太白贝母不同器官愈伤组织诱导培养研究

贾 晗，付绍智*，陈洪源，李琳莉，郭芳琴

(1.重庆三峡医药高等专科学校，重庆 万州 404120；2.重庆三峡中药研究所，重庆 万州 404120；3.重庆绿莱生物科技有限公司，重庆 开县 405400)



太白贝母不同器官愈伤组织诱导培养研究

贾 晗1，2，付绍智1，2*，陈洪源1，2，李琳莉1，2，郭芳琴3

(1.重庆三峡医药高等专科学校，重庆 万州 404120；2.重庆三峡中药研究所，重庆 万州 404120；3.重庆绿莱生物科技有限公司，重庆 开县 405400)

分别选用不同生长年龄的太白贝母鳞茎、种子和幼嫩叶片为实验材料，探索研究不同浓度6-BA与NAA组合对其不同器官的愈伤组织诱导和不定芽的发生情况。结果表明，不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子的诱导发芽效果差别不大；MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 6mg/L的配方较适合太白贝母鳞片分化；MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 2mg/L的配方较适合太白贝母幼叶分化。

太白贝母；组织培养；实验研究

太白贝母(FritillariataipaiensisP.Y. Li.)为百合科贝母属多年生草本植物，以3～5年生植物地下鳞茎入药，是2010年版《中国药典》川贝母药材新收载的基源品种之一[1]。近年来，川贝母的需求量不断增加，其价格一路飙升，但由于川贝母的主要来源暗紫贝母对气候、温度、土质等生长环境条件要求特殊，人工栽培很困难，商品药材全靠采挖野生资源，过度采挖造成资源日趋减少并面临枯竭[2]。为了满足市场对川贝母的需求，课题组开展了对三峡地区地产药材太白贝母不同组织的诱导培养实践，探索太白贝母的组培技术，为其快速繁育和种苗工厂化生产提供技术参考。

国内外有关贝母类鳞茎组织培养方面的研究很多，但有关太白贝母的组织培养技术研究报道比较少。为探索太白贝母组织培养的方法，课题组分别选用了不同生长年龄的太白贝母鳞茎、种子和幼嫩叶片为实验材料，研究不同浓度6-BA与NAA组合对其不同器官的愈伤组织诱导和不定芽的发生情况，期望能够为太白贝母产业化生产提供一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 供试材料

采集自重庆市巫溪县兰英乡黄草坪太白贝母种植基地的6年生种子，2～4年生的太白贝母(FritillariataipaiensisP.Y. Li.)新鲜鳞茎及幼嫩叶片。

1.2 实验方法

分别将太白贝母的新鲜鳞茎、成熟种子及幼嫩叶片经过消毒处理后，接种至不同激素及浓度组合的培养基上进行培养，观察其愈伤组织的形成及分化情况。

1.3 培养基配制

以MS为基础培养基，初代培养基和增殖培养基添加蔗糖40g/L，琼脂4.5%，pH值为5.8，分别按照不同比例添加6-BA、NAA、KT等植物生长调节剂，L-半胱氨酸、VC等抗褐化有机物以及活性炭。所有培养基均在121℃条件下高压灭菌20min。

1.4 供试材料处理

1.4.1 鳞茎处理 取无病虫害的太白贝母鳞茎，去掉最外面一层腐烂、褐化的鳞片，再将根系切除。先用清水冲洗去鳞茎表面的泥土，然后将鳞瓣剥离，放入稀的洗洁精溶液中浸泡10min，流水冲洗10～15min，之后转入超净工作台，先用70%酒精浸泡2～3min，无菌水清洗3～4次，浸入0.1%升汞液8～10min，无菌水冲洗7～8次，之后用无菌刀片将鳞茎切成5mm左右厚度的小片备用。

1.4.2 种子处理 取新采收的太白贝母种子300粒，先用70%酒精浸泡2min，无菌水清洗3次，之后浸入0.1%升汞液8～10min，无菌水冲洗7～8次，滤干水分备用。

1.4.3 嫩叶处理 取新长出的太白贝母嫩叶若干，先用自来水洗净，再用稀的洗洁精溶液浸泡10min，流水冲洗10min，之后用75%酒精处理叶片30s，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干水分后，用无菌剪刀剪成1～2mm宽的小片备用。

1.5 愈伤组织诱导培养

分别将无菌处理后的太白贝母鳞片、种子和嫩叶接种于不同激素配比组合的培养基上，培养条件为光强1 000lux，温度20℃，光照10h。接种10d后统计污染率，45d后统计愈伤组织诱导率。

