高效液相色谱法测定唇齿清胃丸中栀子苷含量

杨慈海 ，谭忠军 ，杨春丽 ，刘 斌

（1.湖北省荆门市食品药品监督检验所，湖北 荆门 448124； 2.湖北百科亨迪药业有限公司，湖北 荆门 448124；3.湖北省荆门市皮肤病防治院，湖北 荆门 448000）

唇齿清胃丸由大黄、黄芩、龙胆、黄柏、陈皮等组方，具有清胃火的功效，用于由胃火引起的牙龈肿痛、口干唇裂、咽喉痛。现行药品标准[1]中无含量测定方法。栀子为方中主药，栀子苷是栀子的主要有效成分。本试验中以栀子苷为含量指标成分，建立了测定唇齿清胃丸中栀子苷的高效液相色谱（HPLC）法，为该制剂提供了有效的含量评价方法。

1 仪器与试药

DIONEX Ultimate 3000型高效液相色谱仪；Mettler Toledo AL 204型电子天平；AS51050A型超声波清洗仪。栀子苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为110749－200512）；唇齿清胃丸（长春人民药业集团有限公司，批号为20100302，20120308，20121111）；阴性样品（自制）；水为纯化水，其他试剂均为分析纯或色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱：Kromasil－C18色谱柱(250mm × 4.6mm，5 μm)；流动相：乙腈－水（10 ∶90）；流速：1.0 mL/min；检测波长：238 nm；柱温：室温；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取栀子苷对照品 7.14mg，置 100 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，即得质量浓度为0.071 4 g/L的对照品溶液。取装量差异项下的样品内容物，碾细，混匀，取1.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按处方比例制备缺栀子药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取对照品、供试品、阴性对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。可见，阴性对照无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液 2，4，8，16，32，64 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，以进样量(X)为横坐标、峰面积积分值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归曲线方程 Y＝1.753 5 X－0.087 1（r＝0.999 9，n＝6）。结果表明，栀子苷进样量在0.142 8～4.569 6 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样 6次，测定峰面积。结果栀子苷峰面积的 RSD为 0.632%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于 0，4，8，16，24 h时各进样10 μL，测定峰面积。结果栀子苷峰面积的 RSD为1.12%(n＝5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为20100302）6份，依法制备供试品溶液，并进样测定。结果栀子苷平均含量为1.18mg/g，RSD为0.735%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的同一批样品（含量1.18mg/g）粉末0.6 g，共6份，精密称定，分别精密加入栀子苷对照品溶液（0.071 4 g/L）各 10 mL，按含量测定方法进行操作，测定含量并计算回收率。结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果(n＝6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，测定并计算含量。结果批号为20100302，20120308，20121111的样品中栀子苷的含量分别为 1.18， 1.05，1.22mg/g（n ＝ 3）。

3 讨论

参考文献[3],对提取溶剂进行筛选，分别用甲醇、50%甲醇、70%甲醇提取，结果以50%甲醇超声提取30 min效果最好。比较了样品超声处理15，30，60 min的提取液，结果超声处理30 min可提取完全，故选30 min为宜。参照2010年版《中国药典（一部）》中栀子含量测定项下方法以乙腈－水（10∶90）为流动相，并对比例进行了适当的调整，结果分离度更好。

参考文献：

[1] YBZ17312006，国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:231.

[3] 陈艳霞，宫立孟.HPLC测定护肝宁丸中栀子苷的含量[J].中国药师，2012，15（7）:1 037－1 038.