玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠血清IL—2和IFN—γ含量的影响

杨鸿　邓桦　卢月媚　李敏深　蒲文珺

摘要[目的] 探讨玉屏风复合多糖对免疫低下小鼠的调节和保护作用。[方法] 以环磷酰胺80 mg/kg诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型，研究不同剂量玉屏风复合多糖（100、200和400 mg/kg）对小鼠脾脏指数、血清IL2和IFNγ含量的影响。[结果] 高剂量玉屏风多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾脏指数（P<0.05）。玉屏风多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量，尤其以中、低剂量组效果较好。玉屏风多糖能明显提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但对正常小鼠的IFNγ含量无显著影响。[结论] 该研究可为玉屏风复合多糖的临床应用提供试验依据。

关键词玉屏风复合多糖；IL2；IFNγ；脾脏指数；小鼠

中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）12-03571-02

基金项目广东省科技计划项目（2009B020307004）；广东省自然基金项目（S2013010012191）。

作者简介杨鸿（1966-），男，云南大理人，教授，博士，从事兽医药理学研究。

复方中药多糖免疫活性及其应用的研究已逐渐成为生命科学及天然药物研究的热点。玉屏风散是中医扶正固本的代表方剂，具有广泛的免疫增强作用[1]。玉屏风多糖（Yupingfeng polysaccharides，YPFP）为玉屏风散总多糖有效部位群，含黄芪多糖、白术多糖和防风多糖等，是该方剂临床药效的主要物质基础[2]。目前，玉屏风散组方中的单味多糖（如黄芪多糖和白术多糖）已在兽医临床用于免疫增强剂、疫苗佐剂、饲料添加剂以及疾病的辅助治疗[3-4]，而有关玉屏风复合多糖在畜牧兽医领域的研究和应用尚未见报道。基于此，笔者以环磷酰胺（Cyclophosphamide，CY）建立免疫抑制小鼠模型，研究不同剂量玉屏风复合多糖对小鼠脾脏指数、血清IL2和IFNγ水平的影响，旨在为玉屏风复合多糖的临床应用提供试验依据。

1材料与方法

1.1玉屏风多糖的制备将黄芪、白术和防风按3∶1∶1的重量配方。采用L9（34）正交试验设计优化水提醇沉的提取工艺，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。最佳提取工艺为：料液比1∶16、浸提时间1.5 h、浸提温度90 ℃、提取次数3次，然后抽滤、浓缩提取液，无水乙醇沉淀浓缩液12 h，取沉淀物经真空干燥，即得玉屏风复合多糖。经测定，玉屏风多糖得率为11.47%，多糖含量为36.38%。

1.3仪器和试剂全自动酶标仪（芬兰Labsystems公司）；环磷酰胺（江苏恒瑞医药有限公司，批号为12032725）；小鼠IL2和IFNγ ELISA检测试剂盒，购自上海亚培生物科技有限公司。

1.2实验动物模型与分组处理90只SPF级昆明小鼠（广东省医学实验动物中心），合格证书号为4407207211，雌雄各半，25～35日龄，体重16～20 g，随机分成6组，每组15只。设置空白对照组、阴性对照组（环磷酰胺免疫抑制组）、阳性对照组（仅灌服玉屏风复合多糖）、多糖高、中、低剂量组（玉屏风复合多糖+环磷酰胺）。1～10 d灌服玉屏风复合多糖，4、8、10 d腹腔注射环磷酰胺，11 d剖杀。具体分组与处理见表1。

1.4检测脾脏指数将小鼠摘眼球放血处死，进行系统剖解，观察脾脏和胸腺的形态变化；称取体重和脾脏重量，按照以下公式计算脾脏指数：脾脏指数=脾脏重量/体重。

1.5血清中IL2和IFNγ含量的测定每组随机选取6只小鼠采样，小鼠于11 d眼球采血，用离心管收集血液。待血液凝固后进行高速离心，3 000 r/min离心5 min，取血清。血清IL2和IFNγ含量的测定按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.6数据处理试验数据均用±s表示，使用SPSS 18.0统计软件进行方差分析和t检验。