2 结果与分析

由于接种后，外植体感染率在50%以上，为了体现实际诱导效果，在计算发芽率时，将感染的外植体剔除后进行计算，计算公式：出芽率=[出芽外植体数/(接种外植体总数-感染外植体数)]×100%。

2.1 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母新鲜鳞茎诱导效果

经过查阅相关文献资料，选择以下不同浓度6-BA与NAA组合进行太白贝母鳞茎的愈伤组织诱导，结果见表1、图1。

表1 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母鳞茎愈伤组织诱导效果

图1 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母麟茎愈伤组织诱导效果比较

从表1和图1可以看出，1mg/L NAA与6mg/L 6-BA组合对太白贝母鳞茎的愈伤组织诱导效果较好，但在愈伤组织形成的同时，总计55.6%以上的接种组织出现了细菌感染，使后续的转代培养无法继续进行。

2.2 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子诱导效果

经过查阅相关文献资料，选择以下不同浓度6-BA与NAA组合进行太白贝母种子的发芽诱导，结果见表2、图2。

表2 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子诱导效果

图2 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子诱导效果比较

从表2和图2可以看出，不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子的诱导发芽效果差别不大。在愈伤组织形成的同时，总计57.3%以上的接种组织出现了细菌感染，使后续的转代培养无法继续进行。

2.3 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母幼叶的诱导效果

经过查阅相关文献资料，选择以下不同浓度6-BA与NAA组合进行太白贝母幼叶的愈伤组织诱导，结果见表3、图1。

表3 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母幼叶的愈伤组织诱导效果

图3 不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母幼叶愈伤组织诱导效果比较

从表3和图3可以看出，1mg/L NAA与2mg/L 6-BA组合对太白贝母幼叶的愈伤组织诱导效果较好，分化出的不定芽叶色浓绿，叶片展开，芽健壮。但在愈伤组织形成的同时，55.4%的接种组织出现了细菌感染，使后续的转代培养无法继续进行。

3 讨论

经过探索实验，发现不同浓度6-BA与NAA组合对不同太白贝母器官的愈伤组织诱导效果不同。由表1可知，随着6-BA浓度提高，鳞片的分化率也随之提高，当6-BA浓度由2mg/L增加至6mg/L时，其出芽率达到最高；由表2可知，不同浓度6-BA与NAA组合对太白贝母种子的诱导发芽效果差别不大；由表3可知，随着6-BA浓度提高，幼叶的分化率反而出现下降。因此，通过本组试验对比，分别得出适合太白贝母鳞片分化的优化组合为MS+NAA1.0mg/L +6-BA 6mg/L；适合太白贝母幼叶分化的优化组合为MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 2mg/L。但是，由于愈伤组织培养到后期，感染率非常大，所以后续的转代培养未能进行。分析原因，可能是太白贝母鳞茎内存在某种内生细菌，在培养时出现了大量增殖，影响到愈伤组织的形成，这有待于进一步探索研究。

[1] 姜荣兰，张天佑，王健生，等.川贝母主流品种原植物的地理分布及药材研究[J].四川中草药研究，1992(33-34):18

[2] 李隆云,周裕书,代敏,等.暗紫贝母鳞茎再生组织培养技术研究[J].中国中药杂志,1995,20(2):78.

[3] 高山林,朱丹妮,等.暗紫贝母鳞茎器官培养生长特征和生物碱积累的研究[J].中国药科大学学报,1992,23(3):144-147.

[4] 陈敏,陈和荣,钟凤林,等.川贝母组织培养的研究[J].中国中药杂志,1995,20(8):414.

[5] 朱丹妮,蒋莹,陈婷,等.组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究[J].中国药科大学学报,1992,23(2):118-121.

[6] 余世春,肖培根.暗紫贝母生物碱成分研究[J].植物学报,1990,32(12):929-935.

[7] 高山林,夏艳,潭丰苹.组织培养暗紫贝母的药理作用[J].植物资源与环境学报,2000,9(1):4-8.

(责任编辑：魏 晓)

2014-06-17

重庆市教委科学技术研究项目(KJ092104)

贾晗(1984-)，女，重庆三峡医药高等专科学校讲师，研究方向为药用植物资源学、中药科普等。

付绍智(1965-)，男，重庆三峡医药高等专科学校副教授，研究方向为中药资源开发利用。E-mail：fushaozhi@sina.com。

S567.231

A

1673-2197(2014)19-0011-03