HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学诊断为ASC-H的分流作用

王振明

（潍坊市人民医院检验科，山东 潍坊 261041）

HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学诊断为ASC-H的分流作用

王振明

（潍坊市人民医院检验科，山东 潍坊 261041）

目的HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈细胞学诊断为ASC-H的分流作用。方法对68例ASC-H患者进行HPV E6/E7 mRNA及高危型HPV检测，并行阴道镜检查及活检，分析其结果之间的关系。结果HPV E6/E7 mRNA方法检出ASC-H中CIN2 +宫颈病变的敏感性为63.2%，特异性为75.5%，阳性预测值为50%，阴性预测值为84.1%。HPV E6/E7 mRNA方法的特异性及阳性预测值明显高于高危HPV方法。结论HPV E6/E7 mRNA可以作为ASC-H患者是否需要阴道镜检查的一个分流指标。

HPV；E6/E7；mRNA；ASC-H

2001 TBS宫颈细胞学报告系统将不典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cells，ASC）分为2个类型：不能明确意义的不典型鳞状上皮细胞（ASC-US）及不除外高度鳞状细胞病变的不典型鳞状上皮细胞（ASC-H）。美国阴道镜与宫颈病理协会主张对ASC-H患者立即作阴道镜检查。为避免低风险人群的过度诊断及侵入性检查，有研究采用高危人乳头瘤病毒（HR-HPV）检测作为ASC-H患者分流的工具[1]。高危型HPV中致癌基因为 E6/E7 基因[2]，而 HPV E6/E7 mRNA 含量能较好地反映致癌基因E6/E7的活动度，可以更为直观的评估高度宫颈鳞状上皮细胞内病变及宫颈癌的发病风险和预后[3，4]。本研究通过68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA进行检测，并与高危型HPV检测比较，探讨其对ASC-H患者分流的价值。

表2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA检测方法对CIN2+的诊断效率

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择2012年10月至2013年10月于潍坊市人民医院就诊，TCT检查结果为ASC-H；并且行HPV E6/E7 mRNA检测、HR-HPV检测及阴道镜下活检的68例患者作为研究对象，患者年龄26～69岁，平均年龄45岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

所有受试者由医师以窥器暴露子宫颈，擦净子宫颈口分泌物，用宫颈刷在宫颈口稍用力顺时针旋转3圈后取出，将宫颈脱落细胞标本放入专用保存管中4 ℃保存。

1.2.2 HR-HPV DNA检测

采用凯普公司的医用核酸快速杂交仪及配套试剂盒检测21种HPV亚型，其中13种HR-HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68）。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA检测

采用以实时多重核酸序列扩增（NABSA）技术为基础的PreTect HPVProofer检测法，检测试剂为NucliSENS EasyQ HPV 1.0试剂盒，能检测处HPV16、18、31、33和45 五种高危HPV亚型的E6/E7 mRNA表达。

1.2.4 阴道镜检查及活检

对68例ASC-H 患者由临床医师进行阴道镜检查，并对可疑病灶进行阴道镜下定位活检，未见明显异常者，采取3、6、9、12点活检。所有病理切片均由资深病理学专家复核。

1.3 统计学处理

用SPSS13.0软件进行统计学分析，各组间率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA检测结果比较（表1）。68例ASC-H 患者经阴道镜活检，包括19例宫颈炎，30例CIN1，10例CIN2，8例CIN3及1例宫颈癌。CIN2+组HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA阳性率均明显高于CIN2-组，差异有统计学意义。其中CIN2- 组（包含CIN1及宫颈炎）HPV E6/E7 mRNA阳性率（24.5%）明显低于HR-HPV DNA的阳性率（44.9%），显示出较高的特异性。

表1 68例ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA检测结果

2.2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA检测方法对CIN2+的诊断效率的比较（表2）。HPV E6/E7 mRNA方法检出ASC-H中CIN2+宫颈病变的敏感性为63.2%，低于HR-HPV DNA方法，但特异性显著高于HRHPV DNA方法。HPV E6/E7 mRNA方法检出ASC-H中CIN2 +的阴性预测值与HR-HPV DNA方法无明显差别，但阳性预测值明显高于HRHPV DNA方法。

