长效乳酸环丙沙星注射液的急性毒性试验和安全评价

黄迪海 张从敬 刘 霞 徐秀荣 盛晓丹 陈宗静 秦卓明③*（①山东省健牧生物药业有限公司 济南 250100 ②济南市动物生物药品工程技术研究中心 济南③山东省农业科学院家禽研究所 济南)

长效乳酸环丙沙星注射液的急性毒性试验和安全评价

黄迪海①②张从敬①②刘 霞①②徐秀荣①②盛晓丹①②陈宗静①②秦卓明①②③*（①山东省健牧生物药业有限公司 济南 250100 ②济南市动物生物药品工程技术研究中心 济南③山东省农业科学院家禽研究所 济南)

通过对昆明小鼠肌肉注射和皮下注射缓释长效乳酸环丙沙星注射液，对其急性毒性进行评价。结果表明：小鼠肌肉注射及皮下注射给药的LD50分别为839.27mg/kg、2504.38mg/kg，95%的可信限分别为750.76mg/kg～938.21mg/kg、1976.97mg/kg～3172.49mg/kg，符合低毒标准，说明该产品皮下注射和肌肉注射使用安全。

长效 乳酸环丙沙星 急性毒性

乳酸环丙沙星(Ciprofloxacin Lactate)是第三类人工合成喹诺酮类抗菌药，具有广谱抗菌活性，广泛应用于畜牧养殖，主要用于大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏杆菌、巴氏杆菌及金黄色葡萄球菌等致病菌感染。兽医临床正在使用的乳酸环丙沙星注射液是其传统制剂，肌肉注射吸收迅速而完全，生物利用度猪为91.9%，奶牛为82%，半衰期奶牛为5.9h，猪为4.6h[1]，主要存在药物有效浓度维持时间短、使用次数多、大家畜不易注射等问题。为解决上述问题，我们利用骨架缓释技术研制出其新型缓释长效制剂，具有延长药物作用时间、降低毒副作用、节约人力成本等优点。为研究缓释长效乳酸环丙沙星注射液的急性毒性和安全性，进行了该试验，以期为其在兽医临床上的开发和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验药品 长效乳酸环丙沙星注射液，规格10ml：0.4g，由山东省健牧生物药业有限公司提供，批号：20111101、20111102、20111103。

1.2 试验动物 清洁级昆明种健康小鼠，6～8周龄，体重18～22g，雌雄各半，购自山东大学实验动物中心。试验期间小鼠雌雄分笼，全价饲料喂养，室温20～25℃，相对湿度40%～70%，人工昼夜(12h白昼，12h黑夜)。

1.3 试验方法 取小鼠100只随机分成10组，每组10只，雌雄各半，1～5组皮下注射给药，6～10组肌肉注射给药。在预试验的基础上确定各组小鼠用药量，按改良寇氏法设置组间剂量比r1(皮下注射)为1∶0.71，r2(肌肉注射)为1∶0.84。1～5组用药剂量分别为4800.00、3600.00、2700.00、2025.00、1518.75mg/kg；6～10组用药剂量分别为1000.00、840.00、705.60、592.70、497.87mg/kg。用生理盐水将药物溶解至合适的浓度，并分别按0.2ml/10g体重、0.1ml/10g体重皮下注射和肌肉注射。

1.4 观察指标 给药后，即刻观察动物外观体征、饮食、行为活动及动物死亡情况，连续观察7d并记录观察结果。对死亡动物进行病理剖检，记录病变情况。

1.5 结果计算 用改进寇氏法计算半数致死量(LD50)及其95%可信区间。公式[2]：LD50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)] (1)，LD50的95%可信限Sx50) (3)。式中，Xm为最大剂量的对数值；i为相邻两组剂量对数值之差；p为各组的死亡率，用小数表示；q为各剂量组存活率，q=1-p；∑p为各组动物死亡率的总和；n为各组动物数；Sx50为lgLD50的标准误差。

2 结果与分析

2.1 急性毒性试验结果 见表1。

表1 缓释长效乳酸环丙沙星对小鼠毒性 (mg·kg-1、%)

2.2 中毒症状及死亡小鼠剖检观察 各组小鼠给药后即见活动减少，呆滞，畏寒扎堆，抽搐，食欲减退等症状。用药后3h各组小鼠相继出现死亡，死前精神极度沉郁，食欲废绝，抽搐，未见明显挣扎。死亡时间多集中于4～10h，死亡动物与其性别无明显相关性。用药后24h，未死亡的小鼠精神、食欲逐渐恢复。继续观察7d，未见小鼠再有死亡，体重增长在正常范围内，但是皮下和肌肉注射处出现不同程度的脱毛现象。

剖检各死亡小鼠，2、3、4组皮下注射处有明显的组织坏死和溃烂。肌肉注射组织器官无肉眼可见的明显病变。

2.3 LD50的计算 采用改良寇氏法进行计算，皮下注射LD50=2504.38mg/kg，其95%的可信限为1976.97～3172.49 mg/kg；肌肉注射LD50=839.27mg/kg，其95%的可信限为750.76～938.21mg/kg。

3 结论

本试验表明，缓释长效乳酸环丙沙星注射液按毒性分级标准属于低毒性药物[2]，皮下和肌肉注射分别为临床推荐用量(10mg/kg)的250倍和84倍，临床使用安全。李孝文等[3]报道，复方环丙沙星乳剂腹腔注射最大耐受量为8181.8mg/kg，为复方环丙沙星注射液LD50(LD50为1058.93 mg/kg)的7.726倍，毒性显著降低。本试验也证明了将乳酸环丙沙星制成缓释长效制剂后肌肉注射和皮下注射给药毒性降低[4]。

本试验发现，大剂量注射环丙沙星后，导致动物皮下组织坏死，在临床应用时应引起注意。

[1] 林辉, 中药缓释制剂的发展[J]. 海峡药学, 2002, 14(5)∶ 114-117.

[2] 兽药急性毒性试验(LD50测定)指导原则[S]. 中华人民共和国农业部公告第1247号. 2009.

[3] 李孝文, 李佳缘, 杨亮等. 复方环丙沙星乳剂急性毒性试验[J]. 动物医学进展, 2010, 31(11)∶ 56-58.

[4] 林赴田, 余兰香, 于锋等. 环丙氟哌酸的药效学和毒理学研究[J], 中国抗生素杂志, 1990(4).

S859.79+4

A

1007-1733(2014)04-0011-02

2014–01–04）

济南市企业自主创新计划项目（编号∶201003070）

*通讯作者