金刚藤口服液基于免疫调节对大鼠慢性盆腔炎的治疗作用研究

邢人鑫

四川省医学科学院·四川省人民医院城东病区药剂科，成都　610101

金刚藤口服液基于免疫调节对大鼠慢性盆腔炎的治疗作用研究

邢人鑫

四川省医学科学院·四川省人民医院城东病区药剂科，成都610101

摘要目的：从免疫调节角度研究金刚藤口服液对大鼠慢性盆腔炎的治疗作用。方法：选择未交配的SPF级雌性SD大鼠60只，随机分为空白组、模型组、阳性（金刚藤胶囊）组、金刚藤口服液低、中、高剂量组。实验第1天，除空白组外，其余各组大鼠用戊巴比妥麻醉，采用双侧输卵管注入30%苯酚胶浆生理盐水溶液，制作大鼠盆腔炎模型。造模后正常组和模型组ig给予纯净水，其余各组ig给予药物，其中阳性组日给药量为540 mg·kg-1，金刚藤口服液低、中、高剂量组日给药量分别为：15 mg·kg-1、30 mg·kg-1、60 mg·kg-1，每天1次，共ig治疗20天。第21天断颈处死动物，ELISA法测定各实验组大鼠血浆IgA、IgM和IgG含量；剖取子宫，称重后做病理形态分析。结果：与正常组比较，模型组大鼠子宫重量系数[（11.7±1.92）mg·g-1]极显著增大（P＜0.01），血浆IgA[（27.99±5.49）μg·mL-1]、IgM[（21.94±1.98）μg·mL-1]和IgG[（4.85±1.97）μg·mL-1]含量均有极显著减少（P＜0.01）；子宫炎症性病变显著加重；与模型组比较，金刚藤口服液组可显著减小大鼠子宫重量系数（P＜0.05），增加血浆IgA、IgM和IgG含量（P＜0.05），且能减轻子宫炎症性病变。结论：金刚藤口服液可通过调节大鼠血浆免疫球蛋白浓度而对慢性盆腔炎产生治疗作用。

关键词金刚藤口服液；免疫调节；治疗；慢性盆腔炎

盆腔炎（Pelvic Inflammatory Disease，PID）是指女性生殖器官、周围结缔组织及盆腔腹膜所发生的慢性炎症，是育龄期妇女最常见的生殖器宫炎症之一，具有病程长、病情复杂、复发率高等特点。慢性盆腔炎会导致不孕、宫外孕、异位妊娠及其它妇科炎症，并影响家庭生活[1-3]。

盆腔炎是由诱发感染的因素使病原微生物乘虚而入，上行感染所致，临床上分为急性和慢性两类，以慢性居多。急性盆腔炎主要是由病原体如沙眼衣原体、淋病奈瑟氏菌、人型支原体、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌以及厌氧菌等感染引起。慢性盆腔炎是由于急性盆腔炎治疗不及时、不彻底所致，急性期经用抗生素后细菌已被杀死，因此，慢性盆腔炎患者组织中已经没有病原菌的感染，仅仅表现为慢性炎症形成的瘢痕粘连以及盆腔充血，也就是说盆腔局部已由有菌性炎症转变为无菌性炎症，故大部分患者用抗生素无效。长期以来，对于盆腔炎的治疗，西医药物主要是根据药敏实验选用抗生素为主，对病原体的杀灭疗效确切，但对细菌和病原体所导致的一系列病理损害的改善作用不太明显，因而对于盆腔炎所导致的远期后遗症疗效不理想[4-6]。目前，盆腔炎的治疗仅能消除急性感染的症状，对盆腔炎相关的并发症、后遗症作用不大，因此，盆腔炎的药物治疗，尤其是慢性盆腔炎的药物治疗乏善可陈。

