黄芪注射液联合针刺穴位对慢性肾小球肾炎模型大鼠的治疗作用

曾明，程樱

(1.湖北省临床检验中心，武汉 430064；2.湖北省食品药品监督检验研究院，武汉 430064)

黄芪注射液联合针刺穴位对慢性肾小球肾炎模型大鼠的治疗作用

曾明1，程樱2

(1.湖北省临床检验中心，武汉 430064；2.湖北省食品药品监督检验研究院，武汉 430064)

目的 探讨腹腔注射黄芪注射液结合针刺足三里穴和肾俞穴对慢性肾小球肾炎模型大鼠的治疗作用及其机制。方法雄性SD大鼠50只,随机分为药穴结合组、黄芪组、穴位组、模型组、空白对照组,各10只。除空白对照组外,其余各组均尾静脉注射阳离子化牛血清清蛋白诱发大鼠慢性肾小球肾炎模型。药穴结合组:每日腹腔注射黄芪注射液1.5 mL(200 g),同时针刺单侧足三里穴、肾俞穴,每穴10 min;黄芪组:每日腹腔注射黄芪注射液1.5 mL(200 g);穴位组:每日针刺单侧足三里穴、肾俞穴,每穴10 min;模型组:每日正常饲养。空白对照组:每日腹腔注射灭菌注射用水1.5 mL(200 g);测定各组24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐含量。结果3个治疗组大鼠的24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐含量均比同期模型组低(均P<0.05)。结论3种治疗方法均能延缓慢性肾小球肾炎的发展,保护肾功能;随着治疗时间的延长,药穴结合组的治疗效果最好,黄芪组的治疗效果优于穴位组。

黄芪注射液；足三里穴；肾俞穴；肾小球肾炎,慢性

慢性肾小球肾炎(chronic glomerulonephritis)简称慢性肾炎,是以蛋白尿、血尿、高血压、水肿伴缓慢进展的肾功能减退为临床特点的一组肾小球疾病［1］,预后较差,随着时间的迁延,最终将发展成为慢性肾衰竭。研究表明,肾小球肾炎的发病原因与免疫复合物介导相关［2］。中药黄芪在《本经》中记载:主痈疽,久败疮,排脓镇痛,补虚。《日华子本草》中记载黄芪:助气壮筋骨,长肉补血；具有补气固表、利尿消肿、脱毒排脓、敛疮生肌的功效。研究表明黄芪具有免疫调节作用,可用于治疗自身免疫性疾病［3］。笔者在本研究中观察黄芪注射液联合针刺穴位对慢性肾小球肾炎模型大鼠的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级雄性SD大鼠50只,体质量180～200 g,由湖北省实验动物研究中心提供［许可证号:SCXK(鄂)2008-0005］。

1.2 实验试剂 牛血清清蛋白(Amresco,批号: 1128S04)、无水乙二胺(批号:110517)、碳二亚胺(批号:25952-53-8)、黄芪注射液(哈尔滨圣泰制药股份有限公司,规格:每支10 m L,相当于原药材20 g,批号:20110609)等。

阳离子化牛血清清蛋白溶液制备:称取适量的阳离子化牛血清清蛋白干粉溶于0.01 mol·L-1磷酸缓冲液(pH7.4)与不完全弗氏佐剂(1∶1)的混合溶液中,混合均匀即得。

1.3 实验仪器 AU-400生化分析仪(日本奥林巴斯株式会社)、CELL-DYN3700血细胞分析仪(美国雅培公司)、Scan 100尿分析仪(德国COMBI公司)、AB204-S电子分析天平(瑞士梅特勒仪器公司)等。NOV-14高速台式离心机(德国Eppendorf公司)。

1.4 实验动物分组与模型的建立 大鼠适应性喂养1周后,随机分为5组,每组10只。除空白对照组外,其余4组均用阳离子化牛血清清蛋白造模致炎(在大鼠的双侧腋下、腹股沟多点皮下注射阳离子化牛血清清蛋白溶液,每只2.5 mL。第2周再次注射,操作同第一次,每只2.0 mL。第3周首次尾静脉注射阳离子化牛血清清蛋白溶液,每只0.5 m L；隔日尾静脉注射, 1周3次,连续3周；空白对照组大鼠同期尾静脉注射同体积的灭菌注射用水,每只0.5 mL),建立慢性肾小球肾炎模型。

