七叶莲挥发油的GC/MS分析和抗炎镇痛作用研究

章立华 刘力 林小凤等

摘要[目的]研究福建七叶莲挥发油的化学成分，探讨七叶莲挥发油的抗炎镇痛作用。[方法]采用气相色谱-质谱联用技术对七叶莲挥发油的化学成分进行了分析，结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定，应用面积归一法计算各成分的相对含量，采用醋酸扭体法、小鼠耳二甲苯致炎肿胀法评价七叶莲挥发油的抗炎镇痛效果。[结果]从七叶莲部分挥发油中共分离出61种成分，并鉴定确认了其中53种主要成分，其中主要化合物和含量分别为4萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七叶莲挥发油可明显减少小鼠醋酸所致的扭体次数，可明显缓解小鼠二甲苯所致的耳廓肿胀。[结论]福建七叶莲挥发油中主要含萜品烯、醇类化合物，且其挥发油具有明显抗炎镇痛作用。

关键词七叶莲；挥发油；气相色谱-质谱法；抗炎镇痛作用

中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）23-07732-04

基金项目新疆医科大学大学生创新基金（CX2014035，XJC2011117）。

作者简介章立华（1987- ），男，江西南昌人，硕士研究生，研究方向：天然药物的开发。*通讯作者，副教授，硕士，从事天然药物化学研究。

收稿日期20140707七叶莲（Schefflera arboricola Hayata），五加科鹅掌柴属植物七叶莲，别名小叶鸭脚木、汉桃叶、七叶烂、七叶藤、七加皮、狗脚蹄、没骨消等，产于福建、台湾、广东等地，全年可采，以根、茎、叶入药[1]。本品性苦味甘、祛风除湿、活血止痛，对三叉神经痛、偏头痛、各种癌症及手术后的疼痛均有良好的疗效。《中国药典》（一部）1977年版对七叶莲有收载。近年来，一些学者对其药理作用、植物化学成分开展了大量研究[2-3]，目前相关文献报道七叶莲中含有三萜皂苷、挥发油、油脂、黄酮及苷等[4] 。药理研究表明该植物对中枢神经系统、心血管系统有较强作用，此外还具有抗肿瘤、抑制平滑肌收缩等作用[5-6]。笔者采用气相色谱-质谱联用技术[7-8]测定福建七叶莲挥发油的化学成分，采用醋酸扭体法、小鼠耳二甲苯致炎肿胀法[9] 评价七叶莲挥发油的抗炎镇痛作用，为进一步研究七叶莲挥发油的药理作用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象。试验所用的七叶莲采自泉州市清源山，经华侨大学分子药物学研究院副教授刘建福鉴定为七叶莲（Schefflera arboricola Hayata）的茎、叶。

1.1.2主要仪器。GC/MS 联用仪，TURBOMASSAUTOSYSTEM XL型（PE公司）；电子天平，AB135S（Mettler Toledo公司）；旋转蒸发仪，RE5298A（上海亚荣生化仪器厂）；循環水式多用真空泵，SHBⅢS（郑州长城科工贸有限公司）；三用恒温水箱，HHW600（江苏省金坛市医疗仪器厂）。

1.1.3主要试剂。二甲苯（批号20100126，沈阳市新化试剂厂生产）；角叉菜胶（批号G1013-05G，Sigma 公司产品）；吲哚美辛（批号840643，上海第十七制药厂）；醋酸地塞米松（批号091105，浙江仙琚制药股份有限公司）；其余试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1七叶莲叶挥发油提取与分离。 取新鲜七叶莲叶15 kg，水蒸汽蒸馏取馏出液，用乙醚萃取3 次，合并乙醚萃取液，减压蒸馏回收乙醚，用无水硫酸钠干燥24 h 后，过滤，得到具有特殊气味的无色挥发油5.97 g。

1.2.2GC/MS 联用仪条件。

1.2.2.1色谱条件。Supelcowax10 弹性石英毛细管柱，色谱柱长60 m，内径0.25 mm，分流进样，分流比60∶1，进样量0.25 μl，载气氦气（99.999%），载气流速16 psi，流量1.09 ml/min。进样口温度240 ℃，初始柱温65 ℃，以3.3 ℃/min的速率升至230 ℃，并保持10 min。

1.2.2.2质谱条件。电离方式为EI，功率70 eV，光电倍增270 V，质量扫描范围35～500 u，扫描间隔0.2 s，电子能量70 eV；离子源200 ℃，接口温度220 ℃，进样量0.2 μl。工作站名称Turbmass 4.1，标准质谱库NIST98，WILEY库。