金刚藤（Smilax bockiiWarb.），又名菝葜、铁菱角等，为百合科植物西南菝葜的根茎。具有祛风、活血、解毒的功效。临床常用于治疗盆腔炎、附件炎等妇科疾病，现代研究表明，金刚藤治疗妇科疾病的主要物质基础主要在于皂苷和黄酮两大类，治疗特点以抗炎为主[7-9]。然而慢性盆腔炎后期，抗炎几乎无法适应病情需要。

本实验以金刚藤口服液为研究对象，从机体免疫调节角度研究其对实验性大鼠慢性盆腔炎的治疗作用。

1　材料

1.1受试药物

金刚藤口服液，批号：131028，规格，20 mL/瓶，四川科伦药业股份有限公司生产；金刚藤胶囊，批号130621，规格：0.5 g/粒，湖北福人药业股份有限公司生产。

1.2试剂

IgG ELISA Kit（批号E-30439）、IgA ELISA Kit（E-30442）、IgMELISA Kit（E-30442），均购自上海文乐生物技术有限公司；苯酚胶浆（成都市科龙化工试剂公司，批号20120605）；戊巴比妥（成都格雷西亚化学技术有限公司，批号20120116）；甲醛（成都市科龙化工试剂公司公司，批号20120816）。

1.3动物

未交配SD雌性大鼠，SPF级，体重180 g～220 g，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物质量合格证号：scxkc（111）2008-24。

1.4仪器

BSA224S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；Thermo全功能酶标仪（美国ThermoFisher Scientific仪器有限公司）；QYC-200恒温摇床（上海福玛仪器有限公司）；TG2-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）。

2　方法

2.1大鼠盆腔炎模型复制方法[2]

实验第1天，除空白组外，其余各组大鼠用戊巴比妥麻醉，仰卧固定于操作台上，在无菌操作下，于下腹部正中切口，长约0.8 cm～1 cm，暴露双侧输卵管，用1 mL注射器-7号针头于输卵管中间部位沿卵巢方向注入30%苯酚胶浆生理盐水溶液0.2 mL（两侧输卵管均注），注射完之后用碘伏和70%酒精消毒所有伤口和创面，手术针线缝合肌肉和皮肤，等待大鼠自然苏醒。

2.2实验分组给药

取存活的SD大鼠按体重随机分为6组，每组10只，分别为：①模型对照组：等体积纯净水；②阳性对照组（金刚藤胶囊）：540 mg·kg-1；③金刚藤口服液高剂量组：60 mg·kg-1；④金刚藤口服液中剂量组：30 mg·kg-1；⑤金刚藤口服液低剂量组：15 mg·kg-1。⑥另按体重随机称取10只正常大鼠作为正常对照组：等体积纯净水。造模当天下午各组大鼠按剂量灌胃给药，每天1次，连续20天。实验第21天，股动脉放血处死各组大鼠，收集血液，3000 r·min-1离心10 min，收集上清液，-20℃保存待测。

2.3检测指标

2.3.1子宫重量系数剖取大鼠全子宫，剪去双侧卵巢，剔除脂肪，用电子天平称重，计算各实验组大鼠子宫重量系数：子宫重量系数（mg/g）=子宫重（mg）/体重（g）

2.3.2血浆IgA、IgG和IgM含量测定ELISA法测定6个实验组大鼠血浆IgA、IgG和IgM的含量。

2.3.3子宫组织病理形态学观察剪取病变明显的子宫组织，用10%中性甲醛固定24 h，石蜡包埋切片，常规HE染色，显微镜下观察子宫组织病理形态。

2.4统计方法

用SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准差（±s）表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’s T2检验。

3　实验结果

3.1对大鼠子宫重量系数的影响

与正常组比较，模型组大鼠子宫重量系数极显著增大（P＜0.01）；与模型组比较，金刚藤高剂量组大鼠子宫重量系数极显著减小（P＜0.01），中、低剂量组显著减小（P＜0.05）。见表1。