1.5 治疗方法 造模1周后,药穴结合组:每日腹腔注射黄芪注射液1.5 m L,同时针刺单侧足三里穴、肾俞穴,每穴10 min；黄芪组:每日腹腔注射黄芪注射液1.5 mL；穴位组:每日针刺单侧足三里穴、肾俞穴,每穴10 min；模型组:每日正常饲养；空白对照组:每日腹腔注射灭菌注射用水1.5 mL,治疗8周。

1.6 标本的采集及测定 在造模前、造模成功后和治疗各时间点,采集大鼠24 h尿液,用双缩脲法测定尿蛋白含量；取大鼠眼眶静脉血,离心10 min (3 000 r·min-1),吸取上层血清,测定血清尿素氮和肌酐含量。

1.7 统计学方法 实验数据采用SPSS16.0版统计软件处理,结果以均数±标准差(±s)表示,组间比较用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠24h尿蛋白含量的变化 在造模前后和治疗各时间点,收集各组大鼠的24 h尿液,测定尿蛋白含量,结果见表1。

由表1可以看出:模型组大鼠在造模后各时间点的尿蛋白均高于同期空白对照组(P<0.01),说明蛋白随尿液大量排出体外,大鼠滤过功能受到损害；3种治疗方法都能降低慢性肾小球肾炎大鼠的24 h尿蛋白含量；随着治疗时间的延长,药穴结合组效果最好,黄芪组的效果优于穴位组。

2.2 大鼠血清尿素氮和血清肌酐含量的变化 造模后及治疗各时间点,取大鼠眼眶静脉血,离心10 min (3 000 r·min-1),吸取上层血清,测定血清尿素氮含量,结果见表2。

由表2可以看出:3个治疗组和模型组大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量均比同期空白对照组高(P<0.05),说明大鼠的肾功能遭到破坏,造模成功；治疗至第8周,模型组大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量比同期空白对照组高(P<0.01),说明随着时间推移,肾功能的损害不断加重；治疗第4周起,3个治疗组大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量均比同期模型组低(P<0.05),说明这3种方法都能降低慢性肾小球肾炎大鼠血清尿素氮和血清肌酐的含量。

3 讨论

3.1 慢性肾小球肾炎大鼠模型的选择 阳离子抗原广泛应用于肾炎的实验研究中,其机制是肾小球基底膜具有带负电荷的硫酸类肝素为主要成分的蛋白聚糖,通过电荷吸引带正电荷的牛血清清蛋白,将其种植在肾小球基底膜上,阳离子化牛血清清蛋白作为非肾抗原,诱发大鼠产生与之相应的抗体,抗原抗体结合后形成免疫复合物沉积于肾脏,激活补体系统,引起肾脏的微炎症反应,导致肾炎的发生［4-6］,产生类似人类膜性肾病的病理改变和临床症状［7-9］。

表1 5组大鼠24 h尿蛋白含量变化Tab.1 Changes in 24-hour urine protein con tent in 5 groups of rats mg,±s

表1 5组大鼠24 h尿蛋白含量变化Tab.1 Changes in 24-hour urine protein con tent in 5 groups of rats mg,±s

与空白对照组比较,*1P<0.01;与模型组比较,*2P<0.05;与黄芪组和穴位组比较,*3P<0.05;与穴位组比较,*4P<0.05Compared with the blank control group,*1P<0.01;compared with themodel group,*2P<0.05;compared with the astragalus group and acupuncture group,*3P<0.05;compared with the acupuncture group,*4P<0.05

组别大鼠/只造模前造模后治疗2周治疗4周治疗8周药穴结合组10 9.00±0.64 34.12±8.27*116.90±6.03*214.74±7.33*211.08±4.31*2*3黄芪组10 8.57±1.01 31.87±9.99*121.35±6.98*214.67±4.50*212.41±3.67*2*4穴位组10 8.42±0.38 32.98±9.39*128.09±6.31*219.86±4.09*215.70±3.92*2模型组10 8.77±0.98 30.8±9.48*135.8±7.98*134.19±8.09*150.24±9.98*1空白对照组10 8.34±1.11 9.01±0.75 8.90±1.08 8.58±1.05 8.36±0.98

表2 5组大鼠血清尿素氮和肌酐的含量变化Tab.2 Changes in content of serum urea nitrogen and creatinine in 5 groups of rats ±s

表2 5组大鼠血清尿素氮和肌酐的含量变化Tab.2 Changes in content of serum urea nitrogen and creatinine in 5 groups of rats ±s

与空白对照组比较,*1P<0.05,*3P<0.01;与模型组比较,*2P<0.05Compared with the blank control group,*1P<0.01,*3P< 0.01;compared with themodel group,*2P<0.05

