00%)、等能(能值为14.45 kJ/g)的饲料。棉粕分别替代鱼粉蛋白的0 (C)、20% (R20)、40% (R40)、60% (R60)、80% (R80)、90% (R90)以及100% (R100); 对照饲料(C)以白鱼粉作为唯一蛋白源。实验饲料配方和化学组成见表2。饲料原料过四十目筛, 充分混匀后, 经饲料机(上海华夏渔业机械仪器工贸公司生产的SLP-45型膨化机)做成2.0 mm的沉性颗粒, 65℃烘干, 置于–20℃冰柜备用。实验饲料氨基酸组成见表3。
表1 实验饲料中蛋白源的化学组成及氨基酸组成(%干物质)
注: 1. 棉粕采用实验室小型粉碎机进行粉碎, 其中不能通过筛片的棉绒、棉壳剔除, 从而导致实验用棉粕高蛋白、高脂肪
Note: 1. vsing a small mill to crush the cottonseed meal and remave the lint and cotton shell which cannot pass the sieve. So the experimental cottonseed meal had relatively higher protein and lipid contents
实验在室内循环水养殖系统的21个圆锥形玻璃缸(直径80 cm, 水体积300 L)中进行。进入每个缸的流水速度为8 L/min。每天测一次水温, 每周监测一次水体溶氧和氨氮。实验期间, 水温23.2—27.9℃, 氨氮浓度小于0.5 mg/L, 溶氧浓度高于6 mg/L, pH约为6.9。光照周期为12L/12D, 光亮周期从8:00至20:00, 使用节能灯作为人造光源, 水面光照强度为60.69 lx。
实验草鱼来自湖北省洪湖市大同养殖场的1龄幼鱼。实验鱼在室内水泥池进行驯养, 驯养期间每天09: 00和15: 00饱食投喂, 驯养时间持续5周, 前3周使用对照组饲料进行投喂, 后2周使用7种实验饲料的等量均匀混合物进行驯养, 使草鱼适应摄食实验饲料。实验开始时, 实验鱼饥饿24h后, 选取体格健壮、规格均匀的个体[平均尾重(100.0±0.29) g], 称重后随机放入21个鱼缸中, 每缸9尾。每种实验饲料对应随机的3个平行。生长实验持续56d, 实验期间, 每天9: 00和15:00投喂至表观饱食。
实验开始时, 随机取3组每组3尾草鱼称重, 作为实验鱼初始样, 存放于–20℃保存用作鱼体生化组成分析。实验结束时, 将鱼饥饿24h称重, 每缸取2尾鱼分析生化成分。每缸随机取3尾鱼, 测量其肥满度、肝体比和脏体比。
每缸随机取4尾鱼, 尾静脉抽血, 室温下静置3h后3500 r/min离心15min获得血清样, 用于测定血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、高密脂蛋白胆固醇、低密脂蛋白胆固醇和甘油三酯。
实验饲料和鱼体的干物质、粗蛋白、粗脂肪、灰分和总能参照文献[14]的方法进行测定: 干物质在105℃烘干至恒重, 通过失重法测定; 粗蛋白采用FOSS定氮仪(2300 Kjeltec Analyzer Unit)测定; 粗脂肪采用索氏抽提仪(Soxtec system HT6, Tecator, Hoganas, Sweden)进行测定; 灰分在马福炉中550℃燃烧3h, 失重法测定; 能值通过氧弹测热仪(Philipson mi-crobomb calorimeter, Gentry Instruments Inc·, Aiken, USA)测定。每一样品测定2个平行。
饲料的棉酚含量(游离棉酚、总棉酚)使用HPLC(DGU-20A5E, 岛津)测定, 由湖北省农业科学院分析测试中心测定。
表2 实验饲料配方及化学组成(%干物质)
注: 1. 矿物盐预混物(mg/ kg 饲料): 氯化钠, 500; 硫酸镁, 4575.0;磷酸二氢钠, 12500.0; 磷酸二氢钾, 16000.0; 磷酸二氢钙, 6850.0; 硫酸亚铁, 1250.0; 乳酸钙, 1750.0; 硫酸锌, 111.0;硫酸锰, 61.4; 硫酸铜, 15.5; 硫酸钴, 19.02; 碘化钾, 178.33; 淀粉, 6253.33; 2. 维生素预混物(mg/kg饲料): 硫胺素, 20; 核黄素, 20; 维生素B6, 20; 维生素 B12, 2; 叶酸, 5; 泛酸钙, 50; 肌醇, 100; 烟酸, 100; 生物素, 5; 淀粉, 3226; 维生素A (ROVIMIX A-1000), 110; 维生素D3, 20; 维生素E, 100; 维生素K3, 10