表1　金刚藤口服液对大鼠子宫重量系数的影响

3.2对大鼠血浆IgA、IgG和IgM的含量的影响

由表2可知，与正常组比较，模型组大鼠血浆IgA、IgG和IgM含量均有极显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，金刚藤口服液高剂量组大鼠血浆IgA和IgM含量均有极显著升高（P＜0.01），IgG含量有显著升高（P＜0.05）；中、低剂量组大鼠血浆IgA、IgG和IgM含量均有显著升高（P＜0.05）。

3.3对大鼠子宫病理形态的影响

显微镜观察显示，正常组大鼠子宫壁完好，粘膜结构完整，粘膜上皮细胞形态未见异常，皱襞和管腔无异常改变；固有层可见子宫内膜腺体，血管未见扩张充血，未见炎细胞浸润和纤维结缔组织增生，见图1-A。模型组大鼠子宫粘膜上皮明显坏死变性，肌层和固有层均有明显结缔组织增生和炎细胞浸润，肌层排列紊乱，管腔有一定粘连阻塞，浆膜层有散在炎细胞浸润，见图1-B。阳性组大鼠子宫粘膜上皮坏死病变明显减少，肌层和固有层结缔组织增生和炎细胞浸润也明显减少，肌层排列整齐，见图1-C。口服液组大鼠子宫粘膜上皮坏死病变明显减少，肌层和固有层结缔组织增生和炎细胞浸润、淋巴滤泡增生也明显减少，肌层溃疡性损伤明显减小，层次排列整齐，见图1-D、图1-E和图1-F。

表2　金刚藤口服液对大鼠血浆IgA、IgG和IgM含量的影响

图1　大鼠子宫病理形态（HE染色，200×）

4　讨论

目前盆腔炎的西医治疗仍以抗菌、消炎为主，西药中抗生素对控制盆腔炎急性期敏感细菌感染较为有效，但对于慢性盆腔炎症，由于组织粘连化、局部循环障碍，抗生素难于渗入局部发挥作用，对消除炎症浸润之纤维组织和结缔组织效果较差，且抗生素不具备缓解粘连及止痛作用，故慢性盆腔炎单纯用抗生素治疗，疗效不尽如人意。近年来临床治疗和实验研究证实，中医药在消除或改善慢性盆腔炎临床症状的同时，还可调节机体自身免疫功能，提高人体抵抗能力，显示出对于慢性盆腔炎治疗之独特优势。

免疫球蛋白（Ig）是一类存在于动物体血液和体液中有抗体活性的蛋白质，主要是丙种球蛋白；具有抗菌、抗病毒作用，并能在补体作用下杀死或溶解病原微生物，是机体抗感染免疫中的重要防御机制。抗原侵入机体后，引起机体产生各种具有特异性的免疫球蛋白，称为抗体。由骨髓中B淋巴细胞在抗原刺激下转化为原浆细胞，原浆细胞分化、繁殖并通过幼浆细胞阶段，进化为成熟浆细胞。成熟浆细胞产生免疫球蛋白，按结构不同可分为IgG、I-gA、IgM、IgD和IgE五类，发挥体液免疫作用。

本实验研究数据显示，金刚藤口服液可升高盆腔炎大鼠血浆IgG、IgA以及IgM含量，提示金刚藤口服液对免疫球蛋白具有调节作用，可促进机体免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的产生，从而提高机体免疫能力，增强机体抗菌、抗炎作用，其效果略优于金刚藤胶囊，可能原因与二者的提取工艺有关，金刚藤胶囊以薯蓣皂苷类成分为主，而金刚藤口服液几乎是对金刚藤有效成分的全提取、全保留，提示金刚藤治疗慢性盆腔炎的物质基础不能仅限于薯蓣皂苷类物质，还应该对药材中其他成分进行保留。

综上所述，我们初步得出结论，金刚藤口服液可介入机体免疫反应，而对妇女慢性盆腔炎产生治疗作用。

参考文献

[1] 刘国生，王桐生，龙子江，等.盆腔炎冲剂对大鼠慢性盆腔炎模型的影响[J].中国实验方剂学杂志，2004，10（3）：24-26.

