水通道蛋白4抗体对视神经脊髓炎的诊断价值

陈淑媛 吴哲 付贺飞 张凤娇

水通道蛋白4抗体对视神经脊髓炎的诊断价值

陈淑媛 吴哲 付贺飞 张凤娇

目的 检测中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病患者血清水通道蛋白4抗体(即NMO-Ig G)的表达,并探讨其对视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)的诊断价值。方法 收集2011-01-2013-01就诊于中国医科大学附属第一医院神经内科的CNS脱髓鞘疾病患者50例﹝其中NMO患者10例,长节段横惯性脊髓炎(longitudinally extensive transverse myelitis,LETM)患者10例,多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者30例﹞及30名健康人的血清,采用ELISA试剂盒检测血清NMO-Ig G水平。结果 NMO组、LETM组、MS组及健康对照组NMO-Ig G的阳性率分别为60%(6/10)、50%(5/10)、10%(3/30)、0(0/30)。NMO组与LETM组NMO-IgG阳性率均高于MS组(＜0.05)。NMO-IgG诊断NMO的灵敏度为60%,特异度为95%(57/60)。结论 NMO和LETM患者血清NMO-IgG阳性率均较高,支持两者同属于视神经脊髓炎疾病谱(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)；NMO的诊断标准仍需建立在临床及MRI诊断的基础之上,NMO-IgG可作为一项重要的辅助诊断指标,有助于NMO的鉴别诊断。

视神经脊髓炎；多发性硬化；水通道蛋白4抗体

视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO),又称Devic综合征、Devic病,是视神经和脊髓相继或同时受累的急性或亚急性脱髓鞘病变。在过去几十年间,对于NMO是一种独立的疾病,还是多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的亚型,一直存在争议。直至2004年,随着NMO特异性抗体NMO-IgG及其特异性靶抗原水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)的发现,NMO被认为是一种自身免疫性水通道病,是有别于MS的独立疾病［1-2］。2006年,该抗体被纳入NMO新的诊断标准中。本研究采用ELISA试剂盒检测患者血清NMOIgG水平,旨在探讨其对NMO的诊断价值及临床意义。

1 对象和方法

1.1 研究对象 收集2011-01-2013-01就诊于中国医科大学附属第一医院神经内科的中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病患者50例,其中NMO患者10例,长节段横惯性脊髓炎(longitudinallyextensive transverse myelitis,LETM)患者10例, MS患者30例。入选标准：10例NMO患者在不考虑NMO-Ig G阳性的条件下符合2006年的NMO诊断标准［3］,30例MS患者在排除了NMO及其疾病谱的前提下,符合2010年的Mcdonald MS诊断标准［4］,10例LETM患者MRI检查结果显示脊髓病灶大于3个椎体节段［5］。另选20～60岁健康志愿者30名为对照组,其中男10名,女20名。收集患者临床病例资料,包括性别、起病年龄、是否伴有严重视神经炎(optic neuritis,ON)、MRI显示脊髓病灶是否超过3个椎体节段。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂和仪器：人AQP-4抗体酶联免疫试剂盒(编号CSB-E13568h)由武汉华美生物有限公司生产。KHB ST-360酶标仪由上海科华实验系统有限公司生产。其他包括湘仪产TG16-W微量高速离心机,电热恒温培养箱,系列可调节微量加样器及吸头,干净的试管、量筒、容量瓶等。

1.2.2 NMO-Ig G检测：抽取清晨空腹静脉血,以3000 r/min(离心半径5.5 cm)离心10 min,分离血清,置-40℃储存备用。严格按照AQP-4抗体酶联免疫试剂盒说明书操作,为保证实验的准确性,标准品及样品均设双孔测定,加样时均用微量加样器定量加取,每个血清标本更换一个吸头,采用同一批号试剂,由同一人操作,严格控制反应时间、反应温度等。采用酶标仪检测NMO-Ig G的吸光度﹝(λ)﹞值,以对照组的平均(λ)值+3倍标准差为判断NMO-IgG阳性的临界值。

1.3 统计学处理 使用SPSS 19.0统计软件,计数资料以率表示,采用连续校正χ2检验及Fisher确切概率法,计量资料以均数±标准差表示,采用检验。以＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清NMO-IgG水平 NMO组NMO-Ig G阳性率为60%(6/10),LETM组为50%(5/10), MS组为10%(3/30),对照组为0(0/30)。NMO组和LETM组NMO-Ig G阳性率均高于MS组(＜0.05),NMO组与LETM组、MS组与对照组NMO-IgG阳性率间比较无统计学差异(= 1.000；=0.237)。NMO-IgG诊断NMO的灵敏度为60%,以MS为对照,其诊断NMO的特异度为90%(27/30)；以MS+对照组为对照,其特异度为95%(57/60)。

2.2 临床及MRI比较 对NMO-IgG阳性脱髓鞘患者与阴性脱髓鞘患者的临床特征进行比较,两组患者间脊髓病灶超过3个椎体节段比较有统计学差异(＜0.05),而发病年龄、伴有严重ON间比较无统计学差异(表1)。