3 讨 论

宫颈细胞学检查是宫颈病变的重要检查手段，目前采用国际通用的2001 TBS报告系统。涂片中的异常细胞仅有1个或2个，不足以诊断鳞状上皮内高度病变时，报告ASC-H。美国阴道镜与宫颈病理协会主张对ASC-H患者立即作阴道镜检查。本次研究在68例ASC-H患者的病理组织学诊断结果中，19例 ASC-H患者（27.9%）为隐藏的CIN2+宫颈病变患者，说明ASC-H患者有较高的高度宫颈鳞状上皮细胞内病变患病率。但是，研究中也有49例 ASC-H 患者（72.1%）为CIN1与宫颈炎患者，这类患者在诊疗上仅需要按时随访，因此，积极的阴道镜检查可能存在过度诊断，由此会给患者带来不良感受。合理有效地分别对待ASC-H患者的处理，对临床医师来说始终是一个不可避免的难题。大量流行病学和生物学研究表明，反复持续的高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变发病的主要危险因素，针对ASC-H病例HR-HPV检测呈阳性者，进一步行阴道镜活检可以缩小有创检查的人群范围，使其成为较好的分流方式[5]。但是，HPV感染的普遍性和感染后有一过性消除的特点，导致HPV检测的特异性不高。

E6/E7基因是高危型HPV中的两条癌基因片段，它们是导致宫颈细胞癌变的关键。E6蛋白能结合P53蛋白，使P53蛋白失去抑癌作用。E7蛋白能调控Rb家族及细胞周期调控蛋白，从而使细胞无限增殖。一旦HPV 整合入人基因组，E6/E7 mRNA的表达不受限制，将增加到一个引起恶性转化的水平，检测这种癌基因的转录即能确诊高危反复感染者。有文献报道E6/E7 mRNA 水平与病变的严重程度相关，在高级别宫颈病变中对高危HPV mRNA 检测相比HPV DNA 检测有更好的特异性[6]。本研究对68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA及HR-HPV DNA检测发现，在检出CIN2+宫颈病变方面，HPV E6/E7 mRNA较HR-HPV DNA具有更高的特异性和阳性预测值。对HPV E6/E7 mRNA阳性ASC-H患者立即进行阴道镜活检，阴性ASC-H患者进行随访，我们认为是可行的。作为ASC-H分流的一种新方法，需要进一步扩大样本量来探讨HPV E6/E7 mRNA检测对ASC-H的分流作用。

[1] 梅平,刘艳辉,李旻,等.高危型人乳头状瘤检测在不除外高度鳞状上皮内病变的不典型鳞状上皮细胞中的意义[J].中华病理学杂志,2009,38(5):337-339.

[2] Moody CA,Laimins LA.Human papillomavirus oncoproteins: pathways to transformation[J].Nat Rev Cancer,2010,10(8):550-560.

[3] 卢文波,姜智南,陈顺美,等.人乳头状瘤病毒E6/E7mRNA检测宫颈高度病变的临床评价[J].中华医院感染学杂志,2009,19(22):3145-3147.

[4] Hovland S,Muller S,Skomedal H,et al.E6/E7 mRNA expression analysis: a test for the objective assessment of cervical adenocarcinoma in clinical prognostic procedure[J].Int J Oncol,2010,36(6):1533-1539.

[5] 卢薇薇,任国平,吕梨.高危型HPV-DNA 检测对宫颈细胞学诊断为ASC-H的分流作用[J].全科医学临床与教育,2009,7(2):102-104.

[6] Ratnam S,Coutlee F,Fontaine D,et al.Clinical performance of the PreTect HPV-Proofer E6/E7 mRNA assay in comparison with that of the Hybrid Capture 2 test for identif i cation of women at risk of cervical cancer[J].J Clin Microbiol,2010,48(8):2779-2785.

Use of HPV E6/E7 mR NA Testing to Deal with Atypical Squamous Cells Cannot Exclude HSIL

WANG Zhen-ming
(Department of Laboratory, Weifang People’s Hospital, Weifang 261041,China)

ObjectiveUse of HPV E6/E7 mRNA testing to deal with atypical squamous cells cannot exclude HSIL.MethodsHPV E6/E7 mRNA and HRHPV DNA were examined in 68 patients with ASC-H. Colposcopic examination and biopsy were taken, all results were evaluated.ResultsThe sensitivity, specificity, the positive predictive value and the negative predictive value for detecting CIN2 + lesions of ASC-H were 63.2%, 75.5%,50%, and 84.1%, respectively, for HPV E6/E7 mRNA test; The HPV E6/E7 mRNA testing is superior to HR-HPV DNA testing in specificity, the positive predictive value.ConclusionsHPV E6/E7 mRNA may serve as a predict select whether a patient with ASC-H should take Colposcopic examination immediately.

Human papillomavirus; E6/E7; mRNA; ASC-H

R711.32

B

1671-8194（2014）21-0070-02