益阴消渴滴丸质量标准研究

张伏军 ，须 建 ，尹小玲

（1.重庆三峡中心医院药剂科，重庆 404000；2.重庆医药高等专科学校，重庆 401331）

益阴消渴滴丸由葛根、苦瓜、山药、荔枝核等4味药材组方的中药复方制剂，具有益气养阴、清热生津功效，临床用于气阴不足所致消渴，以及2型糖尿病见上述证候者，疗效显著。为有效控制该制剂的产品质量，本研究中采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的葛根、荔枝核进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法测定葛根中有效成分葛根素的含量，所得定性、定量分析方法可客观反映制剂的内在品质，为该品种的质量控制和评价指标提供了理论依据。

1 仪器与试药

LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；薄层成像色谱仪（瑞士卡玛公司）；AE-240S型电子天平（梅特勒-托利多仪器＜上海＞有限公司）；KQ-400DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G预制薄层板（青岛海洋化工有限公司）。葛根素对照品（批号为752-200108，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；益阴消渴滴丸样品，缺葛根、缺荔枝核阴性样品（本院提供）；甲醇（色谱纯，厂家）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别（TLC法）

葛根:取本品3丸，加甲醇15mL，超声10min，滤过，滤液浓缩至约5 mL，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺葛根阴性样品3丸，同法制成缺葛根阴性对照品溶液。照TLC法[2010年版《中国药典（一部）》（附录ⅥB）]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶 H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm处）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰（见图1A）。

荔枝核:取本品15丸，加水50 mL，超声溶解，用乙醚振摇提取3次，每次 30 mL，水溶液挥去乙醚，用水饱和正丁醇提取3次，每次25 mL，合并水饱和正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另称取荔枝核药材粉末1.0 g，加甲醇 25 mL，超声 30 min，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为对照药材溶液。再取缺荔枝核阴性样品15丸，同法制成缺荔枝核阴性对照品溶液。照TLC法[2010年版《中国药典（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、缺荔枝核阴性对照品溶液各10μL及对照药材溶液6μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（9 ∶1 ∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色荧光斑点，阴性无干扰（见图1B）。

图1 薄层色谱图

2.2 葛根素含量测定（HPLC法）

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:迪马 C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相:甲醇 - 水（25 ∶75）；流速:1.0 mL /min；检测波长:250 nm；柱温:30℃。理论板数按葛根素峰计算应不低于3 000。

2.2.2 溶液制备

取样品10丸，研细，取约0.1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率 100W，频率 40 kHz）10 min，放冷，用甲醇溶解，定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液，即得供试品溶液；精密称取干燥至恒重的葛根素对照品8.84 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.088 4 g/L葛根素对照品溶液；取不含葛根的阴性样品适量，照供试品溶液制备方法，得缺葛根阴性对照溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取 2.2.2项下 3种溶液各 10μL，依法进样测定。供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应保留时间处有相应色谱峰，阴性对照品色谱中则无此色谱峰。结果表明阴性对照不干扰样品测定，目标峰与相邻色谱峰分离度均大于1.5。见图 2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色谱仪。以峰面积积分值 A为纵坐标、进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程 A＝7 011 291C-37 635.5，r＝0.999 9（n＝6）。结果表明，葛根素进样量在 0.173 8 ～1.738 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次（进样量10μL），测定峰面积。结果葛根素峰面积 RSD为 0.44%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别于制备后0，1，4，10，14 h进样测定。结果葛根素峰面积 RSD 为 0.37%（n＝5），表明供试品溶液至少在14 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品，按拟订的含量测定方法，分别制备5份供试品溶液，测定葛根素含量。结果的 RSD为 1.14%（n＝5），表明方法重复性良好。

表1 葛根素加样回收试验结果（n＝6）

加样回收试验:取已知含量的样品内容物适量，研细，精密称定6份，分别加入葛根素对照品溶液适量（配成溶液加入），按拟订的含量测定方法测定葛根素含量，计算回收率。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

取不同批号的样品，按供试品制备方法处理后依法测定，计算葛根素的含量。结果批号为130401，130402，130403的样品中葛根素含量分别为 24.96，24.86，24.75mg /g。

3 讨论

对本制剂中葛根、荔枝核的薄层鉴别研究，分别以对照药品、对照药材为对照，经方法学考察，薄层色谱斑点分离良好，斑点圆整清晰，阴性无干扰，同时试验3批成品，结果均能检出相应色谱斑点，表明选定的方法具有专属性和重现性，可作为益阴消渴滴丸制剂质量控制的定性检测方法。

用甲醇制备葛根素对照品溶液，进行紫外扫描，结果在250 nm波长处有最大吸收。参考2010年版《中国药典（一部）》葛根药材含量测定项下方法，本试验选用250 nm为检测波长。在此条件下，色谱图基线平稳，阴性对照无干扰。

取益阴消渴滴丸40丸，研细成粉末，混匀，精密称定3份，置25mL锥形瓶中，分别加甲醇、30%乙醇、70%乙醇各20mL，超声处理10 min，取出，冷却，转移置25 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解、30% 乙醇、70% 乙醇定容，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，测定葛根素含量。结果表明，以甲醇提取效果更好，因此选择甲醇作为提取溶剂。

本试验中建立的鉴别葛根、荔枝核的TLC法，能鉴别出葛根、荔枝核的特征性斑点；建立的测定葛根素含量的HPLC法，精密度、稳定性、重现性符合要求。上述两种方法为制订益阴消渴滴丸的质量标准提供了理论依据。

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