基于Bcl-2/Bax研究大柴胡汤合承气汤恢复重症胰腺炎肠黏膜屏障的作用*

赵星海 陈 晖

（南京中医药大学附属昆山市中医院，江苏 昆山 215300）

基于Bcl-2/Bax研究大柴胡汤合承气汤恢复重症胰腺炎肠黏膜屏障的作用*

赵星海 陈 晖△

（南京中医药大学附属昆山市中医院，江苏 昆山 215300）

目的 通过测定模型大鼠肠黏膜Bcl-2、Bax的含量，研究大柴胡汤合承气汤恢复重症胰腺炎肠黏膜屏障的作用。方法 将健康SD大鼠100只随机分为空白对照组、模型对照组，大柴胡汤合承气汤低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组，测定肠黏膜Bcl-2、Bax含量。结果 高剂量组Bcl-2阳性率显著高于模型组（P=0.004），中剂量组Bcl-2阳性率高于模型组（P=0.022），低剂量组的Bcl-2阳性率与模型组相仿（P=0.168）；高剂量组Bax阳性率低于模型组（P=0.010），中、低剂量组Bax阳性率与模型组相仿（P=0.113，P=0.342）。结论 大柴胡汤合承气汤治疗重症胰腺炎，可以减少肠黏膜细胞的凋亡，从而起到恢复肠黏膜屏障的作用。

重症胰腺炎 Bcl-2/Bax 大柴胡汤 承气汤 肠黏膜屏障

重症急性胰腺炎（SAP）病情危重，进展快而变化多端，并发症多、病死率高而严重威胁患者生命［1-2］。目前研究表明，SAP时的微循环障碍是胰腺及胰外器官损害的重要原因之一，而胃肠道又是最易受累的胰外器官之一，肠黏膜屏障功能受损，会加重疾病的发展，增加死亡率，肠上皮细胞凋亡的增加是肠屏障功能减弱的主要原因，故减少肠上皮细胞凋亡可以恢复肠屏障功能，减少SAP的死亡率，提高临床治愈率［3］。本研究从中医基础理论出发，使用大柴胡汤合承气汤，通过测定模型大鼠肠黏膜Bcl-2/Bax的含量，研究大柴胡汤合承气汤恢复重症胰腺炎肠黏膜屏障的作用，为治疗SAP提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD大鼠100只，雌雄各半，体质量（150±10）g，由南京中医药大学的实验动物中心提供。

1.2 药剂 柴胡10g，黄芩10g，芍药30g，制半夏10g，生姜3片，枳实1g，大黄6g，黄连6g，厚朴10g，大枣6枚，制备成中药制剂，浓度含生药0.45g/mL。

1.3 造模 给予大鼠3％戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔内注射麻醉成功后，固定于手术台上，颈部、腹部和腹股沟处去毛，消毒皮肤，铺无菌孔巾，取上腹部正中切口，切开皮肤、皮下及腹白线，保护切口，找到并提起十二指肠，显露胰胆管的全程，近十二指肠处胆管用无创伤性动脉夹夹闭。以磨钝、稍弯曲的4.5号针头从胰胆管靠肝门处穿刺胰管，向胰管内注射3.5％牛磺胆酸钠（0.1mL/100g，0.2mL/min），穿刺完毕后立即用一小动脉夹夹闭穿刺处、以防胰瘘。5min后见整个胰腺明显充血、水肿、片状出血，证实急性胰腺炎动物模型成立，移去两小动脉夹，将肠管归复原位，4号丝线分层连续缝合切口，关闭腹腔。

1.4 用药 空白对照组不给任何药物；模型对照组给予0.9％氯化钠注射液20ml/kg/次灌胃；治疗低剂量组（含生药0.15g/mL）每次20mL/kg灌胃；治疗中剂量（含生药0.30g/mL）每次20mL/kg灌胃；治疗高剂量（含生药0.45g/mL）每次20mL/kg灌胃。

1.5 给药及取材方法 治疗组分别于造模前2h、造模后1h、3h予中药灌胃。对照组和模型组均于相同时间点予等量的0.9％氯化钠注射液灌胃。各组大鼠分别分批于造模后24h取材，取小肠肠组织清洗后固定。

1.6 肠黏膜组织Bcl-2、Bax蛋白的检测 运用免疫组化SP法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。阳性标准：Bcl-2、Bax阳性细胞表现为细胞浆出现黄色或棕黄色着色颗粒状，参照CAIDE等的计数方法，放大400倍镜下计数5个视野，阳性细胞率=阳性细胞数／总细胞数×100％。阳性细胞数5％～25％为（+），阳性细胞数在26％～50％为（++），阳性细胞数在51％～75％为（+++），阳性细胞数＞75％为（++++）；阴性（-）指无角质形成细胞着色或角质形成细胞着色＜5％。

1.6 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件处理。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肠黏膜Bcl-2蛋白的表达 见表1。高剂量组的阳性率显著高于模型组（P=0.004），中剂量组的阳性率高于模型组（P=0.022），低剂量组的阳性率与模型组相仿（P=0.168）。

表1 各组大鼠肠黏膜Bcl-2蛋白的表达

2.2 各组大鼠肠黏膜Bax蛋白的表达 见表2。高剂量组的阳性率低于模型组（P=0.010），中、低剂量组的阳性率与模型组相仿（P=0.113，P=0.342）。

