血浆uPA、uPAR与鼻咽癌临床分期的相关性研究

朱俊秀周理想李相鸿梁大虎陈艾东*

（1 芜湖市弋江区医院，安徽 芜湖241001；2 皖南医学院弋矶山医院临床药学部， 安徽 芜湖 241001）

血浆uPA、uPAR与鼻咽癌临床分期的相关性研究

朱俊秀1周理想2李相鸿2梁大虎2陈艾东2*

（1 芜湖市弋江区医院，安徽 芜湖241001；2 皖南医学院弋矶山医院临床药学部， 安徽 芜湖 241001）

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其受体（uPAR）的血浆浓度与鼻咽癌临床分期和恶性程度的相关性。方法收集86例鼻咽癌患者血液标本，35例健康人血液标本作对照。用酶联免疫吸附法（ELISA法）分别检测uPA和uPAR的血浆浓度。结果与健康对照患者比较，鼻咽癌组血浆uPA浓度明显升高（P＜0.05），且鼻咽癌组血浆uPA、uPAR在鼻咽癌各期之间均有显著性差异（P＜0.05）。结论鼻咽癌的临床分期和恶性程度与血浆uPA浓度高度正相关，可作为鼻咽癌诊断和预后估计的指标及治疗的新靶点。

尿激酶型纤溶酶原激活物；尿激酶型纤溶酶原激活物受体；鼻咽癌

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）好发于中国南方各省及东南亚地区，其病因涉及EB病毒、遗传因素（遗传易感性）、多种癌基因和抑癌基因的相互作用以及环境和饮食因素。近年来人们通过对肿瘤的深入研究，认识到癌变是一个涉及多重基因事件的复杂过程。鼻咽癌发生、发展及其生物学行为的研究也已进入基因水平。在已知的蛋白酶中，尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）是一种丝氨酸蛋白酶类[1]，uPAR是uPA的特异性受体，它们与抑制剂相互作用，为肿瘤细胞提供局限在细胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的细胞外基质和基底膜成分，促进肿瘤细胞的浸润和转移[2]。本研究分析鼻咽癌与健康者之间的uPA，uPAR血浆浓度，分析以上各项指标与鼻咽癌的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源：皖南医学院附属医院2009年7月至2011年7月收治的鼻咽癌患者86例，年龄22～69岁，其中男67例，女19例，均未接受放化疗治疗，所有患者均经鼻咽腔组织病理活检确诊，中国鼻咽癌2008临床分期标准进行分期。健康对照组为皖南医学院附属医院体检的正常人35例，年龄22～66岁，其中男27例，女8例。健康对照组均经病史、体检、血常规、血生化、心电图、胸透及五官、眼科等专科检查确定为健康人群，且2周内均未接受抗凝及溶栓治疗。

1.2 主要仪器：Q/FTH008-2000 PCR扩增仪（日本株式会社）；

DU640核酸定量分析仪（美国Bio-Rad）；UVP-8000凝胶紫外光成像仪（美国UVP）；超低温冰箱（丹麦Harris）；双蒸水仪（美国Millipore）。

1.3 主要试剂：人尿激酶型纤溶酶原激活因子ELISA试剂盒为美国原装生产，大连信邦生物试剂公司分装。

1.4 方法：清晨抽空腹静脉血2 mL于EDTA-K2抗凝管中，立即颠倒混匀，6 h内4000 rpm离心10 min，分离血浆和白细胞层，分装Epp管中，-80 ℃保存待用。采用ELISA试剂盒测定。在全自动酶标仪上测出A450的值和浓度，最后乘以稀释倍数，计算出uPA的血浆浓度（ng/mL）。

1.5 统计学处理：采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验或Fisher精确概率法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

