慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究

王成荣，卞廷松，史兵伟，谈小林，杨凯

(1.南京中医药大学，江苏南京 210046；2.常州市中医医院男科，江苏常州 213003；3.常州市中医医院检验科，江苏常州 213003)

·论著·

慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中IL-6和IL-22水平的研究

王成荣1，卞廷松2，史兵伟3，谈小林2，杨凯1

(1.南京中医药大学，江苏南京 210046；2.常州市中医医院男科，江苏常州 213003；3.常州市中医医院检验科，江苏常州 213003)

目的比较慢性非细菌性前列腺炎(CAP)患者与正常人前列腺液(EPS)中细胞因子IL-6和IL-22的水平。方法选择24例CAP患者为实验组和10例健康人为对照组，分别取两组受试者的EPS，采用ELISA法检测其IL-6和IL-22水平。结果实验组IL-6值11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)，IL-22值(8.64±2.58)pg/ml；对照组IL-6值3.52 pg/ml(2.76～8.32 pg/ml)，IL-22值(9.31±2.26)pg/ml。实验组IL-6水平显著高于对照组(P＜0.01)，但两组之间的IL-22水平差异无统计学意义(P＞0.05)。结论IL-6可能与CAP之间存在一定的关系，IL-6可能具有调节前列腺局部免疫反应的作用；而IL-22与CAP之间无明显联系，我们推测IL-22可能不参与前列腺的局部免疫反应。

慢性非细菌性前列腺炎；IL-6；IL-22

慢性非细菌性前列腺炎(Chronic abacterial prostatitis，CAP)是泌尿男性科常见病和多发病，其对男性患者的生活质量以及精神有着较大影响。目前国内外研究者对其病因、发病机制的认识还略显不足，国内外诸多研究已表明炎症因子与慢性非细菌性前列腺炎之间有着较为密切的关系[1-2]。本实验通过比较CAP患者与正常人前列腺液(EPS)中细胞因子IL-6、IL-22的水平，探讨IL-6、IL-22与CAP之间的关系，旨为在临床泌尿男性科医生对于此病的诊断、治疗及预后提供一些理论依据，以便更好地服务临床，服务患者。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2009年7月至2011年1月来南京中医药大学附属常州市中医医院男科门诊就诊的CAP患者24例为实验组，年龄最小20岁，最大47岁，平均28.8岁，选择正常人10例作为对照组，年龄最小27岁，最大40岁，平均30.7岁。

1.1.1 诊断标准参照吴阶平主编的《吴阶平泌尿外科学》制订。①症状：不同程度的尿频、尿急、尿痛、尿不尽感，尿道灼热，于晨起、尿末或大便时尿道偶有少量白色分泌物流出，会阴部、外生殖器区、下腹部、耻骨上区、腰骶及肛门周围坠胀、疼痛；②前列腺触诊：前列腺表面不平或不对称；质地不均匀，可触及炎性结节；有局限性压痛；③下尿路两杯法细菌培养阴性，EPS镜检：卵磷脂小体减少或消失。凡具备①～③中任何一项即可确诊。

1.1.2 纳入标准①符合上述诊断标准；②病程≥3个月者；③年龄18～50岁。

1.1.3 排除标准①年龄在18岁以下和50岁以上者；②有良性前列腺增生症、前列腺肿瘤、尿路疾病及严重神经官能症患者；③合并有心血管、脑血管、肝肾和造血系统等严重原发性疾病以及精神病患者；④急性前列腺炎以及特异性前列腺炎患者；⑤离心尿白细胞(WBC)＞5个/HP；⑥以局部疼痛为主要表现的患者应注意排除下腹、会阴、腰骶等部位的其他病变，如输尿管结石、精索静脉曲张等。

1.2 标本的收集与保存先用新洁尔灭消毒尿道外口，然后让患者取膝胸位，医生经直肠按摩采集前列腺液标本，收集于无菌的痰培养皿中，最后移于1.5 ml离心管中，-80℃冷冻保存。

1.3 指标检测采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测前列腺液中IL-6、IL-22的浓度。试剂分别为人白介素-6(IL-6)，人白介素-22(IL-22)ELISA试剂盒，均购自上海西唐生物科技有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 原理本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人IL-22/抗人IL-6单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IL-22/IL-6与单抗结合，加入生物素化的抗人IL-22/抗人IL-6，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450 nm处测OD值，IL-22和IL-6浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线分别求出标本中IL-22以及IL-6浓度。

