HPLC法测定冰樟桉氟轻松贴膏中醋酸氟轻松含量

唐 杨，张 锦，程辉跃

(重庆市食品药品检验所/重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)



HPLC法测定冰樟桉氟轻松贴膏中醋酸氟轻松含量

唐 杨，张 锦，程辉跃

(重庆市食品药品检验所/重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121)

目的：建立HPLC法测定冰樟桉氟轻松贴膏中醋酸氟轻松的含量。方法：采用Diamonsil C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱，流动相：甲醇-乙腈-水(60∶10∶30)，流速：1.0mL·min-1，检测波长：240nm，柱温：30℃。结果：醋酸氟轻松在3.19～63.76μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为96.8%(n=9)，RSD为2.0%。结论：该方法专属、准确，可用于冰樟桉氟轻松贴膏中醋酸氟轻松的含量测定。

高效液相色谱法；冰樟桉氟轻松贴膏；醋酸氟轻松；含量测定

冰樟桉氟轻松贴膏是由冰片、樟脑、桉叶油、醋酸氟轻松和水杨酸甲酯制成的复方制剂，用于治疗神经性皮炎、结节痒疹等瘙痒性皮肤病，其中主药醋酸氟轻松属于肾上腺皮质激素，起抗炎作用。冰樟桉氟轻松贴膏现行质量标准为国家食品药品监督管理局药品标准(试行)WS-10001-(HD-0112)-2002，各国药典均未收载；但现行质量标准中对醋酸氟轻松仅作薄层鉴别，未作定量检测。为完善该品种的质量评价体系，笔者参考文献[1]，建立HPLC测定该制剂中醋酸氟轻松含量的方法。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，瑞士梅特勒电子天平；醋酸氟轻松对照品(批号：100010-200507，中国食品药品检定研究院，含量为100.0%)；冰樟桉氟轻松贴膏(批号：101203、101205、101206，A厂提供；批号：20101001、20101401、20101601，B厂提供；处方：含醋酸氟轻松0.25g/kg；规格：4cm×6.5cm)；阴性对照样品(B厂提供)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Diamonsil C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：甲醇-乙腈-水(60∶10∶30)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：240nm；柱温：30℃；进样量：20μL。

2.2 对照品溶液制备

取醋酸氟轻松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中约含16μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取本品5片，除去盖衬,剪成细条，置索氏提取器滤纸筒中，加入石油醚(30～60℃)150mL，在45～60℃水浴中加热回流至提取器侧管的溶液澄清，弃去石油醚，更换底瓶；加丙酮100mL，在75℃水浴中加热回流2h，倾出丙酮溶液，并转移至蒸发皿中；取出提取器中的滤纸筒和背衬胶布，置于100mL烧杯中，加丙酮适量，超声2～3次使残留的醋酸氟轻松溶解，合并所有丙酮溶液，蒸干，残渣用甲醇分次溶解并转移至25mL量瓶中，超声使转移于量瓶中的醋酸氟轻松溶解完全，放冷，加甲醇稀释至刻度；取出适量以10 000 r·min-1的转速离心5min，取上清液作为供试品溶液。

2.4 系统适用性试验

取对照品溶液，置水浴上加热20min，放冷，作为系统适用性溶液。分别吸取系统适用性溶液、按“2.3”项下方法制备的不含主药的阴性样品溶液、对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图。理论塔板数以醋酸氟轻松峰计≥2 000，主峰与降解峰分离度R>1.5，阴性样品溶液对测定无干扰，结果见图1。

图1 冰樟桉氟轻松贴膏HPLC图谱

2.5 线性关系

精密称取醋酸氟轻松对照品0.01594g，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液。分别精密量取储备液1、2、3、5、10、15、20mL置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，依次进样，测定。以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程A =38.792 C-10.806(r=0.9999)，结果表明，醋酸氟轻松浓度在3.19～63.76μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，RSD为0.15%(n=6)，表明进样精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10h进样，记录峰面积，RSD为0.2%，表明该溶液在10h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批样品(批号：101206)6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算得醋酸氟轻松的平均含量为0.315mg·100cm-2，RSD为1.9%(n=6)。

