ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较

雷莉辉 乔立东 关文怡 于凤芝 （北京农业职业学院 北京 房山 102442）

ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较

雷莉辉 乔立东 关文怡 于凤芝*（北京农业职业学院 北京 房山 102442）

应用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒和血凝抑制试验(HI)同时测定162份免疫鸡血清样品。研究ELISA方法检测鸡血清的相关关系，结果表明，ELISA和HI两种方法的阳性符合率为97.3%，阴性符合率为95.2%，阴阳性总体符合率为96.9%。这说明ELISA方法作为一种敏感、特异、快速的血清学诊断方法，适用于临床大规模鸡场新城疫的检测。

鸡新城疫 抗体 检测

鸡新城疫(newcastl disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的鸡呼吸道、消化道黏膜出血为典型病变的一种急性、高度接触性及致死性传染病，目前已成为危害养鸡业的主要疾病之一[1]。在接种新城疫疫苗或受到新城疫病毒野毒攻击后一段时间内，鸡体内会产生中和性抗体和血凝抑制抗体。多种血清学方法可用来检测鸡血清中产生的抗NDV抗体，如血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散试验(AGP)、病毒中和试验(VN)及酶联免疫吸附试验(ELISA)等。随着近年来酶免疫技术的快速发展，用ELISA方法代替传统的HI法来检测NDV抗体已经成了必然的趋势。本研究中，采用ELISA方法对162份HI滴度不同的血清标本和ND的标准阴性、阳性血清进行了NDV抗体检测，进而分析了HI法和ELISA法检测鸡血清中NDV抗体的相关关系。

1 材料与方法

1.1 试剂材料

鸡新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清、阴性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司；禽新城疫抗体检测试剂盒，购自北京爱德士元享生物科技有限公司； 待检血清162份，血清来平谷、怀柔、房山、延庆、密云等6个区县，均从消毒过的翅静脉采集，每份3～4ml，分离血清置-20℃条件下备用。

1.2 方法

1.2.1 HI试验方法 采用微量血凝抑制试验，按GB/16550-2008进行操作。只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在一个稀释度范围内，并且所用的阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。

1.2.2 ELISA方法 按禽新城疫抗体检测试剂盒说明书进行操作。正常情况下，当阴性对照孔OD值≤0.1，阳性对照孔OD值≥0.6时试验成立。

1.3 ELISA和HI方法的检测符合率分析[2]

HI法检测为阳性的鸡血清样品中ELISA方法的阳性检出率为二者的阳性符合率，HI法检测为阴性的鸡血清样品中ELISA方法的阴性检出率为二者的阴性符合率，两种检测方法同为阴性或阳性的血清样品数占总检测样品数的比率为二者的总体符合率。

1.4 待检样品的检测

利用两种方法对162份HI滴度不同的样品(其中124份阳性血清样品和38份阴性血清样品)进行检测，利用统计学方法对检测结果进行相关性分析。

2 结果与分析

按照ELISA试剂盒提供的临界点判定值，用ELISA方法与HI法分别对162份常规血清样品进行检测，结果见附表。

附表 ELISA方法对HI血清样品的检测结果 (%)

由表中可以看出，ELISA和HI两种方法的阳性符合率为97.3%，阴性符合率为95.2%，阴阳性总体符合率96.9%。

3 讨论

ELISA方法和血凝抑制试验方法简单易学，对养鸡场及中小规模养殖户来说，掌握适合自己的一种方法，就可以节约鸡新城疫抗体检测的成本，并且能实时监测本场鸡新城疫病免疫状况，在临床上对鸡场鸡新城疫病的流行起着很好的预防效果。本文采用ELISA方法和血凝抑制试验(HI)对北京市延庆、怀柔、密云等5 个区县种鸡场的162 份蛋鸡血清进行了新城疫抗体检测，检测结果显示各鸡场的抗体水平不尽相同。本研究得出的间接ELISA和HI两种方法检测ND抗体效价的符合率较高，阳性符合率为97.3%，阴性符合率为95.2%，总体符合率为96.9%，表明这两种检测方法显著相关，这与陈福勇等[3]的研究结果是一致的。而比张国中等[2]研究得出的相关性要高一些。

在养禽生产中，各养禽场通常都是以HI抗体效价作为对ND的免疫力指标，许多有用的试验数据也都是根据HI试验而得到的，比如当前认为HI抗体效价大于或等于8log2时可以基本保证鸡群在ND强毒攻击下获得完全的保护，HI抗体效价大于12log2时的具有疾病诊断意义，提示鸡群发生或曾经发生过ND感染等等[4]。这些有用的试验数据对于养禽生产和日常免疫具有重要的临床指导意义，因此ELISA要想取代HI方法作为ND抗体检测的主要方法，其具有保护意义的ELISA临界值、能够区分感染与免疫的临界值等指标都需要在实践中不断的通过具体的试验和详实的数据来进行探索和求证。

本研究得出的间接ELISA和HI两种方法检测的抗体是有所不同的，HI试验检测的主要是NDV血凝素抗体，而ELISA试验检测的是NDV全抗体，包括血凝素(HA)融合蛋白9F)、基质蛋白(M)、核蛋白(NP)等等[8]，两种方法相比ELISA可能更有助于真实地反映机体的全部免疫应答效果。试验中对162份临床样本进行了平行检测，得出两种方法检测NDV抗体的阴阳性总体符合率为96.9%。其中用ELISA 和HI方法检测的162份样本中仅有5份检测结果出现不同，这也说明在一定范围内间接ELISA和HI两种方法有着较好的对应关系。结论表明HI法检测ND抗体方法耗时长、灵敏度低，且经验依赖性强。ELISA法检测ND抗体，方法更简便实用，其特异性、敏感性均优于HI检测方法，是一种敏感、特异、快速的血清学诊断方法，适用于临床样本的大规模检测。

[1] 唐慧稳. 非典型鸡新城疫的特点及防制研究[J]. 畜牧兽医科技信息, 2007, 32-34.

[2] 张国中, 胡旭东, 秦春芝等. 间接ELISA与HI检测鸡新城疫病毒抗体的相关性分析[J]. 中国家禽, 2007, (4)∶ 14-16.

[3] 陈福勇, 吴玉萍等. 间接ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体相关性[J]. 动物医学进展, 2004, 25(3)∶ 88-90.

[4] 黎豢洪, 橱克军. 鸡新城疫的预防与控制[J]. 养禽与禽病防治, 2006(11)∶ 34-35.

[5] 胡率领, 郜国涛, 夏晓惠等. 免疫鸡群发生新城疫的原因分析及防制措施[J]. 河南农业科学, 2006(12)∶ 95-97.

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1007-1733(2014)04-0009-02

2014–01–06）

北京农业职业学院技术研发与示范推广(项目编号：XY-YF-13-24)

*通讯作者