2结果与分析

2.1小鼠体质量和脾脏指数的变化由表2可知，免疫抑制对照组、多糖各剂量组小鼠体重均显著降低，空白对照组和多糖阳性对照组体重最高（P<0.05）。除空白对照组和多糖阳性对照组外，其余各组脾脏指数显著降低（P<0.01）。其中，免疫抑制对照组脾脏指数最低，与多糖高剂量组差异显著（P<0.05）。这说明高剂量玉屏风多糖对小鼠脾脏有一定的保护作用。

2.2玉屏风多糖对小鼠血清IL2和IFNγ含量的影响由表3可知，免疫抑制对照组的IL2含量最低，与空白对照组差异极显著（P<0.01）；多糖高、中剂量组IL2含量均低于空白对照组；多糖高、中、低剂量组IL2含量均高于免疫抑制对照组，其中中、低剂量组差异显著或极显著（P<001或P<005）；多糖阳性对照组的IL2含量最高，显著高于其他各组（P<0.01）。

免疫抑制对照组的IFNγ含量明显低于空白对照组（P<001）；多糖高、中、低剂量组的IFNγ含量均低于空白对照组和阳性对照组（P<0.01或P<005）；多糖高、中、低剂量组的IFNγ含量明显高于免疫抑制对照组（P<0.01或P<005）；空白对照组和阳性对照组之间无显著差异。

3讨论

第4、8、10天用环磷酰胺80 mg/kg给小鼠腹腔注射环磷酰胺，小鼠的体重、脾脏指数、血清IL2和IFNγ含量较空白对照组明显降低（P<0.01或P<0.05），表明该方法能建立小鼠免疫抑制动物模型。

该试验结果表明玉屏风多糖对小鼠的生长无明显的影响。玉屏风多糖对正常小鼠脾脏指数无明显促进作用，高剂量组玉屏风多糖能提高免疫功能低下小鼠的脾脏指数（P<0.05），说明其对小鼠的脾脏功能有保护作用。笔者以前研究表明玉屏风复合多糖可以明显促进小鼠免疫抑制后脾脏结构和功能的恢复，高、中剂量组促进恢复的作用较低剂量组更佳[5]。

IL2是一种在机体的免疫调节中发挥着重要而复杂作用的细胞因子，既可以促进淋巴细胞增殖，增强免疫功能，又能限制 T 细胞反应而增强机体的免疫耐受[6]。IFNγ主要是由活化的T细胞和NK细胞产生的，是动物机体最重要的细胞因子之一，具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用[7]。该试验结果表明玉屏风复合多糖能提高免疫抑制的小鼠血清的IL2和IFNγ含量（P<0.01或P<0.05），尤其以中、低剂量组效果较好；玉屏风多糖能明显提高正常小鼠血清的IL2含量（P<0.01），但对正常小鼠的IFNγ含量无明显影响。

参考文献

[1] 杨鸿，陈杖榴，邓桦，等.加味玉屏风散对鸡红细胞免疫和自由基的影响[J].中國兽医科学，2005，36（1）：70-73.

[2] 陈向涛.复方中药玉屏风多糖的免疫调节作用及其机理的研究[D].合肥：安徽医科大学，2006.

[3] 左兆云，杨维仁，杨在宾，等.日粮添加黄芪多糖对蛋鸡机体抗氧化能力和鸡蛋品质的影响[J].中国兽医学报，2012，32（1）：130-134.

[4] 李赞阳，刘红，罗燕，等.不同组分 不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫活性影响的研究[J].中国畜牧兽医，2012，39（9）：181-184.

[5] 邓桦，杨鸿，张兆，等.玉屏风复合多糖对环磷酰胺免疫抑制小鼠的恢复作用[J].中国兽医学报，2014，34（2）：288-292.

[6] 常瑞雪，颜天华，王秋娟，等.白细胞介素-2 及其相关药物的应用研究进展[J].药学进展，2011，35（1）：1-6.

[7] 夏伦斌，王新华，连宏军，等.C干扰素及其在动物疾病防控中的应用[J].动物医学进展，2007，28（5）：74-78.