表1 NMO-IgG阳性与阴性脱髓鞘患者临床及MRI特征比较

3 讨论

亚洲MS患者视神经和脊髓多受累,而NMO也是以视神经和脊髓受累为主,两者的诊断和鉴别诊断存在一定困难。但两者发病机制、免疫病理、临床表现、治疗及预后均有所不同［6］,因此,早期确诊对于指导临床用药、改善预后具有重要意义。本研究采用ELISA法检测50例CNS脱髓鞘疾病患者血清NMO-IgG水平,结果显示其诊断NMO的灵敏度为60%,特异度为95%,提示NMO-Ig G的检测有助于NMO的诊断。除NMO外,在一些NMO相关性疾病中也可存在此抗体。2010年欧洲神经病学联盟关于NMO诊治的指南中明确定义了视神经脊髓炎疾病谱(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)。NMOSD系指潜在免疫病理机制与NMO相似但临床受累局限,不完全符合NMO者,包括：(1)受累部位局限的类型,如LETM、双侧ON和复发性孤立性ON；(2)在器官特异性或非器官特异性自身免疫疾病背景下发生的NMO；(3)伴有症状性或无症状性脑内病灶的不典型病例；(4)亚洲视神经脊髓型MS［7］。该研究结果显示,NMO-Ig G阳性率在NMO组和MS组间有统计学差异,提示NMO为不同于MS的独立的自身免疫通道病,为其鉴别诊断提供了重要生物学依据。NMO-Ig G作为一项支持诊断条件可明显提高诊断NMO/NMOSD的特异度［8］,能够在一定程度上鉴别NMO及其他CNS疾病,尤其是在综合了临床、影像、寡克隆带等信息后仍无法确诊时,NMO-IgG有助于NMO与MS的鉴别。但需要注意的是,NMO的诊断不能过度依赖于NMO-IgG检测,而应注重结合患者临床特点及MRI表现进行诊断。

作为NMO患者血清中的特异性生物学标记物,NMO-Ig G不仅有助于NMO的诊断和鉴别诊断,而且对预测NMO的预后及指导治疗也有重要意义。几项针对孤立脊髓或视神经症状可能发展为经典NMO患者的血清NMO-Ig G滴度变化的研究显示,血清NMO-IgG阳性可能预示症状恶化或向NMO转化［9-11］。本组10例LETM患者中5例NMO-IgG阳性,但由于开展NMO-IgG检测的时间较短,目前还没有较长时间的临床随访结果。对于NMO-Ig G阳性的这一大类CNS脱髓鞘疾病,目前倾向于诊断为NMOSD［12］,并建议尽早给予免疫抑制治疗。本研究中,LETM和NMO组间NMO-Ig G阳性率的差异无统计学意义,也为两者同属于NMOSD提供支持。另外,鉴于NMOIg G在NMO发病机制的重要作用,利用非致病性的单克隆抗体或小分子阻滞剂来阻滞NMO-IgG与AQP-4的相互作用已成为NMO治疗的新的研究靶点［13-14］。

关于NMO-IgG滴度水平与NMO临床的关系,目前的研究认为影响因素主要有脊髓病灶长、脑组织受累严重、视力受损严重、发病年龄早、预后差、复发次数、疾病活动。本次研究对50例患者的性别、起病年龄、是否伴有严重ON、脊髓病灶是否超过3个椎体节段进行统计分析,结果显示脊髓病灶超过3个节段在NMO-Ig G阳性与阴性组间有明显统计学差异,提示NMO-IgG阳性与脊髓病灶长有关。

综上所述,NMO-IgG有助于NMO的诊断和鉴别诊断,但当患者的临床特点及MRI表现与NMO-Ig G结果不符时,应结合临床表现和影像学特征进行综合诊断。

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WU Zhe,Email：zhe_wu@sina.com

Objective To detect the expression of serum aquaporin-4 antibodies(NMO-IgG)in patients with central nervous system(CNS)demyelinative diseases and to analyze its diagnostic value to neuromyelitis optica(NMO).Methods The study included 10 NMO patients,10 longitudinally extensive transverse myelitis (LETM)patients,30 multiple sclerosis(MS)patients and 30 healthy people as control.The level of serum NMO-IgG was detected by ELISA.Results The positive ratios of serum NMO-IgG were 60%(6/10)in NMO patients,50%(5/10)in LETM patients,10%(3/30)in MS patients and 0(0/30)in healthy people.The positive ratios in NMO and LETM were higher than that in MS(＜0.05).The sensitivity of NMO-IgG was 60%for NMO diagnosis,and its specificity reached 95%.Conclusions The positive ratios of serum NMO-IgG were higher in NMO and LETM patients,which supports the opinion that they both belong to neuromyelitis optica spectrum disorders(NMOSD),the diagnosis of NMO should be based on clinical characteristics and MRI manifestation rather than NMO-IgG,but it can help to differentiate NMO from other CNS diseases.

neuromyelitis optica；multiple sclerosis；aquaporin-4

R744.52

：A

：1006-2963(2014)05-0332-03

2014-01-02)

(本文编辑：时秋宽)

10.3969/j.issn.1006-2963.2014.05.007

110004中国医科大学附属盛京医院神经功能科(陈淑媛)；110001中国医科大学附属第一医院神经内科(吴哲、付贺飞、张凤娇)

吴哲,Email：zhe_wu@sina.com