1.4.2 试剂盒组成(1)酶标板；(2)酶标抗体工作液；(3)0×标本稀释液；(4)20×浓缩洗涤液；(5)标准品；(6)底物工作液；(7)第一抗体工作液；(8)终止液。

1.4.3 试剂的准备①10×标本稀释液用蒸馏水作1：10倍稀释。②标准品液配制：使用前加入2 ml蒸馏水混匀，IL-6配成10 ng/ml的溶液(IL-22配成20 ng/ml的溶液)。取8个1.5 ml离心管，第一管加标本稀释液900 μl，第二至第八管加入标本稀释液500 μl。在第一管中加入20 ng/ml的标准品溶液100 μl置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500 μl，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500 μl弃去。第八管为空白对照。③洗涤液：用重蒸水1：20稀释。

1.4.4 检测程序①加样：每孔各加入标准品或待测样品100 μl，将反应板充分混匀后置37℃40 min。②洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上印干。③每孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50 μl (空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20 min。④洗板：同前。⑤每孔加酶标抗体工作液100 μl。将反应板置37℃10 min。⑥洗板：同前。⑦每孔加入底物工作液100 μl，置37℃暗处反应15 min。⑧每孔加入100 μl终止液混匀。⑨30 min内用酶标仪在450 nm处测吸光值。

1.4.5 结果计算与判断所有OD值减除空白值后再行计算。IL-6以标准品1 000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0(pg/ml)为横坐标，OD值为纵坐标[(IL-22以标准品2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、0(pg/ml)为横坐标，OD值为纵坐标]，使用软件作图，画出标准曲线。最后根据样品OD值计算出相应含量。

1.5 统计学方法所有数据均使用SASS19.0软件进行统计学处理，计量资料正态数据以均数±标准差()表示，其组间比较采用成组t检验，偏态数据以M(P25～P75)表示，其组间比较采用Wilcoxon秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

与对照组比较，实验组EPS中的的IL-6水平显著高于对照组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)，而IL-22水平则低于对照组，但差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 两组受试者的EPS中IL-6和IL-22水平比较(pg/ml，)

表1 两组受试者的EPS中IL-6和IL-22水平比较(pg/ml，)

3 讨论

CP患者的EPS或精液中可以出现某些细胞因子水平的变化，EPS中细胞因子水平与慢性前列腺炎有一定的相关性，这些细胞因子的变化可以更早、更准确地体现前列腺的炎症状况。IL-6是机体许多细胞产生的一种具有多种生物学活性的细胞因子,是机体内复杂细胞因子网络中的重要成员。体内主要由巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、角质细胞核T细胞等产生IL-6。IL-6主要通过自分泌或旁分泌产生，其能增强T细胞功能和IL-2的产生，具有免疫激活作用，可诱导中性粒细胞浸润到前列腺组织内，使T、B细胞及NK细胞广泛激活，促使中性粒细胞释放溶酶体酶，从而加剧局部炎症细胞浸润，促进炎症的形成[3]。IL-6的生物学功能在正常情况下调节免疫应答,然而在病理情况下，其浓度的升高可引起免疫病理损伤。因此，患者体内IL-6的水平过高表达，会对前列腺组织造成损伤。此外，IL-6对肝细、神经组织、造血系统也会有广泛影响，具有抗肿瘤效应。Paulis等[4]曾对207例慢性前列腺炎患者前列腺液及精浆中的一些细胞因子水平进行研究，他发现与正常人相比，慢性前列腺炎患者的IL-6水平显著升高，因此其认为IL-6是临床诊断慢性前列腺炎比较好的指标之一。韦超等[5]通过大鼠制造CAP模型，发现CAP大鼠的前列腺组织内IL-6是高水平表达的，其进一步证实了IL-6参与了前列腺组织炎症的形成或加剧了炎症反应。因此我们认为IL-6能在一定程度上反映前列腺的炎症情况。