鼻咽癌组血浆uPA、uPAR浓度与正常对照组之间均有显著性差异（P＜0.05）；uPA、uPAR在鼻咽癌各期之间均有显著性差异（P＜0.05）。见表1。

表1 86例鼻咽癌患者各临床分期uPA血浆浓度与正常对照组比较

3 讨 论

鼻咽癌是一种具有明显的地区聚集性的上皮起源性的恶性肿瘤，可在疾病早期原发病灶不明显时便发生颈部淋巴结转移或远处转移。然而，鼻咽癌发生和转移的确切分子机制仍不很清楚。研究发现，肿瘤发生侵袭、转移与其自身分泌蛋白酶密切相关，在人类恶性肿瘤组织中，已知有丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶可能参与肿瘤的浸润生长和转移，丝氨酸蛋白酶是参与这一复杂过程蛋白酶中的关键酶之一[3]。尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在乳腺癌，胃癌，软组织肉瘤，肝细胞癌等均发现高水平[4]，且与肿瘤的淋巴结转移、复发、短生存期等呈正相关。

尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）属于一种丝氨酸蛋白酶类，有两条二硫键相连的多肽链，一个C端的丝氨酸蛋白区和一个N端A链。最初分泌出来的uPA为单链的酶原形式（prouPA），在一些酶的作用下，转变为双链有活性的uPA，它激活无活性的纤溶酶原转变为纤溶酶。uPAR是uPA的特异性受体，当N端122个氨基酸切去后，以糖基化磷酸肌醇（GPI）的形式锚泊在胞膜上。它们与抑制剂相互作用，为肿瘤细胞提供局限在细胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的细胞外基质和基底膜成分，促进肿瘤细胞的浸润和转移。本研究显示，鼻咽癌患者血浆中uPA明显升高，与健康对照组比较具有显著性差异。此外，鼻咽癌患者血浆中的uPA血浆浓度随着临床分期的增加而升高，且各分期间均有显著性差异，提示uPA的持续升高与疾病的分期有关，与鼻咽癌的病程进程相关。本资料所得结论与黄涛等[5]用ELISA法检测鼻咽癌患者血浆uPA的结论相一致。

uPAR是uPA的特异性受体，它们与抑制剂相互作用，为肿瘤细胞提供局限在细胞膜表面某一部位的蛋白酶水解活性，共同降解大量的细胞外基质和基底膜成分，促进肿瘤细胞的浸润和转移。本研究结果显示，鼻咽癌患者血浆中uPAR的血浆浓度明显升高，同样，鼻咽癌患者血浆中uPAR随着临床分期的增加而增高，提示血浆中uPAR血浆浓度与鼻咽癌的病程进展呈正相关，其可能是促进鼻咽癌发生发展、浸润和转移的原因之一，同时也提示鼻咽癌的发生发展、浸润和转移可能是uPA、uPAR共同作用的结果。

综上所述，uPA及uPAR在鼻咽癌的生长、浸润和转移的过程中起着重要作用。随着研究的逐渐深入，机制的阐明，以及大量临床试验的进行，uPA、uPAR可在临床上为鼻咽癌的诊断及预后评估提供参考，并可能成为鼻咽癌治疗的靶向目标。

[1] Halámková J,Kiss I,Tomášek J,et al.Significance of urokinase and its inhibitors in the invasiveness and metastasing of malignant tumors[J]. Vnitr Lek,2012,58(2):129-134.

[2] Breuss JM,Uhrin P.VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/ uPAR system[J].Cell Adh Migr,2011,6(6):535-615.

[3] Rabbani SA,Mazar AP.The role of the plasminogen activation system in angiogenesis and metastasis[J].Surg Oncol Clin N Am,2001,10(2):393-415.

[4] Binder BR,Mihaly J,Prager GW.uPAR-uPA-PAI-1 interactions and signaling: a vascular biologist's view[J].Thromb Haemost,2007, 97(3):336-342.

[5] 黄涛,符生苗,梁茱,等.鼻咽癌组织中UPA及UPAR蛋白的表达及其临床意义[J].临床耳鼻喉头颈外科杂志,2009,23(11):517-519.

R739.63

B

1671-8194（2014）24-0075-02

皖南医学院弋矶山医院引进人才基金（2010621）安徽省高等学校省级自然科学基金（KJ2012B202）

*通讯作者