不同产地缬草中总环烯醚萜类的含量比较*

袁秀芝,许明旺,薛存宽

(华中科技大学同济医学院附属梨园医院药剂科,武汉 430077)

不同产地缬草中总环烯醚萜类的含量比较*

袁秀芝,许明旺,薛存宽

(华中科技大学同济医学院附属梨园医院药剂科,武汉 430077)

目的 建立测定总环烯醚萜类含量的方法,比较不同产地缬草中总环烯醚萜类的含量。方法采用分光光度法,以缬草中总环烯醚萜类与碱性羟胺-高氯酸铁显色剂产生显色反应,于波长约522 nm处测定吸光度,按缬草三酯来计算总环烯醚萜类含量。结果缬草三酯量在0.05～1.40 mg范围内与吸光度具有良好的线性关系,平均加样回收率98.50%,RSD=1.02%,不同产地缬草中总环烯醚萜类的含量有明显差异。结论该方法准确可靠,能更好地评价缬草的质量,提示缬草中总环烯醚萜类的含量与产地有关。

缬草;总环烯醚萜类;缬草三酯;分光光度法

缬草是败酱科缬草属植物缬草(Valeriana officinalisL.)的根及根茎,主要含有挥发油、环烯醚萜类[1-2]。药理实验表明其具有镇静安神、解痉镇痛、改善微循环等广泛的药理活性[3-5]。已被20多个国家的药典所收载,为目前欧洲销售额最高的天然药物之一；同时其又是一种用于食品、化工等行业的珍贵香料,具有很高的药用价值和经济价值。我国缬草广泛分布于湖北、贵州、四川等地,品质不一[6-7]。国内文献主要对缬草的生理活性和药理作用进行研究,笔者未见对其化学成分及其含量分布的报道。因此,笔者将缬草的主要有效成分总环烯醚萜类作为该药的质控指标,采用碱性羟胺-高氯酸铁显色方法来测其含量,比较不同产地缬草中总环烯醚萜类的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-4802H型紫外-可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司),BS110S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司),超声清洗器(上海超声波仪器厂)。

1.2 试药 缬草购自主产区湖北神农架、贵州、四川等地,由中美联合神农架植被考察队鉴定确认,中国科学院武汉植物研究所复核。对照品缬草三酯购自英国Apin Chemicals Limited公司,批号:28258。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 显色试剂的配制 碱性羟胺溶液的配制:称取盐酸羟胺2 g,置50 mL量瓶中,加水2.5 mL溶解并以无水乙醇加至刻度,摇匀即为A液；另称取氢氧化钠4 g,置50 mL量瓶中,加水2.5 mL溶解并以无水乙醇加至刻度,摇匀即得B液。临用时将A、B液等量混合,离心取上清液。

高氯酸铁溶液的配制:称取高氯酸铁2.5 g,置于50 mL量瓶中,加入冷藏的水和高氯酸溶液各5 mL使溶解,再用冷藏的无水乙醇稀释至刻度,摇匀。临用前取该溶液2 mL置于50 mL量瓶中,用高氯酸滴至颜色消失,再用冷藏的无水乙醇稀释至刻度,摇匀即可。

2.1.2 对照品溶液的配制 精密称取缬草三酯对照品适量用苯溶解稀释成浓度为1 mg·mL-1。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密称取干燥缬草粗粉适量,加入5倍量的苯超声提取3次,每次20 min,合并提取液,滤液挥干,所得提取物用苯定量制成每毫升溶液相当于缬草40 mg。

2.1.4 阴性对照液的制备 将制备供试品溶液所用的药渣再按“2.1.3”项下方法制备即可。

2.1.5 总环烯醚萜类显色溶液的制备 精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照液各1 mL分别置于5 mL量瓶中,加入碱性羟胺溶液1 mL,混匀,置40℃加热15 min,取出冷却后加入高氯酸铁溶液2.5 mL,并用苯加至刻度,摇匀,静置20 min,备用。

2.1.6 测定波长的确定 分别取对照品、供试品和阴性对照显色溶液置紫外可见分光光度仪中于200～700 nm范围内扫描。结果显示供试品和对照品溶液在约522 nm处有最大吸收峰,而阴性对照液在此没有吸收峰出现,说明缬草中除环烯醚萜外其他成分对总环烯醚萜类的含量测定无干扰,故选择(522±2)nm,见图1。

图1 5种溶液的紫外可见分光光度图谱1.空白液;2.供试品;3.对照品;4.未显色的对照品;5.未显色的供试品Fig.1 UV-VIS Spectrophotometry of five kinds of solution1.blank solution;2.sample;3.reference substance;4.the reference substance with no-coloration;5.sample with no-coloration

2.2 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液0.00, 0.05,0.10,0.20,0.40,0.80,1.0 0,1.40 mL分别置于5 mL量瓶中,按“2.1.5”项制备方法制成显色液,并平行做空白对照,置紫外可见分光光度计下于(522± 2)nm处测定吸光度,根据对照品量(X)与吸光度(Y)计算回归方程为Y=0.000 42+0.496 5X,r=0.999 9。结果显示缬草三酯量在0.01～0.28 mg·mL-1范围内与吸光度具有良好的线性关系。

