HPLC测定跌打丸中人参皂苷Rg1的含量

窦红允 黄东杰 李明 王孟阳 张洁 田永庆

（沧州市食品药品检验所，河北 沧州 061001）

HPLC测定跌打丸中人参皂苷Rg1的含量

窦红允 黄东杰 李明 王孟阳 张洁 田永庆

（沧州市食品药品检验所，河北 沧州 061001）

目的：建立跌打丸中人参皂苷Rg1的含量测定。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（78∶22）；流速：0.8 mL/min，检测波长为203 nm，柱温为30℃。结果：人参皂苷Rg1浓度在255.40～766.20 μg/mL与峰面积有良好的线性关系（r=0.998 5），平均回收率为92.8%（n=6），RSD为0.58%。结论：该方法快速、准确、重现性好，可作为跌打丸的质量控制方法。

跌打丸；高效液相色谱法；人参皂苷Rg1；含量测定

跌打丸为骨伤科常用的中成药，由三七、红花、血竭、骨碎补、乳香、没药、甘草等24味中药组成，具有活血散瘀、消肿止血之功效，用于跌打损伤、瘀血肿痛、闪腰岔气[1]，2010年收入《河北省纳入基本药物管理的非基本药物目录》。大蜜丸现收载于《中国药典》（2010年版）一部，小蜜丸执行《国家药品标准》（试行）——YBZ29212005。跌打丸大蜜丸质量标准中仅收载了血竭素的含量测定，对其君药三七无含量控制，皂苷成分是三七中的主要有效成分之一，迄今为止已从三七的不同部位分离得到 60余种皂苷成分[2]，其中人参皂苷Rg1含量较高，因此本研究以人参皂苷Rg1为含量测定指标，采用高效液相色谱法（HPLC）对方中的人参皂苷Rg1含量进行了测定，以完善其质量标准。

1 仪器与材料

岛津2010A高效液相色谱仪（日本），XS105DU电子天平（上海梅特勒公司），KQ-300VED型双频数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司），人参皂苷Rg1对照品（原中国药品生物制品检定所提供，批号110703-201027,含量96.3%）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

跌打丸（北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号0010209、0010221、12011653、12010456、12010463）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Agilent ZORBAX C18色谱柱 （4.6 mm× 250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）为流动相，流速：0.8 mL/min，检测波长为203 nm，柱温为30℃，进样量 20 μL，理论板数按人参皂苷 Rg1峰计算不低于 5 000；在此条件下供试品中的人参皂苷Rg1峰与相邻的色谱峰达到了基线分离。在本色谱条件下，对照品、供试品、阴性样品色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL约含500 μg的溶液。

图1 人参皂苷Rg1HPLC图

2.2.2 供试品溶液的制备取跌打丸，剪碎，取约3 g，精密称定，加硅藻土2 g，研匀，精密加入甲醇50 mL，精密称定，加热回流2 h，放冷，精密称定，补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液 25 mL，蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用乙醚30 mL洗涤，水液用水饱和的正丁醇振摇提取 3次（30，20，20 mL），合并正丁醇液，加氨试液 40 mL，摇匀，放置分层，上层溶液用正丁醇饱和的水40 mL洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方称取除三七外各味药材，按2.2.2方法制得阴性样品溶液。

2.3 线性关系考察

取上述对照品溶液，分别进样 10，15，20，25，30 μL，注入液相色谱仪，按2.1项色谱条件进行测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），人参皂苷 Rg1峰面积为纵坐标（Y），得回归方程，

Y=9 116＋ 434 374 X，r=0.998 5，

人参皂苷 Rg1在 255.40～ 766.20 μg/mL与峰面积有良好的线性关系。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验取供试品溶液，按2.1项色谱条件连续进样 6次，每次 20 μL，测定峰面积的RSD为0.76%，结果表明仪器的精密度良好。

2.4.2 稳定性试验取同一批号（12010463）供试品溶液，分别于0，4，8，12，16，24 h精密进样20 μL，测得人参皂苷Rg1峰面积的RSD为0.83%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.4.3 重现性试验取同一批号（12010463）供试品 6份，制备供试品溶液，按 2.1项色谱条件测定，计算人参皂苷Rg1质量分数。结果表明，样品中人参皂苷Rg1质量分数的RSD为0.68%。

2.4.4 加样回收试验分别精密量取人参皂苷Rg1对照品甲醇溶液（浓度为0.498 0 mg/mL）5 mL，置6个具塞锥形瓶中，水浴中挥干溶剂，再精密称取已测定含量的同一批样品6份（人参皂苷Rg1的含量为0.759 6 mg/g），分别加入上述具塞锥形瓶中，按2.2.2项下的供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，测定人参皂苷 Rg1含量，计算回收率，平均回收率为92.44%（n=6），RSD为0.68%。结果见表1。

表1 人参皂苷Rg1加样回收试验

2.5 样品含量测定

取跌打丸 5批（0010209、0010221、12011653、12010456、12010463），按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件，以外标法测定样品中人参皂苷Rg1的含量。结果样品中人参皂苷Rg1的质量分数分别为0.88，0.54，0.68，0.80，0.76 mg/丸（n=5）。

3 讨论

3.1 提取方法的选择

同一批号（0010209）样品，提取人参皂苷 Rg1的方法分别采用了索氏提取、超声提取、水浴加热回流提取这3种方法，提取时间均为 2 h，结果显示超声提取效果最差，索氏提取和水浴加热回流提取测定结果基本一致，因此采用相对简单的水浴加热回流提取方法。分别采用水浴加热回流提取 1，1.5，2，2.5 h，结果 2 h与 2.5 h效果差别不大，故采用水浴加热回流提取2 h作为提取方法。

3.2 流动相的选择

分别选择了甲醇-水、乙腈-水为流动相，结果乙腈-水峰形好，分离度比较高。

3.3 不同色谱柱的考察

分别采用了不同厂家的色谱柱 Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以乙腈-水（78∶22）为流动相进行试验，二者均达到满意的分离效果。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：1154.

[2] 鲍建才，刘刚，丛登立，等.三七化学成分的研究进展[J].中成药，2006，28（2）：246-254.

Content Determination of Ginsenoside Rg1in Dieda Pills by HPLC

Dou Hongyun，Huang Dongjie，Li Ming，Wang Mengyang，Zhang Jie，Tian Yongqing （Cangzhou Institure for Food and Drug Control，Hebei Cangzhou 061001，China）

Objective：To establish a HPLC method to determine ginsenoside Rg1in dieda pills.Methods：The column of Agilent ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（78:22）as mobile phase，the flow rate was 0.8 mL/min，the detection wavelength was at 203 nm and the column temperature was at 30℃. Results：There was a good linear relationship between ginsenoside Rg1at the concentration of 255.40～ 766.20 μg/mL and the peak area （r=0.998 5），and the average recovery was 92.8% （n=6），RSD was 0.58%.Conclusion：The method is simple，sensitive and accurate.It can be used for the quality control of dieda pills.

Dieda Pills；HPLC；Ginsenoside Rg1；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.05.003

2013-10-17）

窦红允，女，主管药师。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：sanxinglouzhu@126.com