高效液相色谱法测定复方西羚解毒丸中4种成分的含量

魏谭军,陈晓东

(1.四川省达州市中西医结合医院,达州 635000;2.江西中医药大学药学院,南昌 330004)

高效液相色谱法测定复方西羚解毒丸中4种成分的含量

魏谭军1,陈晓东2

(1.四川省达州市中西医结合医院,达州 635000;2.江西中医药大学药学院,南昌 330004)

目的 采用高效液相梯度洗脱法建立复方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A含量测定方法。方法Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);体积流量:0.9 mL·min-1;流动相A为甲醇-乙腈(2∶1),流动相B为0.2%磷酸溶液梯度洗脱;检测波长280 nm。结果牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A分别在0.302 6～6.052 0μg(r=0.999 4),0.069 2～1.384 0μg(r=0.999 7),0.014 2～0.284 0μg(r=0.999 1),0.031 4～0.628 0μg(r=0.999 2)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.25%,97.91%,97.67%, 96.69%,RSD(n=6)分别为0.84%,1.39%,1.32%,0.57%。结论该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为复方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A的含量控制方法。

西羚解毒丸,复方;牛蒡子苷;牛蒡子苷元;连翘苷;连翘酯苷A

复方西羚解毒丸为中药复方制剂,处方源于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册,由牛蒡子(炒)、连翘、金银花、桔梗、荆芥穗、甘草、淡竹叶、薄荷、淡豆豉、羚羊角、水牛角浓缩粉、冰片十二味药物组成。具有解表清热之功效,可用于感冒发热,头痛咳嗽,咽喉肿痛等症的治疗[1]。原部颁标准未对方中的任何药物进行定性鉴别或定量测定,不能有效地保证产品的质量和疗效。笔者采用高效液相梯度洗脱法对牛蒡子和连翘中的牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷以及连翘酯苷A进行含量测定方法研究,为完善该制剂质量标准提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪;G1322A脱气机、G1329A自动进样器、G1311A四元泵、Chemstation色谱工作站;G1315B可变波长检测器。

1.2 试药 牛蒡子苷元对照品(批号:7770-78-7,纯度:98.0%)购于宝鸡市辰光生物科技有限公司;牛蒡子苷对照品(批号:110819-201309,纯度:95.7%)、连翘苷对照品(批号:110821-201213,纯度:95.3%)、连翘酯苷A对照品(批号:111810-201304,纯度:94.3%)均购于中国食品药品检定研究院;复方西羚解毒丸(规格:每丸6 g,批号:131017,131019,131021)购于山东健民药业有限公司;磷酸(广州化学试剂二厂,分析纯);甲醇(天津市康科德科技有限公司,色谱纯);乙腈(安徽时联特种溶剂股份有限公司,色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm× 200 mm,5μm);体积流量:0.9 mL·min-1;流动相A为甲醇-乙腈(2∶1),流动相B为0.2%磷酸溶液[2-4],梯度洗脱(0～11 min,45.0%A;～27 min,45.0%→25.0%A;～50 min,25.0%A);检测波长280 nm[5-7]。此系统条件下所测组分与其他组分分离效果良好,理论板数按牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A计均不得低于3 000,分离度均＞2[2-7]。

2.2 混合对照品溶液的制备 取牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A对照品各适量,精密称定,加80%甲醇制成混合对照品溶液(牛蒡子苷为0.302 6 mg·mL-1,牛蒡子苷元为0.069 2 mg·mL-1,连翘苷为0.014 2 mg·mL-1,连翘酯苷A为0.031 4 mg·mL-1)。

2.3 供试品溶液的配制 取本品适量,剪碎,取约6.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%甲醇50 mL,密塞,称定质量,超声处理(300 W,40 kHz) 40 min,再称定质量,用80%甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,取续滤液即得供试品溶液。

2.4 阴性对照实验 按复方西羚解毒丸处方比例称取除牛蒡子和连翘的其余药味,按复方西羚解毒丸的生产工艺分别制成缺牛蒡子和连翘的阴性样品,按照上述供试品溶液的配制方法制成缺牛蒡子和连翘的阴性对照溶液。分别精密吸取供试品溶液、混合对照品溶液、缺牛蒡子和连翘的阴性对照溶液10μL,按上述方法测定,结果为:在与牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A对照品色谱图相应的保留时间处,供试品溶液色谱图中有吸收峰,而阴性对照色谱图中未显吸收峰。见图1。

