不同产地烟草中1—脱氧1—L—脯氨酸—D—果糖化合物含量分析

陈修红　王叶　王军

摘要[目的] 分析比较不同产地烟叶中1脱氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）化合物含量的差异。[方法] 以水为溶剂，在超声辅助条件下提取烟叶样品中的ProFru物质，经过C18SPE固相萃取柱分离后利用高效液相色谱串联三重四级杆质谱对国内5个产地的30个烟草样品进行定量分析。[结果] HPLCMS/MS方法适用于烟叶中ProFru化合物的准确分析，测定烟草样品中ProFru化合物的含量在3～7 mg/g。四川、云南地区的烟叶样品中ProFru化合物的含量相对最为丰富。[结论]研究可为了解各烟叶性质，科学选用烟叶进行配方提供参考依据。

关键词烟草；1脱氧1L脯氨酸D果糖；液相色谱质谱串联；产地

中图分类号S572文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07557-02

是氨基酸与葡萄糖通过美拉德反应生成的关键中间产物之一，在烟草烤制、陈化、加工及燃吸等过程中均有不同程度的产生与积累[1]。这类化合物是重要的非挥发性香味前体物质，对卷烟的烟气质量有重要影响[2]，也是评价烟草感官质量和烟草加香研究的重要目标物之一[3-5]。我国烟草分布广泛，烟草种质资源丰富[6]，不同产地和品种的烟叶经过烘烤和醇化后其中的香味物质含量有较大区别，通过分析其中香味物质前体Amadori化合物的含量，对了解烟叶风味品质，选择烟叶提高烟叶配方科学性具有一定的借鉴意义。

烤烟型烟叶中的Amadori化合物以1脱氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）含量最为丰富，其含量约占Amadori化合物总含量一半以上，该物质对烟叶吸味具有积极贡献[7]，对评价烟叶质量具有参考价值。笔者采用高效液相串联质谱技术[8]对5个产地的30个样品中1脱氧1L脯氨酸D果糖化合物进行定量分析，比较该化合物在这批不同产地烟叶中的含量，以期为了解各烟叶性质，科学选用烟叶进行配方提供参考依据。

1材料与方法

1.1材料原材料：来自四川、云南、安徽、山东、河南5个产地，共30个烤烟单料烟叶样品。主要试剂：超纯水，去离子水经过MilliQ超纯水仪制得，18.2 MΩ·cm；甲醇，色谱级，北京百灵威科技有限公司；甲酸，纯度99%，Acros公司；ProFru物质，自制[9]。

主要仪器：Agilent 1260液相色谱仪，配置在线脱气机、二元泵、自动进样器、柱温箱、可变波长紫外检测器，美国Agilent公司；Agilent 6460QQQ质谱仪，美国Agilent公司；ZORBAX SBC18色谱柱（3.5 μm，2.1×150 mm），美国Agilent公司；ProElut C18SPE固相萃取小柱（100 mg/1 ml），DIKMA公司；ASE12固相萃取仪，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；KQ300型超声清洗器，昆山市超声仪器有限公司；FA1104B万分之一电子天平，上海越平科学仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1固相萃取小柱活化处理。用5 ml甲醇淋洗小柱，再用5 ml超纯水淋洗，控制流速在2滴/s。

1.2.2样品处理。烟叶样品冷冻干燥后磨成60目粉末，分别称取300 mg左右（精确到0.1 mg）的烟草粉末，定量加入200 ml超纯水，室温超声20 min，定容到250 ml，振荡5 min后再静置5 min。取上清液用0.45 μm微孔水系滤膜过滤，再取2 ml滤液用C18SPE固相萃取柱纯化，取中间流出的1 ml液体作为样液，分析备用。

1.2.3标准液制备。准确称取33.4 mg ProFru 化合物用超纯水溶解，定容于25 ml容量瓶中，配制成浓度为1.336 mg/ml标准品储备液，4 ℃冰箱保存备用。稀释成浓度为200.4 μg/ml的标准品母液，分别取50、100、200、300、500 μl标准品母液于5 ml容量瓶中，用超纯水定容成不同浓度的标准液。

1.2.4液质联用条件。ZORBAX SBC18为色谱柱，柱温30 ℃，流动相为含0.3%甲酸的甲醇：含0.3%甲酸的水以65∶35（V∶V）等度洗脱，流速为0.3 ml/ min，进样量20 μl；三重四级杆质谱采用多反应检测（MRM）模式，电喷雾正离子模式（ESI+）为离子化条件，毛细管喷雾电压为3 500 V，干燥气温度300 ℃，干燥气流量10 L/min，离子源雾化气压力310 kPa，鞘气温度250 ℃，鞘气流量11 L/min。

2结果与分析