HPLC法同时检测食品中四种添加剂含量研究

汤振华++周红霞

摘要：采用高效液相色谱法同时测定液体食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜。样品经盐酸酸化，乙醚提取，甲醇和水溶解后过HLB固相萃取小柱净化，以TC-C18（4.6×250毫米，5微米）色谱柱分离。结果显示苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜在1.0微克/毫升～100.0微克/毫克范围内呈线性关系，回收率在84.24%～96.34%之间，相对标准偏差在2.03%～4.78%之间，最低检限0.5毫克/千克，适用于同时检测液体食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜的含量。

关键词：苯甲酸；山梨酸；糖精钠；安赛蜜；高效液相色谱

中图分类号： TS214 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-06-30-2

1食品添加剂

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸是我国目前常用的食品有机防腐剂；糖精钠作为甜味剂也广泛应用于食品中，但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要[1-3]。现有的国家标准方法中，很少有同时测定几种添加剂的方法。但在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测工作者研究出适合多种类型食品中多种添加剂同时测定的检测[4-6]。不同类型食品中蛋白质和脂肪含量的高低直接影响着检测结果的可靠性，针对不同样品应用不同的前处理及检测方法，无疑增加了检测工作的难度及强度[7-8]。本文研究了常见液体食品中如果汁、酱油、醋等其中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜这四种添加剂的液相色谱检测方法。该法操作简单快速，测定结果满意，适合大批量样品的快速检测。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

旋转蒸发仪 Heidolph G3；固相萃取装置 美国Supelco；氮吹仪 Turbo Vap LV Caliper；高效液相色谱仪 AGILENT-1100。

乙醚（分析纯）； 盐酸（分析纯）； 氢氧化钠 （分析纯）；甲醇（色谱纯 美国TEDIA ）；醋酸铵（色谱纯 美国TEDIA ）；冰乙酸（色谱纯 美国TEDIA ）；HLB固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；MAX固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；C18固相萃取小柱（SP7756B，SUPELCO）

2.2 样品的预处理

精确称取5克样品至50毫升离心管中，加0.5毫升 6摩尔/升盐酸，加盖涡旋30秒使样品酸化，加20毫升乙醚，涡旋20秒提取，8000转/分离心3分，取乙醚层至圆底烧瓶中旋干，加1毫升甲醇混匀，再加9毫升水涡旋混匀，加200微升6摩尔/升盐酸混匀[2.8]，待过HLB固相萃取小柱。

2.3 样品的净化

用滴管将上述处理过的样品加到HLB柱子中，用3毫升 0.6摩尔/升盐酸淋洗， 4毫升甲醇洗脱，用氮吹管接洗脱液。将样品氮吹干后，用1毫升3∶7甲醇∶水定容，过直径为0.45纳米的水相膜后，待测。

2.4 色谱条件

3 结果与分析

3.1 流动相的选择

将10毫摩尔/升醋酸铵+0.05%冰乙酸的混合液与甲醇按不同比例配成流动相。实验发现甲醇体积分数为25%时出峰时间太快，安赛蜜出峰时间大约在1.2分、糖精钠出峰时间大约在2.1分，此时极性杂质很难分开，干扰较大。甲醇体积分数15%时，糖精钠出峰时间晚，峰展宽现象严重。也尝试过梯度洗脱，但是梯度洗脱有时基线飘的较严重，而且平衡时间较长。甲醇体积分数20%时，出峰时间较合理、分离效果较好，结果见图1，从图1中可以看出糖精钠的出峰时间为4.150分，安赛蜜的出峰时间为6.107分，苯甲酸的出峰时间为15.205分，山梨酸的出峰时间为24.796分，峰形和分离效果都比较好。综合考虑，本实验选择甲醇的体积分数20%的流动相[4，7，8]。

图1 100.0微克/毫升浓度混合标准品的色谱图

Fig. 1 Chromatogram of 100.0μg/ml mixed standard substance

3.2固相萃取小柱类型的选择

适合极性或非极性化合物的提取、富集和净化的固相萃取小柱有C18固相萃取小柱、MAX固相萃取小柱、HLB固相萃取小柱这三种。实验发现C18柱无法保留糖精钠和安赛蜜，在上样和水洗的过程中，糖精钠和安赛蜜大量流出。MAX柱无法保留糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸，在上样、5%氨水淋洗、甲醇淋洗的过程中，糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸大量流出，这有可能的原因是当pH为8～9时，这四种物质的分子状态不稳定，无法保留在MAX柱上[7，8]。而HLB柱可以保留安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸这四种物质，结果见图2，但是在水淋洗水性杂质的过程中一部分安赛蜜被水带出。

