七菊芦荟饮治疗黄褐斑模型小鼠的实验研究

赵晶 李英姿 韩莹 张岩 李怀军

[摘要]目的：观察七菊芦荟饮对黄褐斑模型小鼠的治疗作用。方法：采用紫外线照射法建立黄褐斑小鼠模型，观察七菊芦荟饮对黄褐斑模型小鼠皮肤组织和血浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及酪氨酸酶含量的影响。结果：与模型组比较，七菊芦荟饮低、中、高剂量组的皮肤及血液中SOD活性明显增高，MDA、酪氨酸酶含量明显降低，且有显著性差异。结论：七菊芦荟饮对紫外线照射引起的黄褐斑模型小鼠具有较好的保护和治疗作用。

[关键词]七菊芦荟饮；黄褐斑；超氧化物歧化酶；丙二醛

[中图分类号]R758.4+2R332 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）05-0373-03

The experimental study on the treatment of Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes to chloasma mouse model

ZHAO Jing,LI Ying-zi,HAN Ying,ZHANG Yan,LI Huai-jun

(Jia Musi College, Heilongjiang University of Chinese Medicine,Jiamusi 154007,Heilongjiang,China)

Abstract:ObjectiveDiscussing the therapeutic effect of The Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes to chloasma mouse model induced by UV irradiation.MethodsThe model mice of chloasma had been set up by ultraviolet irradiation,with the xanthine oxidase method and thiobarbituric acid method for detection of SOD activity and MDA content.The content of tyrosinase measured by spectrophotometer.ResultsCompared with the model group,the SOD activity increased and the MDA and monophenyl oxidase content decreased in the group of the potion of pseudo-ginseng chrysanthemum aloes.ConclusionThe Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes has protective and therapeutic effect on chloasma model induced by UV irradiation.

Key words: The Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes; chloasma;superoxide dismutase (SOD);malonaldehyde(MDA)黄褐斑临床表现为常见的发生于面部的局限性淡褐色或黄褐色色素沉着斑。多见于成年女性。相当于中医的“黧黑斑”“肝斑”“面尘”等。由于该病好发于颜面部位，属多发性损容性慢性皮肤病，严重影响患者的身心健康，且发病有逐年增加的趋势，所以近几年逐渐成为皮肤科最常见的病种之一。本实验以紫外线照射法建立黄褐斑模型小鼠，研究七菊芦荟饮对模型小鼠皮肤和血液中SOD、MDA及黑色素组织分布形态的影响，并进一步探讨其作用机制。

1材料和方法

1.1 实验动物及分组：选取昆明种普通级雌性小白鼠60只，体重18g～20g，随机分为6组：空白对照组（A）、模型对照组（B）、阳性药物对照组（C）、中药低剂量组（D）、中药中剂量组（E）和中药高剂量组（F），称重标记，分开饲养。实验动物由佳木斯大学实验动物中心提供。

1.2 模型制备：先用剪刀剪去以上各组小鼠鼠背上的粗毛,再用电动剃须刀将剩余的绒毛剃除干净,使背部皮肤充分暴露，剃毛面积4cm×3cm。每周以10%Na2S水溶液小鼠背部脱毛一次。除空白对照组外，其余5组均以波长为320nm的中波紫外线(UVB)每日照射小鼠1次，照射时间60min，连续照射8周。

1.3 药物与试剂：七菊芦荟饮溶液（取三七根50g、白菊花50g煎药取汁，将新鲜芦荟20g榨汁加入制成）；维生素C泡腾片（国药准字H20044176，厦门美好医药有限公司生产）；10%的硫化钠水溶液(广州化学试剂厂，批号20001204-2)；SOD和MDA活性测定试剂盒（均购自南京建成生物工程研究所，批号20041221）。

1.4 仪器设备：SS-03型紫外线光疗仪（上海Sigma高技术有限公司）、半自动生化分析

SBA-710（长春塞诺迈得）、奥林巴斯BX41型研究用荧光显微镜（日本）、722N型分光光度计（上海精密仪器有限公司分析仪器厂）、电子分析天平FA2004N（塞多利斯）、PL602S型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，上海）、组织粉碎机FW135（天津泰斯特）、组织匀浆机JJ-2（金坛市荣华仪器厂）。

1.5 给药方法：各组均以灌胃方式给药，A、B组10ml/kg/天灌服蒸馏水，C组灌服维生素C溶液（按维生素C的剂量折算）, D、E、F组分别灌服七菊芦荟饮溶液10ml/kg/天、20ml/kg/天、30ml/kg/天，连续给药8周。

1.6 取材及指标测定

1.6.1 取材：实验第8周末，小鼠背部器械脱毛，面积为4cm×3cm。采用眼球摘除法取血3ml～5ml, 试管标号后置于离心机3000r/min～4000r/min离心, 取血清，按试剂盒说明书指示步骤进行血清SOD和MDA检测；将取完血液的实验小鼠全部断颈处死，取背部脱毛处全层皮肤(不含皮下脂肪)及肝脏组织适量，冷冻于-70℃冰箱内保存待测。

1.6.2 组织匀浆的制备：切取各组小鼠被测组织标本0.5g，用预冷生理盐水(4℃)冲洗，除尽杂质，用滤纸拭干，用眼科小剪尽量将组织块剪碎, 然后倒入玻璃匀浆管中。在匀浆器中加入4.5ml冷生理盐水进行充分匀浆，并浆液以4000r/min的速度离心10min。取上清液，按SOD试剂盒和MDA试剂盒严格按说明书操作,进行指标测定。