Note: 1. Mineral premix (mg/kg diet): NaCl, 500; MgSO4.7H2O, 7500; NaH2PO4.2H2O, 12500; KH2PO4, 16000; Ca(H2PO4).2H2O, 10000; FeSO4, 1250; C6H10CaO6.5H2O, 1750; ZnSO4.7H2O, 176.5; MnSO4.4H2O, 81; CuSO4.5H2O, 15.5; CoSO4.6H2O, 0.5; KI, 1.5; starch, 225; 2. Vitamin premix (mg/kg die): thiamin, 20; riboflavin, 20; pyridoxine, 20; cyanocobalamine, 2; folic acid, 5; calcium patotheniate, 50; inositol, 100; niacin, 100; biotin, 5; starch, 3226; vitamin A (ROVIMIX A-1000), 110; vitamin D3, 20; vitamin E, 100; vitamin K3, 10
表3 实验饲料氨基酸组成(%干物质)
血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、高密脂蛋白胆固醇、低密脂蛋白胆固醇、甘油三酯使用全自动生化分析仪(Olympus, AU400, Tokyo, Japan)测定。
用统计软件SPSS 17.0进行统计分析。实验结果经过一元方差分析(One-way ANOVA)后, 进行Duncan’s多重比较各实验组间差异的显著性,<0.05表示差异显著。
各组草鱼的成活率均100%。实验结果如表4所示, 草鱼的特定生长率随着饲料中棉粕含量的升高呈现显著下降的趋势, 当替代鱼粉蛋白比例达到60%, 特定生长率显著低于对照组(<0.05)。草鱼的摄食率随着饲料中棉粕替代比例的升高呈现显著上升的趋势, 当替代鱼粉蛋白比例达到60%, 摄食率显著高于对照组(<0.05)。饲料效率随饲料中棉粕含量的增加呈现显著下降的趋势, 当替代鱼粉蛋白比例达到40%, 饲料效率显著低于对照组(<0.05)。
蛋白质贮积率随着饲料中棉粕含量的升高呈现显著下降的趋势, 当替代比例达到40%, 蛋白贮积率显著低于对照组(<0.05)。能量贮积率随着饲料中棉粕含量的升高而下降, 当替代比例达到60%, 能量贮积率显著低于对照组(<0.05)。
通过折线法(Broken-line), 在本实验条件下, 由草鱼的特定生长率与饲料中棉粕替代鱼粉蛋白比例相关性得到饲料中棉粕替代鱼粉蛋白最适比例为43.3%(图1), 饲料中棉粕含量为24.46%。
棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼形态学的影响如表5所示。各组草鱼之间的肥满度没有显著性差异(>0.05)。棉粕替代鱼粉蛋白显著影响草鱼肝体比指数(<0.05), 随着饲料中棉粕含量的升高, 肝体比呈现显著下降的趋势, 但各组和对照组之间差异不显著(>0.05)。棉粕替代鱼粉蛋白显著影响草鱼的脏体比(<0.05), 随着饲料中棉粕含量的升高, 脏体比呈显著下降的趋势, 但各组和对照组之间差异不显著(>0.05)。
图 1 草鱼特定生长率和饲料中棉粕替代鱼粉蛋白水平的关系
由表6可知, 摄食不同比例棉粕替代鱼粉蛋白的饲料8周后: 各组草鱼之间的血清谷丙转氨酶活性和血清谷草转氨酶活性无显著性差异(>0.05)。血清总胆固醇含量随着饲料中棉粕含量的上升, 呈现显著下降的趋势(<0.05), 当替代比例达到40%, 总胆固醇含量显著低于对照组(<0.05)。血清高密脂蛋白胆固醇和低密脂蛋白胆固醇呈现和总胆固醇一样的趋势, 即随着饲料中棉粕含量的升高, 其含量显著下降(<0.05), R20组和对照组无显著性差异(>0.05), 其他各组含量显著低于对照组(<0.05)。各组草鱼之间的血清甘油三酯含量无显著性差异(>0.05)。
由表7可知, 饲料中棉粕替代鱼粉蛋白显著影响草鱼的生化组成。棉粕替代鱼粉蛋白显著影响鱼体的水分含量(<0.05), 当替代比例达到80%, 鱼体的水分含量显著高于对照组(<0.05)。各组草鱼之间的鱼体蛋白质含量无显著性差异(>0.05)。R20组鱼体脂肪含量显著高于对照组(<0.05), R100组鱼体脂肪含量显著低于对照组(<0.05), 其他各组和对照组无显著性差异(>0.05)。各组之间鱼体的灰分含量无显著性差异(>0.05)。R20组鱼体能量显著高于对照组(<0.05), R100组鱼体能量显著低于对照组(<0.05), 其他各组之间和对照组无显著性差异(>0.05)。
本实验得出初始体重(100.0±0.29) g的草鱼饲料中高蛋白棉粕替代鱼粉蛋白比例不超过43.3%为宜, 不补充必需氨基酸的前提下, 在饲料中的添加比例最高为24.46%。研究和生产实践表明, 棉粕在水产配合饲料中的比例可以达到 10%—30%[15], 但不同种类的水产动物, 甚至是同种水产动物的不同生长阶段对饲料中棉粕耐受量有差异。
表4 饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼生长和饲料利用的影响(平均值±标准误)*
Tab.4 Effects of replacement of fishmeal protein with cottonseed meal on the growth and feed utilization of grass carp (means±SE)*