1.2.3挥发油的成分鉴定。用GCMS联用仪进行全扫描分析；用化学工作站数据处理系统检NIST98图谱库进行谱图解析并确认挥发油中各成分的化学结构；利用该仪器所配的NIST98和Wiley7谱库进行自动检索，在对所得的谱图进行人工核对和补充检索，用面积归一法测得各组分的百分含量。

1.2.4小鼠足趾测定装置。根据毛细管放大法，用导管、活塞和移液管等自制而成。清洁级昆明种小鼠，雌雄兼用，体重20～22 g，购自福州市吴氏实验动物中心，合格证号2007000516322。喂食鼠颗粒饲料和自来水，给药前禁食12 h。

1.2.5醋酸扭体法镇痛试验。小鼠50只，雌雄各半，随机分成5 组。阴性对照组给予2% 吐温80溶液10 ml/kg，连续灌胃5 d；阳性对照组给予吲哚美辛溶液0.4 mg/kg，第4 天开始灌胃给药；样品组给予相应药物，连续灌胃5 d。末次给药后0.5 h，腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2 ml，用相机录像（常规方法上改进，保证记录时间的平行性），观察并记录小鼠15 min 的扭体反应次数，并计算扭体抑制率。

1.2.6对二甲苯诱发小鼠耳肿胀试验。雄性小鼠50只，随机分5组。阴性对照组给予2% 吐温80 溶液10 ml/kg，连续灌胃给药5 d；阳性对照组给予地塞米松溶液0.4 mg/kg，第4 天开始灌胃给药；样品组连续灌胃5 d。末次给药后0.5 h，小鼠左耳正反面各注射二甲苯于10 μl 致炎，15 min 后脱臼致死，用直径为8 mm 的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳片，称重，左右耳的重量差作为肿胀度，比较组间差异显著性。其中，肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%。

2结果与分析

2.1七叶莲挥发油化学成分分析对七叶莲挥发油气相色谱-质谱联用技术分析，得出七叶莲挥发油成分GCMS总离子图（）。从可以看出，各化合物分离效果较好，基线稳定，杂峰小和无拖尾峰，共分离出61种化合物。各色谱峰相应的质谱图经人工解析及计算机检索，确定其化学结构，共鉴定出53 种化合物，并用面积归一化法测定出相对含量（）。由可见，从七叶莲挥发油中共分离出61种化合物，53种化合物已经鉴别出，其中4-萜品醇含量最高，占20.40%；其次是（-）-斯巴醇，占16.01%；氧化石竹烯占8.90%；里那醇占5.23%；其他化合物均低于5%。

2.2七叶莲挥发油的抗炎镇痛作用

2.2.1醋酸扭体法镇痛试验。按“1.2.5”试验方法操作，结果表明（），与阴性对照比较，挥发油16 mg/kg 组可明显减少小鼠的扭体次数（P<0.01），说明七叶莲挥发油具有一定的抗炎镇痛作用。

2.2.2对二甲苯诱发小鼠耳肿胀的影响。按“1.2.6”试验方法操作，结果发现（），与阴性对照比较，挥发油16、8和4 mg/kg 组对二甲苯所致的急性炎症均有明显的抑制作用（P<0.01），且优于阳性对照组。说明七叶莲挥发油具有一定的抗炎镇痛作用。安徽农业科学2014年

七叶莲叶挥发油对醋酸所致小鼠扭体反应的影响组别剂量∥mg/kg扭体次数∥次抑制率∥%阴性对照-55.6 ± 2.20阳性对照0.428.3 ± 4.8*49.1挥发油1627.0 ± 4.2*51.4揮发油840.1 ± 3.527.9挥发油442.8 ± 3.723.0注：*表示与阴性对照比较差异显著（P<0.01）。

七

3结论与讨论

采用气相色谱-质谱联用技术对七叶莲挥发油的化学成分进行了分析，结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定，应用面积归一法计算各成分的相对含量，采用醋酸扭体法、小鼠耳二甲苯致炎肿胀法评价七叶莲挥发油的抗炎镇痛效果。结果表明，从七叶莲挥发油中共分离出61种成分，并鉴定确认了其中53种主要成分，其中主要化合物和含量分别为4-萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七叶莲挥发油可明显减少小鼠醋酸所致的扭体次数，可明显缓解小鼠二甲苯所致的耳廓肿胀。可见，福建七叶莲挥发油中主要含萜品烯、醇类化合物，且其挥发油具有明显抗炎镇痛作用。

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有定向创造遗传变异、优良基因高效重组和聚合等优点。通过转基因、点突变等手段创造转录因子的超表达转基因株系或突变体，可进一步解析其对抗逆相关基因的调控机理，为提高作物的抗逆性、培育新的抗逆品种奠定基础。

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