[2] 谢萍，冯俭.清湿止痛汤对慢性盆腔炎大鼠血清IL-2和MDA水平影响的实验研究[J].河南中医，2011，31（6）：607-8.

[3] 陈慰峰.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2002：23-31.

[4] 王琛，王泰龄，李平，等.妇科千金软胶囊对盆腔炎大鼠子宫内膜组织病理改变的观察[J].中日友好医院学报，2005，19（3）：158-60.

[5] 刘瑞芬，杨晓娜.盆腔炎颗粒对血虚兼肾虚型慢性盆腔炎患者免疫学指标的影响[J].中国中西医结合杂志，2007，27（9）：841-3.

[6] 赵旭，张建平.金刚藤糖浆配合超短波治疗慢性盆腔炎45例报告[J].中国医师杂志，2003，（10）：1431-3.

[7] 马廷升，朱兰翠.金刚藤的研究进展[J].中药材，2006，10：1114-6.

[8] 黄显章，汪鋆植，昝俊峰，等.金刚藤有效部位群对慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织炎症介质的影响[J].辽宁中医杂志，2011，（07）：1334-6.

[9] 马云，罗艳琴，宋路遥，等.菝葜治疗慢性盆腔炎有效部位的药效学筛选研究[J].南方医科大学学报，2013，（01）：145-9.

[10] 黄显章，邹鹏程，高秋芳，等.金刚藤有效部位群治疗慢性盆腔炎的抗炎镇痛作用[J].中国实验方剂学杂志，2010，（17）：114-7.

中图分类号R965.1；R967

文献标志码A

文章编号1673-7806（2014）05-405-04

作者简介邢人鑫（1974-），男，主管药师，研究方向：临床药学

收稿日期2014-05-21修回日期2014-08-18

Study of the Therapeutic Effect on Rats Chronic Pelvic Inflammatory Disease of Bullbrier Polysaccharide

XING Ren-xin
Department of Pharmacy,East District,Sichuan Academy of Medical Science&Sichuan Provincial People's Hospital,Chengdu 610101,China

ABSTRACTObjective：To study the therapeutic effect on rat chronic pelvic inflammatory disease of bullbrier polysaccharide.Methods：Unmated SPF 60 female SD rats were randomly divided into control group，model group，positive group(Bullbrier capsules)group,bullbrier polysaccharide low,mediumand high dose groups.On the 1d of experiment,except the blank group,the rest of the rats were anesthetized with amyl barbiturate,phenol 30%slurry injection of saline solution was injected frombilateral tubal to make rats pelvic inflammatory disease model.After being modeled,the normal group and model group ig given pure water,the positive group were given bullbrier dose of 540 mg·kg-1,polysaccharide of bullbrier of low,mediumand high dose groups were given of dose：15 mg·kg-1,30 mg·kg-1,60 mg·kg-1,a total ig 20 days of treatment.On the 21th days,rats were sacrificed,Elisa method was used for the determination of the experimental rats plasma IgA,IgMand IgG levels;taken uterus,after being weighed,pathological morphological analysis were done.Results：Compared with the normal group,model group uterine weight coefficient[(11.7±1.92)mg·g-1]was significantly increased(P＜0.01),plasma IgA[(27.99±5.49)μg·mL-1],IgM[(21.94±1.98)μg·mL-1]and IgG[(4.85±1.97)μg·mL-1]content are extremely significantly reduce(P＜0.01);the uterine inflammatory lesions were significantly heavier;compared with model group,Smilax polysaccharides can significantly reduce the weight of the rat uterus coefficient(P＜0.05),increased plasma IgA,IgMand IgG levels(P＜0.05),can reduce the uterine inflammatory lesions.Conclusion：Bullbrier polysaccharide can treat chronic pelvic inflammatory disease by adjusting the concentration of rat plasma immunoglobulin.

KEY WORDSBullbrier Polysaccharide;CPID;Treatment;Immunoregulation