高效液相色谱法测定宫炎康颗粒中芍药苷含量

杨 玲，杨 浩

（陕西省肿瘤医院，陕西 西安 710061）

宫炎康颗粒是由当归、赤芍、川芎、北败酱、香附、柴胡、泽兰、红花等12味药材经加工制成的颗粒剂，具有活血化瘀、解毒消肿之功效，临床上主要用于慢性盆腔炎[1]。目前该药品的质量标准中只有鉴别项，未建立有效成分的含量测定，其主要有效成分是芍药苷，经参考相关文献报道[2－8]，笔者采用高效液相色谱法对芍药苷的含量进行测定，该法操作简便、分离良好、重现性好、结果准确，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器和试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪；Sartorius BS224S型电子天平；KQ3200DE型数控型超声波清洗器。芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110736－200833）；宫炎康颗粒（市售品，批号为 20120506，20121130，20110921，规格为 8.30 mg /袋）；乙腈、甲醇均为色谱纯，水为哇哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent TC C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；检测波长:230nm；流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液（15∶85）:流速:0.8mL/min；进样量:10 μL；柱温:30℃。在此色谱条件下，参照 2010年版《中国药典（一部）》赤芍含量测定项下将理论板数，按芍药苷峰计算应不低于3 000[9]。色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品[7]0.005 2 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL溶液中约含芍药苷30 μg）。取装量差异项下本品，研细，精密称定0.5 g，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定质量，超声处理（功率150 W，频率40 kHz）20 min，取出放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，以0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方另取除赤芍药材外的其他药味，照供试品溶液处理方法制备成不含赤芍的阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:分别取2.2项下3种溶液，注入高效液相色谱仪，进样量10 μL，记录色谱图。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱主峰相同位置上有保留时间一致的峰出现，而阴性对照品溶液色谱在相应位置没有峰出现，(见图1)，表明该法专属性强。

线性关系考察:精密称取芍药苷对照品，加甲醇配制成质量浓度依次为 7.6，15.2，30.4，60.8，121.6 μg /mL 的溶液，各吸取10μL，依次进样，记录色谱图，以对照品溶液质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝1.4×106X－6 070，r＝0.999 6(n＝5)。结果表明，芍药苷进样量在 0.08～1.21 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照溶液，依法连续进样5次，记录色谱图。结果峰面积的 RSD为0.8%(n＝5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取新制备的供试品溶液（批号为20120506），分别在 0，2，4，6，8 h 时进样。结果进样量为 10 μL，记录色谱图。结果峰面积的 RSD为0.9%(n＝5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:分别精密称取样品（批号为20120506）5份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD为0.4%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:分别取已知芍药苷含量（批号为20120506）的供试品内容物，研细，取细粉适量（约为含量测定的1/2量）精密称定，共5份，分别置具塞三角瓶中，精密加入相当于含量1/2量的芍药苷对照品溶液（0.152 g /L，1.5 mL），按含量测定方法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果（n＝5）

2.4 样品含量测定

取对照品及3批样品，依法制备对照品溶液及供试品溶液，分别进样10 μL，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为20120506，20121130，20110921的3批样品中，芍药苷平均含量为 8.29，7.87，8.00 mg/袋。

3 讨论

赤芍为宫炎康颗粒方中的主要药味，本试验制订的赤芍含量测定方法简单、重复性好、精密度高。

取芍药苷对照品溶液，在200～400 nm波长处扫描，结果芍药苷在230，266，349 nm波长处处均有最大吸收，为与药典规定一致。故确定以230 nm为测定波长。

比较了多种流动相，流动相A为甲醇－0.05 mol/L磷酸二氢钾（33 ∶67），流动相 B 为乙腈 －0.1% 磷酸溶液（15 ∶85），流动相C为乙腈－0.1%磷酸溶液（10∶90），最终选择了流动相B，其分离好，柱温低，理论板数高，供试品主峰与杂质峰达到基线分离，保留时间适中。

本试验中还比较了样品超声处理时间，分别取10，20，30 min，结果超声20 min与超声30 min芍药苷的含量无明显差异，即超声20 min可提取完全，故超声处理时间定为20 min。

参考文献:

[1]WS3－B－3921－98，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第二十册）[S].

[2]韩 平，胡 敏，曹 阳，等.高效液相色谱法测定芍黄通便汤中芍药苷含量[J].中国药业，2011，20（24）:51 －52.

[3]王 芳，胡雪莲，陈 琳，等.高效液相色谱法测定胃灵胶囊中芍药苷含量[J].中国药业，2011，20（1）:17 －18.

[4]程新萍，孙文基，李新生.赤芍药材中芍药甙的含量考察[J].西北药学杂志，1998，13（1）:41.

[5]谢晓梅，余长柱，徐衡，等.赤芍饮片质量标准研究——芍药苷的含量测定[J].中国中药杂志，2004，29（8）:759 －761.

[6]周海玲，许舜军，杨 柳.HPLC法测定赤芍中芍药苷的含量[J].临床医学工程，2011，18（4）:487 － 488.

[7]周红涛，骆亦奇，胡世林，等.赤芍与白芍的化学成分含量比较研究[J].中国药学杂志，2003，38（9）:654 －657.

[8]林 海，胡 黎.不同产地赤芍中芍药苷的含量测定[J].中国医药指南，2009，7（16）:91 －92.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:147 －148.