IL-22最先于2000年由Dumoutier等[6]用IL-9刺激一株T淋巴瘤细胞系所发现。人的IL-22主要是由T细胞产生，包括Th22细胞、Th17细胞，同时在NK细胞中可少量产生，而在巨噬细胞、成熟或不成熟的DC，以及非免疫细胞中都没有发现有IL-22的表达，目前的研究表明IL-22主要靶向于消化道、皮肤与呼吸器官的非造血细胞，它在黏膜固有免疫中起重要作用[7-8]。IL-22的受体仅表达于表皮细胞和一些器官的纤维母细胞表面，现如今研究IL-22功能最透彻的疾病是银屑病[7]。IL-22的受体复合物是以IL-10R2与IL-22R1构成的异源二聚体，其中IL-10R2广泛表达在各组织中，IL-22R1则主要表达在皮肤、肾脏、胰腺、肝脏、小肠，而在T细胞、NK细胞和单核细胞中不表达，因此IL-22具有独特的作用，它由免疫细胞产生，但并不作用于这些免疫细胞，而是作用于组织细胞。我们检索了一些文献，在慢性前列腺炎方面目前还未发现有关IL-22的研究报道。因此，我们选择了IL-6和IL-22两种因子作为研究对象，拟分别从IL-6和IL-22方面来研究它们与CAP之间的关系，由于IL-6在CAP中的作用，这方面已有一些研究。因此，我们此次最主要的是研究探讨IL-22是否与CAP的发病之间有联系。

研究结果显示，CAP患者EPS中IL-6水平较之正常人明显升高(P＜0.01)，结合前人研究进一步说明了IL-6与CAP之间的密切联系，其参与了前列腺组织炎症的形成或者是加剧了炎症反应；而两组之间IL-22水平差异无统计学意义，提示IL-22与CAP之间可能没有联系，我们推测IL-22可能不参与前列腺的局部免疫反应。IL-22与慢性非细菌性前列腺炎之间关系到底是什么，其中缘由耐人寻味，有待于我们以及广大同仁的进一步研究探讨。

[1]谢作钢,陈盛镱,徐潘,等.不同证型慢性非细菌性前列腺炎前列腺液细胞因子水平分析[J].浙江中医杂志,2013,1:12-13.

[2]郭辉,徐月敏,叶章群,等.细胞因子及热休克蛋白在慢性前列腺炎患者精浆中的含量及其临床意义[J].中华男科学杂志,2012, 18(12):1088-1092.

[3]郭应禄,李宏军.前列腺炎[M].2版.北京:人民军医出版社, 2007:347.

[4]Paulis G,Conti E,Voliani S,et a1.Evaluation of the cytokines in genital secretions of patients with chronic prostatitis[J].Arch ltal UrolAndrol,2003,75(4):179-186.

[5]韦超,刘朝东,王洪志.慢性非细菌性前列腺炎CD4+T淋巴细胞及IL-6的表达及意义[J].中国现代医学杂志,2009,19(3): 395-397.

[6]Dumoutier L,Louahed J,Renauld JC.Cloning and characterization of IL-10-related T cell-derived inducible factor(IL-TIF),a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9[J].J Immunol,2000,164(4):1814-1819.

[7]孙奇.IL-22—炎症性疾病关键因子[J].免疫学杂志,2011,27 (9):821-825.

[8]刘晓斐,石云,胡志德,等.IL-22诱导胃上皮细胞释放炎症因子并促进淋巴细胞趋化[J].现代免疫学,2012,32(5):371-375.

Levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion of patients with chronic abacterial prostatitis.

WANG Cheng-rong1,BIAN Ting-song2,SHI Bing-wei3,TAN Xiao-lin2,YANG Kai1.
1.Nanjing University of TCM,Nanjing 210046,Jiangsu,CHINA;2.Department of Andrology,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu, CHINA;3.Department of Clinical Laboratory,Changzhou Hospital of TCM,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo compare the levels of IL-6 and IL-22 in expressed prostatic secretion(EPS)of between patients with chronic abacterial prostatitis(CAP)and healthy men.MethodsTwenty-four patients with CAP were chosen as experimental group,and 10 healthy people were chosen as control group.The levels of IL-6 and IL-22 in EPS were detected by ELISA.ResultsThe levels of IL-6 and IL-22 of experimental group were 11.65 pg/ml(4.42～17.78 pg/ml)and(8.64±2.58)pg/ml.The levels of IL-6 and IL-22 of control group were 3.52 pg/ml (2.76～8.32 pg/ml)and(9.31±2.26)pg/ml.Compared with the control group,the levels of IL-6 in experimental group was significantly higher(P＜0.01),and the levels of IL-22 in experimental group showed no statistically significant difference(P＞0.05).ConclusionThere may be a certain relation between IL-6 and CAP.IL-6 may regulate local immune response of prostate.There is no obvious relation between IL-22 and CAP,which indicates that IL-22 may not participate in the local immune response of prostate.

Chronic abacterial prostatitis(CAP);IL-6;IL-22

R697+.33

A

1003—6350（2014）22—3314—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1298

2014-04-30)

江苏省中管局项目(编号：LB09100)

卞廷松。E-mail：bst232370@163.com