注:*表中同行数据后不同上标英文字母表示差异显著(<0.05) , 下同Different superscripts within each row represent significant differences (< 0.05). The same applies bellow;1初始体重: initial body weight (g);2终末体重: final body weight (g);3摄食率(, %BW/d)=100×总干物质摄食量/[实验天数×(初始体重+终末体重)/2]: feeding rate (%BW/d) = 100×feed intake/[days×( (initial body weight + final body weight) /2);4特定生长率(, %/d)=100×[Ln(终末体重)–Ln(初始体重)]/实验天数: specific growth rate (%/d) = 100×(Ln(final body weight) –Ln(initial body weight) ) / days;5饲料效率(, %)=100×鱼体湿重总增重/总干物质摄食量: feed efficiency (%) =100×wet weight gain/dry feed intake;6蛋白贮积率(, %)=100×(鱼体积累蛋白/蛋白摄食量): Protein retention efficiency (%) =100×(protein retained in fish body /protein intake);7能量贮积率(,%)=100×(鱼体积累能量/能量摄食量): Energy retention efficiency (%)=100×(energy retained in fish body/energy intake)
表5 饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼形态学的影响(平均值±标准误)
注:1肥满度= 100×体重/ (体长);2肝体指数(%) = 100×肝脏湿重/鱼体重;3脏体指数(%)= 100×内脏湿重/鱼体重
Note:1: Condition factor = 100×body weight / (body length);2: Hepato-somatic index (%) = 100×liver wet weight / body weight;3: Viscera-somatic index (%) = 100×viscera wet weight / body weight
表6 饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对草鱼血液生理的影响(平均值±标准误)
表7 饲料中棉粕替代鱼粉蛋白对鱼体生化组成的影响(平均值±标准误)(%湿重)
王胜[22]报道了草鱼饲料蛋白38%时赖氨酸的适宜需要量为1.94%; 草鱼饲料蛋白37%时总含硫氨基酸的适宜需要量为1.21%, 折算成饲料蛋白含量33%, 其赖氨酸和含硫氨基酸需求量分别为1.80%和0.97%, 由表3得知, R40组饲料赖氨酸含量为1.78%, 含硫氨基酸含量为0.96%; R60组饲料赖氨酸含量为1.62%, 含硫氨基酸含量为0.94%; R40组草鱼的生长和对照组无显著差异, 而R60组草鱼的生长显著低于对照组, 说明饲料中赖氨酸含量低是影响草鱼饲料中棉粕替代鱼粉蛋白的原因之一。
胆固醇是体内重要的脂类物质, 可以合成各种类固醇激素。总胆固醇浓度的高低反映了脂类吸收状况, 同时可以反映肝脏脂肪代谢状况[23]。本实验结果表明, 草鱼摄食棉粕替代鱼粉蛋白的饲料后, 其血清总胆固醇含量显著下降。有研究发现, 在狼鲈饲料中使用植物蛋白源替代鱼粉, 导致血清的总胆固醇含量降低。可能是由于胆汁盐排泄增加, 或胆固醇胃肠道吸收受到限制, 或仅仅是因为植物蛋白源替代导致饲料中胆固醇含量不足所导致[24]。
AST和ALT是广泛存在于肝脏为主的细胞线粒体中的重要氨基转移酶, 在机体蛋白质和氨基酸代谢中起着重要作用, 其活性与氨基酸代谢强弱有关。血清中AST和ALT可以作为鱼类评价肝脏损伤程度的主要指标[25]。Cai,.[9]研究发现异育银鲫饲料中棉粕添加量高达56%, 其AST和ALT和对照组无显著差异, 本实验结果和其一致。
随着饲料中棉粕含量的升高, 鱼体水分呈现显著上升的趋势。在通常情况下, 随着饲料中植物蛋白源比例的上升, 水生动物的水分含量上升, 干物质含量下降, 这表明水生动物对植物蛋白源的利用率低于鱼粉[26]。但Yue和Zhou[4]研究发现奥尼罗非鱼随着饲料中棉粕含量的升高, 鱼体水分含量呈现下降的趋势。类似的, 尼罗罗非鱼的鱼体水分随着饲料中棉粕含量的升高呈现下降的趋势[5]。
总之, 本研究表明, 草鱼[初始平均体重(100.0± 0.29) g]饲料中棉粕替代鱼粉蛋白的比例可以达43.3%, 饲料中棉粕含量为24.46%, 而不影响草鱼的生长。
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EFFECT OF REPLACEMENT OF FISH MEAL WITH COTTONSEED MEAL ON GROWTH, HEMATOLOGICAL PHYSIOLOGY, AND BODY COMPOSITION OF GRASS CARP