组别与时间大鼠/只血清尿素氮/ (mmol·L-1)血清肌酐/ (μmol·L-1)药穴结合组造模后10 6.08±1.09*161.63±3.63*1治疗2周10 4.78±0.89*259.25±4.55治疗4周10 4.98±1.09*255.46±6.73*2治疗8周10 5.07±1.24*253.36±9.99*2黄芪组造模后10 6.41±1.12*164.37±4.01*1治疗2周10 4.81±0.87*260.04±4.98治疗4周10 4.90±1.13*256.35±7.36*2治疗8周10 5.13±1.29*250.35±8.38*2穴位组造模后10 6.34±0.98*163.35±2.87*1治疗2周10 4.79±1.13*259.35±3.75治疗4周10 4.50±1.01*253.35±10.02*2治疗8周10 5.26±0.98*256.35±8.36*2模型组造模后10 6.80±1.35*160.98±2.53*1治疗2周10 6.04±1.08*161.43±3.84*1治疗4周10 7.00±1.48*166.02±9.14*1治疗8周10 11.67±2.98*386.35±13.57*3空白对照组造模后10 4.02±0.97 54.43±7.34治疗2周10 4.21±0.67 55.34±6.87治疗4周10 4.18±1.01 56.34±8.34治疗8周10 4.36±1.05 57.38±9.01

3.2 黄芪的药效分析 黄芪对巨噬细胞T淋巴细胞［10］、B淋巴细胞均有调节作用,对细胞因子有诱生作用［11］。临床广泛用于治疗心脑血管、肾脏及病毒性疾病［12-13］。

大多数慢性肾小球肾炎的病因和致病机制是体液和细胞免疫介导的微炎症损伤。鉴于黄芪免疫调节作用,笔者采用黄芪注射液治疗慢性肾小球肾炎大鼠,观察治疗效果。

3.3 治疗穴位的选择 中医学针刺穴位治疗源远流长。足三里穴为健脾补虚培元之要穴［14-15］,具有调脾胃、养气血、扶正壮阳之功,肾俞穴为治肾之要穴,具有益肾填腰、固精补虚、壮阳利湿之功。临床用于治疗由肾虚引起的各种病症。

基于黄芪药效作用和足三里穴、肾俞穴的特点,本研究将黄芪注射液和针刺穴位结合治疗慢性肾小球肾炎模型大鼠。结果显示,腹腔注射黄芪注射液结合针刺足三里穴、肾俞穴治疗慢性肾小球肾炎大鼠,可降低慢性肾小球肾炎大鼠的24 h蛋白尿含量、血清尿素氮含量及肌酐含量,取得了较好疗效。

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DOI 10.3870/yydb.2014.01.007

Therapeutic Effect of Astragalus In jection Combined with Acupuncture Treatment for Rats with Chronic Glomerulonephritis

ZENGMing1,CHENG Ying2
(1.Hubei Center for Clinical Laboratory,Wuhan 430064,China;2.Hubei Institute for Food and Drug Control,Wuhan 430064,China)

Objective To investigate the therapeutic effect and mechanism of intraperitoneal(ip)injection of astragalus combined with acupuncture atzusanliandshenshupoints on ratswith chronic glomerulonephritis.MethodsFifty SD ratswere randomly divided into blank control,combination therapy,astragalus injection alone,acupuncture alone and model groups(n=10).Intravenous injection of cationic bovine serum albumin was performed in all groups except the blank control, resulting in a ratmodel of chronic glomerulonephritis.The combination therapy group received daily ip injection of 1.5 mL astragalus(200 g),with needling atzusanliandshenshupoints on one side,each for 10 min.The astragalus group was injected ip with 1.5 mL astragalus(200 g)daily.The acupuncture group was treated with needling atzusanliandshenshupoints at oneside,each for 10 min.Themodel group received normal feeding.The blank controls were injected ip with 1.5 m L sterile water for.Serum creatinine,blood urea nitrogen,and 24 h urine protein were determined.ResultsAll of the blood indexes were lower in the three treatment groups than those in the model one(P<0.05).ConclusionA ll three therapies can slow the progress of chronic glomerulonephritis and protect kidney function.The combination of acupuncture with astragalus injection has the best effect,and astragalus injection alone shows better effect than acupuncture alone.

Astragalus injection;Zusanlipoint;Shenshu point;Glamerulonephritis,chronic

R286;R285.5

A

1004-0781(2014)01-0024-04

2013-02-22

2013-07-05

曾明(1972-),男,湖北江陵人,副主任技师,硕士,从事临床检验工作。电话：027-87279656,E-mail：zmhm21@yahoo.com.cn。