3.3 HLB固相萃取小柱淋洗溶液的选择

HLB固相萃取小柱在水淋洗的过程中有部分安赛蜜被带出，这可能是水洗过程中使得pH值上升后安赛蜜与HLB柱结合不是很牢，因此尝试用酸淋洗[8，9]。实验分别用0.6摩尔/升和1.2摩尔/升L盐酸淋洗，接废液进样，结果见图3，由图3可以发现0.6摩尔/升盐酸淋洗效果最好， 安赛蜜基本无损失。

3.4线性范围与最低检出限

3.5 回收率和精密度

选取不含有苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜的果汁、啤酒、醋为样品，加入不同量的标准品进行加标回收实验，结果见表 2。从表2 可以看出，该方法的回收率在84.24%～96.34%之间，RSD在2.03%～4.78%之间，回收率和精确度都在可接受范围内。加标量越大，RSD值越低，精密度越高[9，10]。

x

3.6 样品检测

实验选取了市售的5种不同的液体样品进行苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜含量的检测，结果如表3所示。从表3中可以看出这5种样品的回收率在82.31%～97.06%之间，回收率都在可接受范围内。这5种样品中有4种添加了一种或一种以上的这四种添加剂。根据GB2760-2011[2]判断，这5种产品都符合国标的限量要求。

4 结语

本文研究了液体类食品中同时测定苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂的方法。方法的相关性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之间，相对标准偏差在2.03%～4.78%之间，最低检出限0.5 毫克/公斤，准确度好。运用本方法对液体食品中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂进行了检测，方法操作简便、快捷，实用性强。

参考文献

[1] 高彦祥.食品添加剂基础[M].北京：中国轻工业社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 苏建国，彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中国食品添加剂分析测试，2011，21（5）：243-245.

[4] 陈春梅，董刘敏，师邱毅，等.超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量[J].江苏农业科学，2012，40（5）：282-283.

[5] 陈丹萍，杨富春，张宝元.超高效液相色谱法快速测定饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠[J].现代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 刘洋，陈枚.液相色谱法可同时检测安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸[J].食品质量安全与检测，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董刘敏，等.月饼中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸检测方法的研究[J].江西农业学报，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者简介：汤振华，昆山市产品质量监督检验所，工程师，研究方向：食品安全检测；周红霞，南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，研究方向：食品安全检测。

4 结语

本文研究了液体类食品中同时测定苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂的方法。方法的相关性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之间，相对标准偏差在2.03%～4.78%之间，最低检出限0.5 毫克/公斤，准确度好。运用本方法对液体食品中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂进行了检测，方法操作简便、快捷，实用性强。

参考文献

[1] 高彦祥.食品添加剂基础[M].北京：中国轻工业社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 苏建国，彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中国食品添加剂分析测试，2011，21（5）：243-245.

[4] 陈春梅，董刘敏，师邱毅，等.超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量[J].江苏农业科学，2012，40（5）：282-283.

[5] 陈丹萍，杨富春，张宝元.超高效液相色谱法快速测定饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠[J].现代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 刘洋，陈枚.液相色谱法可同时检测安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸[J].食品质量安全与检测，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董刘敏，等.月饼中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸检测方法的研究[J].江西农业学报，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者简介：汤振华，昆山市产品质量监督检验所，工程师，研究方向：食品安全检测；周红霞，南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，研究方向：食品安全检测。

4 结语

本文研究了液体类食品中同时测定苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂的方法。方法的相关性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之间，相对标准偏差在2.03%～4.78%之间，最低检出限0.5 毫克/公斤，准确度好。运用本方法对液体食品中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠四种添加剂进行了检测，方法操作简便、快捷，实用性强。

参考文献

[1] 高彦祥.食品添加剂基础[M].北京：中国轻工业社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 苏建国，彭进.UPLC同时测定风味饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中国食品添加剂分析测试，2011，21（5）：243-245.

[4] 陈春梅，董刘敏，师邱毅，等.超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量[J].江苏农业科学，2012，40（5）：282-283.

[5] 陈丹萍，杨富春，张宝元.超高效液相色谱法快速测定饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠[J].现代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中华人民共和国卫生部.中国国家标准化委员会.《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 刘洋，陈枚.液相色谱法可同时检测安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸[J].食品质量安全与检测，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董刘敏，等.月饼中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸检测方法的研究[J].江西农业学报，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者简介：汤振华，昆山市产品质量监督检验所，工程师，研究方向：食品安全检测；周红霞，南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，研究方向：食品安全检测。