不同血液保存抗凝剂对采集红细胞影响的实验研究

李大鹏　吕丹　李震等

摘要：目的 设计添加谷氨酰胺的血液保存抗凝剂及探讨对红細胞的影响，总结其临床意义。方法 选取标本分实验组A和对照组B，每组均为相对应的1～10管，A组抗凝剂为标准枸橼酸钠溶液和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀释液，B组抗凝剂为标准枸橼酸钠液，比较两组标本在采血后第3、6、9、12d的血K+检测结果，并予以统计分析。结果 两组标本第3、6、9、12d血K+均高于正常值，A与B组内比较均有显著性差异（P<0.05）；A与B组间比较，第3d检测值有显著性差异（P<0.05）。结论标准枸橼酸钠溶液加入丙氨酰谷氨酰胺注射液制成新型血液保存抗凝剂，对红细胞抗凝及保护作用优于标准枸橼酸钠溶液。

关键词：血液；抗凝剂；丙氨酰谷氨酰胺；谷氨酰胺；枸橼酸钠

枸橼酸钠为常用的血液抗凝剂，枸橼酸钠、枸橼酸、无水葡萄糖可制成常用的ACD配方血液保存液。血液抗凝剂是影响采集存储红细胞的主要因素[1-2]，为提高血液抗凝及红细胞保存效果，笔者选择添加谷氨酰胺（glutamine，Gln）方式制成新型血液保存抗凝剂，并通过采集存储血液中血K+指标研究不同抗凝剂对采集红细胞影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1新型抗凝剂制备 由于Gln较难溶于水，且丙氨酰谷氨酰胺在血液中可迅速分解为丙氨酸和Gln，故添加Gln方式选取丙氨酰谷氨酰胺注射液（四川科伦，50ml：10g），加入0.9%氯化钠注射液50ml稀释。

按丙氨酰谷氨酰胺使用时其在与载体溶液混合液中最大浓度不能超过3.5%的要求，丙氨酰谷氨酰胺注射液稀释液按1：2比例加入标准枸橼酸钠溶液制成新型血液保存抗凝剂。新型抗凝剂按其中标准枸橼酸钠溶液与全血1：9体积比进行采血，4℃～6℃条件下保存。

1.2新型抗凝剂评价

1.2.1方法 选择添加与未添加Gln的血液保存抗凝剂采集血液并进行对照比较。

选20只试管均分为A、B组。A组为实验组，1～10管中分别加入3.8%枸橼酸钠溶液0.2ml和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀释液0.1ml；B组为对照组，1～10管分别加入3.8%枸橼酸钠溶液0.2ml。采集10名男性无偿献血官兵未抗凝静脉血，分别对应加入A、B两组1～10试管中，均加入1.8ml，充分摇匀并放置到4℃～6℃冰箱中保存待检。

采血后第3、6、9、12d，应用OlympusPu-2400全自动生化分析仪及其配套试剂，按操作规程进行标本血K+测定，正常范围3.5～5.5mmol/L。

1.2.2统计学方法 检验数据以均数±标准差（x±s）表示。选择SPSS13.0统计学软件进行处理，组间及组内比较采用均数t检验，P<0.05为具有显著性差异。

2 结果

采血后第3、6、9、12d检测血K+，A、B两组标本血K+均高于正常范围。

A、B两组组内不同时间检测数据均分为①～④组，以（x±s）表示。组内均按时间进行①②、②③、③④比较，均存在显著性差异（P<0.05）（见表1），提示血K+随标本放置时间延长而不断升高。

A、B两组组间均按①～④分别采用两样本t检验（见表1）：①t=3.088、P<0.05，有显著性差异；②t=0.792、P<0.5，无显著性差异；③t=0.168、P<0.5，无显著性差异；④t=0.331、P<0.5，无显著性差异。提示2种抗凝剂在采集血液3d内对红细胞影响存在显著性。

A、B两组红细胞外观检测：采血后第16dB组发生肉眼可见溶血，第19dA组发生肉眼可见溶血。见表1。

3 讨论

枸橼酸钠是国际上最通用的抗凝剂，是血液保存液中基本抗凝物质，具有抗凝及阻止溶血发生作用，应用十分广泛[3-4]。科学改良现有血液保存抗凝剂，提高临床输血及检验工作质量，成为当前重要研究课题[1，5]。

Gln可减少和对抗自由基对机体组织器官的损伤，提高血浆中谷胱甘肽水平及机体抗氧化水平[6，7]，其被酶解产生NH4增加红细胞膜的流动性及对机械压的抗性，减少自由基对红细胞膜的损伤而产生保护作用。为此，本文设计添加Gln的新型抗凝剂并选择红细胞外血K+作为评价指标，研究不同抗凝剂对采集存储红细胞的影响。

血液保存液是影响血液采集存储的主要因素，红细胞膜是最易受自由基攻击的目标。随血液存储时间延长，血液中自由基明显增多，导致细胞膜脂质过氧化，红细胞膜过氧化脂质显著增高，红细胞膜Na+K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活性显著下降[8]，使 Na+、Ca2+等转运失常，红细胞内Na+、Ca2+含量升高和钾离子外流，红细胞内钾离子降低，其膜上脂蛋白和脂质逐渐丧失，红细胞内2.3二磷酸甘油酸也逐渐降低，红细胞逐渐变形且脆性增加易发生溶血[9-10]，细胞外血K+成为反映红细胞膜稳定及代谢程度的重要标志，本文A、B两组组内不同时间检测血K+结果证明了这一点。

本文血液采集3d内A、B2组组间比较存在显著性差异（P<0.05），表明新型血液抗凝剂和标准枸橼酸钠溶液对红细胞保护作用存在显著性，新型抗凝剂对红细胞保护作用优于传统抗凝剂；采血后第6、9、12d两组组间数据比较均无显著性差异（P<0.5），可能与2种抗凝剂均未加入葡萄糖有关，因保存期内全血红细胞代谢所需能量主要由葡萄糖提供[11]。

参考文献：

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