1.6.3 酪氨酸酶含量测定：取试管5支, 分别加入1ml L-多巴溶液(2mg/ml)和2.8ml0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.0)，摇匀，放入25℃恒温水浴箱中预热10min，再向上述试管中分别加入不同浓度的酪氨酸酶溶液1ml，立即混匀并准确计时, 25℃水浴反应5min。迅速加入0.2ml硫脲-乙醇溶液, 混匀, 终止反应。以0.1M磷酸盐缓冲液为空白对照管, 用754紫外可见分光光度计在波长475nm处测吸收值, 根据吸收值求得回归方程。将测得吸收值代入回归方程, 求得酪氨酸酶含量。

1.7 统计学处理：数据统计采用SPSS17.0统计软件进行分析，组间比较采用方差分析。

2结果

2.1 七菊芦荟饮对紫外线照射致黄褐斑模型小鼠皮肤组织及血液中SOD活性的影响，见表1。由表1可见，小鼠皮肤紫外线照射后,模型对照组皮肤组织及血液中SOD活性下降，与空白对照组比较，具有显著性差异（P<0.01）；与模型对照组比较，各给药组皮肤组织及血液中SOD活性显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；与阳性对照组相比，中药低、中、高剂量组均无显著性差异（P>0.05）；七菊芦荟饮低、中、高剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。

2.2 七菊芦荟饮对紫外线照射致黄褐斑模型小鼠皮肤组织及血液中MDA含量的影响，见表2。由表2可见，小鼠皮肤紫外线照射后,模型对照组皮肤组织及血液中MDA含量增加，与空白对照组比较，具有显著性差异（P<0.01）；与模型对照组比较，各给药组皮肤组织及血液中MDA含量显著降低，差别具有统计学意义（P<0.05）；与阳性对照组相比，中药低、中、高剂量组均无显著性差异（P>0.05）；七菊芦荟饮低、中、高剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。

2.3七菊芦荟饮对紫外线照射致黄褐斑模型小鼠血浆中酪氨酸含量的影响，见表3。由表3可见，小鼠皮肤紫外线照射后,模型对照组血浆中酪氨酸酶含量增加，与空白对照组比较，具有显著性差异（P<0.01）；与模型对照组比较，各给药组血浆中酪氨酸酶含量显著降低，差别具有统计学意义（P<0.05）；与阳性对照组相比，中药低、中、高剂量组均无显著性差异（P>0.05）；七菊芦荟饮低、中、高剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。

3讨论

黄褐斑是临床较为常见的损容性皮肤病之一，其发病的影响因素众多，发病机理较为复杂，最终病理上导致局部皮肤黑色素沉着过多。有实验研究显示，体内氧化与抗氧化之间的平衡失调为黄褐斑发生的重要原因和机制，正常情况下，超氧化物歧化酶SOD能有效清除多余的超氧自由基（如MDA）等，一旦这种平衡被破坏，就会造成膜脂质过氧化，色素细胞氧化性损伤，促进酪氨酸酶的氧化，最终致使黑色素形成活跃，沉积于皮肤产生黄褐斑。

七菊芦荟饮为自拟方，方由三七、芦荟和菊花组成，具有活血祛斑、驻颜嫩肤的功效。经实验结果显示：七菊芦荟饮能显著提高紫外线照射模型动物皮肤组织及血液中SOD的活性,降低MDA的含量和酪氨酸酶含量，使体内过氧化程度降低，黑色素细胞的生成减少，皮肤色素沉着减轻。由此可见，七菊芦荟饮对小鼠黄褐斑模型具有一定的保护和治疗作用。

[参考文献]

[1]张理平.黄褐斑病因学研究进展[J].福建中医学院学报,2001,11(2):61.

[2]刘邦民,张涓,陶春蓉,等.祛斑汤防治黄褐斑的实验研究[J].中药药理与临床,2008,24(1):67-69.

[3]苑光军,姜醒,刘斌,等.当归芍药散对黄褐斑模型SOD、MDA及病理形态学影响的研究[J].中医药信息, 2008,25(6):81-82.

[4]郑慕雄,郭义龙,陈玉兴.柴红丸治疗黄褐斑小鼠模型的实验研究[J].世界中西医结合杂志,2011,6(2):112-114.

[5]康金森,王雪飞,刘发,等.红玉祛斑胶囊对黄褐斑模型小鼠的影响[J].中药药理与临床,2013；29(4)∶134-136.

[6]周颖华.黄褐斑的病因及发病机理[J].中外医学研究,2011,9(34):163-164.

[7]王萍.本草养颜膏治疗黄褐斑的实验研究[J].中医研究,2008,21(7):9-11.

[8]邹宏超,付香莲.黄褐斑病因及发病机制研究进展[J].皮肤与性病杂志,2010,32(4):27-29.

[9]杨智荣,张丽宏.加减滋水清肝饮对皮肤SOD及脂褐质的调节作用[J].中国美容医学,2005,14(4): 485-487.

[10]过伟峰,徐立,项晓人,等.建立小鼠黄褐斑实验动物模型的初步研究[J].中国中医基础医学杂志, 2001,7(2):49-51.

[收稿日期]2013-01-18[修回日期]2014-02-28

编辑/张惠娟