表2 各组大鼠肠黏膜Bax蛋白的表达

3 讨论

SAP时，由于活性氧（ROS）、炎性介质（包括细胞因子）和内毒素等多重因素作用，肠黏膜屏障功能受损，肠黏膜屏障在SAP的发展转归起着举足轻重的作用，通过减少肠道上皮细胞的凋亡来干预肠黏膜屏障成为防治的理想选择［4］。

B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）家族的成员是细胞凋亡的主要调节因子。Bcl-2蛋白家族细胞凋亡抑制因子有Bcl-2、Bcl-XL等；细胞凋亡促进因子有Bax等。Bcl－2家族是最著名的致/抗凋亡基因家族，它主要通过直接调节CytoC的释放和线粒体的能量转换来介导细胞凋亡；此外，也能通过调节caspases发挥作用。Bax表达增加时，形成同源二聚体可诱导细胞凋亡，而Bcl-2表达上升时，其可以竞争性地与Bax形成异源二聚体，从而抑制Bax-Bax同源二聚体所诱发的细胞凋亡。Bcl-2与Bax蛋白水平的高低与凋亡调控有直接相关性，Bcl-2增高抑制细胞凋亡，Bax增高则促进细胞凋亡［5］。

中医学认为SAP属“痹心痛”、“结胸”等范畴，病因多由外邪侵袭，暴饮暴食或胆管阻塞，肝气郁积，肝气横逆而生内毒，邪气蕴积，终致气滞、腑气痞塞而生诸证。本研究依据其中医发病机制，选用具有理气止痛、通里攻下功用的《伤寒论》经典方大柴胡汤合承气汤，方中重用柴胡为君药，配臣药黄芩、黄连和解清热，以除少阳之邪；轻用大黄配枳实、厚朴以内泻阳明热结，行气消痞，亦为臣药。芍药柔肝缓急止痛，与大黄相配可治腹中实痛，与枳实相伍可以理气和血，以除心下满痛；半夏和胃降逆，配伍大量生姜，以治呕逆不止，共为佐药。大枣与生姜相配，能和营卫而行津液，并调和脾胃，功兼佐使。该方治疗SAP模型大鼠，能够提高肠黏膜Bcl-2蛋白的含量，减少肠黏膜Bax蛋白的含量，从而达到减少肠黏膜细胞凋亡的目的，起到恢复肠黏膜屏障的作用，对SAP有一定的治疗作用。

［1］Mentula P，Leppniemi A.Position paper：timely interventions in severe acute pancreatitis are crucial for survival［J］.World J Emerg Surg，2014 Feb，10；9（1）：15.

［2］ Haney JC，Pappas TN.Necrotizing pancreatitis：diagnosis and management［J］.Surg Clin North Am，2007；87（10）：1431-1446.

［3］ Sun X，Shao Y，Jin Y.Melatonin reduces bacterial translocation by preventing damage to the intestinal mucosa in an experimental severe acute pancreatitis rat model［J］.Exp Ther Med，2013 Dec，6（6）：1343-1349.

［4］ Lu Y，Yu Y，Yang M.Protective effects of saizen in combination with stilamin on intestinal mucosa of a rabbit model of severe acutepancreatitis［J］.Pancreas，2013 Jan，42（1）：102-107.

［5］ Coleman CB，McGraw JE，Feldman ERA.Gammaherpesvirus Bcl-2 ortholog blocks B cell receptor-mediated apoptosis and promotes the survival of developing B cells in vivo［J］.PLoS Pathog，2014 Feb 6，10（2）：1-19.

Research on the Role of Dachaihu Decoction Combined with Chengqi Decoction Restoring Intestinal Mu-cosal Barrier in Patients with Severe Pancreatitis Based Bcl-2/Bax

ZHAO Xinghai，CHEN Hui.
Kunshan TCM Affilated to Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Kunshan 215300，China

Objective：To study the effect of Dachaihu decoction and Chengqi decoction restoring intestinal mucosal barrier of patients with severe pancreatitis by determining the content of Bcl-2 and Bax of intestinal mucosa.Methods：SD rats were randomly divided into blank control group，model control group，low-dose treatment group，medium-dose treatment group and high-dose treatment group.Bcl-2 and Bax contents in intestinal mucosa were measured.Results：Bcl-2 positive rate in high-dose group was significantly higher than that in model group（P=0.004），Bcl-2 positive rate in medium-dose group was higher than that in model group（P=0.022）.Bcl-2 positive rate of low-dose group was similar to that of model group（P=0.168）.Bax positive rate of high-dose group was lower than that of model group（P=0.010）.Bax positive rates in medium and low-dose groups were similar to that of model group（P=0.113，P=0.342）.Conclusion：Dachaihu decoction and Chengqi decoction treating severe pancreatitis can reduce apoptosis in intestinal cells，thus play a role in restoring the intestinal mucosal barrier.

Severe pancreatitis；Bcl-2/Bax；Dachaihu decoction；Chengqi decoction；Mucosal barrier

R657.5+1

B

1004-745X（2014）10-1841-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.10.027

2014-07-10）

江苏省昆山市2014年市级指令性课题

△通信作者