2.9 回收试验

取4cm×6.5cm不含主成分的空白贴膏9块，分成低、中、高三组，加入一定量的醋酸氟轻松对照品各3份，按“2.3”项下方法配制供试品溶液，测定其含量，并计算回收率，结果见表1。

表1 醋酸氟轻松回收试验结果 (n=9)

2.10 样品含量测定

取两个厂家各3批样品，每批平行制备2份供试品溶液，按拟定的方法测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=2)

3 讨论

[2]，采用醇沉法、浸泡过夜、超声、丙酮回流、索氏提取五种方法，其中浸泡过夜和超声均考察了乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙腈、氯仿和石油醚(30～60℃)六种有机试剂，结果以索氏提取测得的含量最高。索氏提取能有效地分离基质，减少干扰，收集被测组分，利于定量测定，故本品采用索氏提取。

以提取器下端有连续液滴但不成线的滴速为标准，选择水浴温度。当石油醚(30～60℃)回流时，45～60℃水温比较适宜；丙酮回流时，75℃左右的水温比较适宜。

石油醚(30～60℃)用量考察了100、150、200、250mL，当采用150mL时足以洗脱膏脂。丙酮用量考察了50、70、100、150mL，当采用100mL经2h回流后，足以将被测组分洗脱和溶解完全。考虑到成本、环境等因素，本法选择石油醚(30～60℃)用量为150mL、丙酮用量为100mL。

本研究曾尝试索氏提取结束，蒸干丙酮溶液，甲醇溶解后直接测定，但回收率一直在85%～92%之间，试验发现，在处理过程中醋酸氟轻松被吸附，会导致其损失。“取出提取器中的滤纸筒和背衬胶布，置100mL烧杯中，加丙酮适量，超声(2～3次)使残留的醋酸氟轻松溶解，合并所有丙酮溶液”，是比较关键的一步，分析原因可能是滤纸筒和背衬胶布会吸附该组分。经过这步，回收率可达到95%左右。又因为醋酸氟轻松在甲醇中微溶，故将转移至量瓶中的溶液再次超声，以增加该组分在甲醇中的溶解；并以离心取代滤过，减少滤头对该组分的吸附。最终，回收率基本稳定在95%以上。

按含膏量每100cm2不少于1.35g计算，本品理论上每100cm2至少含醋酸氟轻松0.3375mg。考虑到现行各生产企业质量状况、样品均匀性等因素，以最低理论量的90%计算，可暂定含量限度为：本品含醋酸氟轻松≥0.30mg/100cm2。实验结果表明，仅A厂的3批样品达到此含量限度。因此，有必要在原标准中增加醋酸氟轻松的含量测定，以保证药品的质量。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010:1127-1128.

[2] 丘明明. HPLC法侧定骨通贴膏中盐酸麻黄碱的含量及含量均匀度[J].中国药师, 2010,13(5):695-696.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of fluocinolone Acetonide in Borreol Camphor Euclyptus Oil and Fluocinonide Patches by HPLC

Tang Yang, Zhang Jin, Cheng Huiyue

(Chongqing Institute for Food and Drug Control, Chongqing engineering research center for Pharmaceutical process and quality control,Chongqing 401121，China)

Objective:To establish an HPLC method for determination of fluocinolone acetonide in borreol camphor euclyptus oil and fluocinonide patches.Methods:Diamonsil C18(150mm×4.6mm 5μm)column was used. The mobile phase was methol-acetonitrile-water (60∶10∶30) with a flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 240nm. The column temperature was 30℃.Results:The calibration curve of fluocinolone acetonide showed a good linearity at 3.19～63.76 μg·mL-1(r=0.9999), and the average recovery was 96.8%(n=9),RSD=2.0%.Conclusion:This method is specific and accurate for determination of fluocinolone acetonide in borreol camphor euclyptus oil and fluocinonide patches.

HPLC；Borreol Camphor Euclyptus Oil and Fluocinonide Patches；Fluocinolone Acetonide；Determination

2014-05-04

唐杨，女，重庆市食品药品检验所工程师，研究方向为药品质量控制与评价。

R284

A

1673-2197(2014)19-0031-02