2.3 精密度实验 精密吸取对照品液1.0 mL,依法制成显色溶液,连续测定6次,测得平均吸光度为0.496 3,RSD为0.07%。

2.4 稳定性实验 精密吸取供试液1.0 mL,依法制成显色溶液,分别于0.0,1.0,2.0,3.0,3.5,4.0 h依次测定吸光度,平均吸光度为0.3358,计算RSD为1.60%。结果表明,供试品显色溶液在常温下4 h内稳定。

2.5 重复性实验 精密称取同一批样品6份,依法制成显色溶液,置紫外可见分光光度计下于(522±2)nm处测定吸光度,RSD为0.94%。

2.6 加样回收率实验 平行取已知含量的缬草粗粉6份,精密称定,分别加入一定量的缬草三酯对照品,照供试品溶液和显色液制备法处理后,并平行做空白对照及阳性对照,置紫外可见分光光度计下于(522± 2)nm处测定吸光度,计算回收率。结果平均回收率98.50%,RSD=1.02%。见表1。

表1 缬草三酯加样回收率Tab.1 Results of recovery test of valepotriate mg

2.7 不同产地样品的含量测定 取不同产地的缬草样品,按供试品溶液和显色液制备法处理后,并平行做空白对照及阳性对照,置紫外分光光度计下于(522± 2)nm处测定吸光度,按缬草三酯计算每克生药含有总环烯醚萜类的量。结果见表2。

3 讨论

缬草中环烯醚萜类成分有许多,其对照品难以购得,不能用高效液相色谱(HPLC)法一一测定,且缬草三酯在缬草中的相对含量较低,不能真实反映缬草的质量。环烯醚萜类能与盐酸羟胺-高氯酸铁显色剂发生显色反应,新的生成物在约522 nm有最大吸收峰,而其他成分在此无干扰,故可以选择此法测定缬草中总环烯醚萜类的含量,更有效地控制药材的质量。实验结果显示神农架和贵州缬草总环烯醚萜类含量较高,新疆缬草含量最低。

表2 不同产地缬草含量测定结果Tab.2 Content determination of valerian from different origins n=3

供试品制备方法的选择:首先是供试品溶剂选择,甲醇、乙醇与显色试剂有显色反应(棕红色),最大吸收峰在476 nm处,对实验有干扰；二氯甲烷、苯与显色试剂无显色反应,环烯醚萜的二氯甲烷或苯溶液显色反应后呈紫红色,最大吸收峰在(490±2)nm(二氯甲烷)、(522±2)nm(苯)处无干扰峰,尤以苯为佳,故选定苯作为供试品溶剂。其次是显色反应的水浴温度及反应时间对实验有影响:温度过高(＞45℃),溶剂易挥发,显色反应不完全,温度过低(＜30℃),使显色反应时间大大延长,35～40℃显色反应比较理想；水浴时间15～30 min显色反应比较理想,继续延长水浴时间并不能增加显色反应的强度；加入显色剂高氯酸铁溶液后摇匀静置10～20 min显色反应即达稳定。据此确定了供试品的制备方法。

[1] 张振学,姚新生.药用植物缬草的化学研究进展[J].中国药物化学杂志,2000,10(3):226-229.

[2] 张书勤,薛存宽,何学斌,等.缬草环烯醚萜酯体外抗肿瘤作用的实验研究[J].医药导报,2008,27(1):27-28.

[3] 都晓伟,吴军凯.缬草属植物化学成分及药理活性研究进展[J].国外医药:植物药分册,2006,21(1):10-14.

[4] 吴波,马迎军,付玉梅.缬草镇静和抗惊厥药理研究[J].中国现代应用药学,2005,22(7):587-588.

[5] 杨乾,鞠爱华,白万富,等.宽叶缬草的化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代应用药学,2008,25(7):613-616.

[6] 李美阳.HPLC法测定不同采集时期的北缬草中生理活性成分含量[J].安徽农业科学,2013,41(2):604-605

[7] 陈千良,石张燕,赵婷,等.陕西产缬草药材质量标准研究[J].西北大学学报:自然科学版,2012,42(6):966-968.

DOI 10.3870/yydb.2014.05.033

Comparation of Total Iridoids in Valerian from Different Habitats

YUAN Xiu-zhi,XU Ming-wang,XUE Cun-kuan
(Department of Pharmacy,Liyuan Hospital Affiliated to Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430077,China)

Objective To determine and compare the contents of total iridoids in valerian from different origins.MethodsThe total iridoids in valerian was detected by reaction with alkaline hydroxylamine-perchloric acid iron reagent,and the absorbance was measured at 522 nm by spectrophotometry.ResultsThe content of valepotriate and its absorption were linear within the range of 0.05-1.40 mg·mL-1.The average recovery was 98.50%,and RSD was 1.02%.There was significant difference between the contents of iridoid in valerian from different habitats.ConclusionThis method is accurate and reliable for evaluating the quality of valerianand.The contents of valeriana is related to its habitats.

Valerian;Total iridoids;Valepotriate;Spectrophotometry

R282.71;R927.2

B

1004-0781(2014)09-1227-03

2013-07-09

2013-09-29

*国家重大攻关项目(96-901-01-66)

袁秀芝(1966-),女,湖北麻城人,副主任药师,硕士,主要从事中药研究,电话:027-86793046,E-mail:lglx2004 @tom.com。

许明旺(1964-),女,湖北黄石人,主任药师,硕士,从事中药研究。电话:027-86793062,E-mail:xuecunkuan@ 163.com。