YAN Quan-Gen1, 2, ZHU Xiao-Ming1, YANG Yun-Xia1, HAN Dong1, 3, JIN Jun-Yan1, XIE Shou-Qi1and LI Zhong-Jie1
(1.State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China;2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China; 3. Freshwater Aquaculture Collaborative Innovation Center of Hubei Province, Wuhan 430070, China)
To evaluate the effects of replacement of fishmeal with cottonseed meal on growth, feed utilization, hematological physiology, and body composition of juvenile grass carp [mean initial body weight of (100.0±0.29) g], seven isonitrogenous and isoenergetic diets (C, R20, R40, R60, R80, R90 and R100) containing graded levels of cottonseed meal (CSM) (replacing 0, 20%, 40%, 60%, 80%, 90%, and 100% FM protein by CSM protein) were fed to triplicate groups of fish for 8 weeks. The results showed that the diets containing ≥ 60% of replacement levels significantly diminished the specific growth rate () of the fish compared with the non-replacing group (<0.05). The increased levels of CSM significantly decreased,and(<0.05), and the optimal replacement level by CSM was 43.3% protein. CSM had no significant effects on the ALT activity, AST activity or the content of TGy (>0.05). Moreover, the dietary CSM reduced the content of serum TCh, HDL-C and LDL-C, and the significant difference was observed when the replacement is 40% or more. The dietary CSM at all graded levels had significant effect on the water content of fish body (<0.05), but it did not regulate the content of protein or ash of the fish body. The role of diatery CSM in regulating the lipid and gross energy contents is concentration-dependent: R20 diet significantly increased them compared to the control group (<0.05); R100 diet significantly decreased them; (<0.05); R40, R60, R80, or R90 did not have significant effects.
Cottonseed meal; Fishmeal; Grass carp; Growth; Hematological physiology; Body composition
2012-03-22;
2013-12-07
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-46-19); 公益性行业(农业)专项(201003020, 201203015); 国家973项目(2009CB118702)资助
严全根(1978—), 男, 江西人; 博士研究生; 研究方向为鱼类营养学。E-mail: qgyan@sina.com
解绶启, E-mail: sqxie@ihb.ac.cn
S965.1
A
1000-3207(2014)02-0362-08
10.7541/2014.51