2.5 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.5, 1.0,2.0,5.0,10.0 mL,分别置于10 mL量瓶中,用80%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20μL,注入色谱仪中,按“2.1”项下所述色谱条件进行测定,以峰面积(Y)为纵坐标与进样量(X)为横坐标,得回归方程为:牛蒡子苷 Y = 2. 372 8× 106X - 322. 7, r =0. 999 4;牛蒡子苷元Y = 2. 621 4×106X -269. 1,r =0. 999 7;连翘苷Y = 1. 658 2× 106X + 252. 3, r =0. 999 1;连翘酯苷A Y = 2. 024 4×106X -125. 2,r =0. 999 2。牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A依次在0.302 6～6.052 0μg,0.069 2～1.384 0μg, 0.014 2～0.284 0μg,0.031 4～0.628 0μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。

2.6 精密度实验 取“2.2”项下的混合对照品溶液,按“2.1”项色谱条件重复进样6次,测定,记录牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A的峰面积,RSD分别为0.42%(牛蒡子苷),0.61%(牛蒡子苷元), 0.72%(连翘苷)和0.88%(连翘酯苷A)。结果表明,仪器具有良好精密度。

2.7 重复性实验 称取同一批样品6份,按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液,依法进样测定,计算含量,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A的RSD依次为0.37%,0.51%,0.69%, 0.77%。结果表明,本法测定重复性良好。

2.8 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液,在室温下放置0,2,4,8,12,24 h后,每次进样10μL,测定其峰面积值,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A的RSD依次为0.25%,0.62%,0.82%, 0.75%。结果表明,供试品溶液24 h内基本稳定。

2.9 加样回收率实验 取已知含量的同一批复方西羚解毒丸(牛蒡子苷为2.52 mg·g-1,牛蒡子苷元为0.58 mg·g-1,连翘苷为0.12 mg·g-1,连翘酯苷A为0.26 mg·g-1)适量,剪碎,取约3.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入混合对照品溶液25 mL, 80%甲醇25 mL,按“2.3”项下供试品溶液的配制方法制备加样供试品试液。按正文方法进样测定,计算4种组分回收率,结果见表1。

图1 牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A的高效液相色谱图

表1 复方西羚解毒丸中4种成分的加样回收率

续表1

2.10 样品测定 取3个批号的样品,按“2.3”项下供试品制备方法,按“2.1”项下色谱条件测定本品中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、连翘苷和连翘酯苷A含量,结果见表2。牛蒡子苷元不得低于2.8 mg;含连翘苷不得低于0.60 mg,含连翘酯苷A不得低于1.2 mg。

表2 3批复方西羚解毒丸中每丸4种成分含量测定结果 mg,±s,n=3

表2 3批复方西羚解毒丸中每丸4种成分含量测定结果 mg,±s,n=3

批号牛蒡子苷牛蒡子苷元连翘苷连翘酯苷A 131017 15.12±0.14 3.48±0.04 0.72±0.01 1.56±0.02 131019 14.65±0.13 3.24±0.03 0.68±0.01 1.49±0.02 131021 16.34±0.14 3.77±0.02 0.81±0.02 1.63±0.03 mg,

3 讨论

3.1 供试品溶液提取时间的选择 笔者在实验过程中曾对提取时间分别以超声(300 W,40 kHz)处理30, 40,50 min进行考察,结果40,50 min结果相差不大,而提取30min时含量明显低于40,50min,因此供试品制备的提取时间定为40 min。

3.2 含量限度的确定 根据测定的各组分含量的平均值,暂定本品每丸含牛蒡子苷不得低于12.0 mg,含

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DOI 10.3870/yydb.2014.12.026

R286;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1636-03

2014-01-13

2014-03-02

魏谭军(1984-),男,甘肃白银人,中药师,硕士,主要从事医院制剂的研发。电话:0818-2288358,E-mail: 404477285@qq.com。

陈晓东(1963-),男,江西南昌人,副教授,硕士生导师,主要从事新药的设计与开发。电话:0791-87105505, E-mail:chenxiaodonglunwen@163.com。