阿魏酸钠氯化钠注射液细菌内毒素检查法研究

王相忍

（河南省濮阳市食品药品检验所，河南 濮阳 457000）

阿魏酸钠为非肽类内皮素受体拮抗剂，可拮抗内皮素引起的血管收缩、升压及血管平滑肌细胞增殖；可增加一氧化氮(NO)的合成，松弛血管平滑肌；抑制血小板聚集、抗凝血、改善血液流变学特征；抑制胆固醇的合成，调血脂。阿魏酸钠氯化钠注射液主要用于动脉粥样硬化、冠心病、脑血管病，亦可用于偏头痛，血管性头痛的治疗。其起效快，对轻、中、重各型患者均有效，是偏头痛的治本药物。笔者对阿魏酸钠氯化钠注射液细菌内毒素检查法的可行性进行了探讨。

1 仪器、试药与动物

ZH－2型自动漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）；TAL－40D型试管恒温仪（湛江安度斯生物有限公司）。阿魏酸钠氯化钠注射液（河南天方华中药业有限公司，批号为13032006，12040903，12101701，12101101；福建天泉药业股份有限公司，批号为12101101；规格均为 100 mL含阿魏酸钠 0.1 g与氯化钠0.9 g)；鲎试剂（简称 TAL，湛江安度斯生物有限公司，批号为1301262，规格为 0.1 mL，灵敏度为 0.25 EU /mL；湛江博康海洋生物有限公司，批号为1209030，规格为 0.1 mL，灵敏度为0.25 EU/mL）；细菌内毒素工作标准品（简称CSE，中国食品药品检定研究院，效价为100 EU/支，批号为150601－201176）；细菌内毒素检查用水（简称BET用水，湛江安度斯生物有限公司，批号为1207310，规格为2 mL）。家兔品种为日本大耳白兔（河南省实验动物中心提供）。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度（λ）的复核

按2010年版《中国药典（二部）》附录ⅪE的要求[1]对鲎试剂灵敏度进行了复核，结果见表1。所使用的鲎试剂灵敏度测试值（λc）均在 0.5 ～ 2.0 λ之间，符合规定。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.2 供试品细菌内毒素限值（L）的确定

根据公式 L＝K/M，K为每人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂 K＝5 EU/（kg·h），M为每人每千克体重每小时的最大供试品剂量[1]，参照阿魏酸钠氯化钠注射液说明书，最大使用剂量为100 mL/h，成人体重按60 kg，则 L＝3 EU/mL。对于体积在100 mL以上（包括100 mL）的复方静脉输液类品种，内毒素限值一般按0.5 EU/mL[2]。因此，将本品的 L定为0.5 EU /mL。

2.3 供试品干扰预试验

目前，国产鲎试剂灵敏度范围一般在 0.5～0.03 EU /mL，则样品的最大稀释倍数（MVD）＝CL/λ＝16。采用不超过最大稀释倍数的1，2，4，8，16 倍的溶液，记为 NPC；另制备同一系列浓度并含有2 λ细菌内毒素的样品阳性溶液，记为PPC。用 λ为0.25 EU/mL的两厂家TAL[2－3]，分别与上述NPC和PPC系列溶液进行反应，每一浓度重复2管，并设阴性对照（NC）和阳性对照（PC）各2管。结果见表2。可见，当样品稀释2倍时，对两个厂家TAL均不存在干扰作用。

表2 阿魏酸钠氯化钠注射液干扰预试验结果

2.4 供试品干扰试验

根据预干扰试验结果，取2个厂家的4批号样品制成稀释2倍的供试品溶液。用供试品溶液和BET用水分别将内毒素工作标准品稀释成 2，1，0.5，0.25 λ 的系列溶液，然后分别用 λ 为0.25 EU/mL的两厂家TAL，进行正式干扰试验[2]。结果见表3。内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值（ES）均在0.5～2.0 λ范围内，内毒素供试品溶液反应终点浓度的几何平均值（Et）均在0.5～2.0 Es范围内。结果表明，在此试验条件下，样品对TAL与细菌内霉素的反应无干扰。

表3 阿魏酸钠氯化钠注射液干扰试验结果

2.5 样品细菌内毒素检查

取4个批号供试品，照预干扰试验稀释方法制成稀释2倍的溶液，用 λ为 0.25 EU/mL 2厂家不同 TAL，以 L为 0.5 EU /mL作为评定标准，按检查法进行操作和结果判断。结果见表4。可见，4个批号样品经不同厂家的TAL检验，均符合规定。

表4 阿魏酸钠氯化钠注射液细菌内毒素检查结果

2.6 热原试验验证

取上述4个批号的样品，进行家兔法（10 mL/kg）热原检查试验，结果均符合规定。

3 讨论

现行的质量标准中采用传统的家兔法检查热原，成本高、时间长、影响因素多、灵敏度低。细菌内毒素检查法具有较家兔热原检查法灵敏、快速、简便易行、重现性好、结果准确等优点。采用2批不同厂家的鲎试剂对4批样品进行方法学验证试验，结果表明，当样品稀释2倍时对鲎试剂与细菌内毒素的反应无干扰作用，方法学验证结果也符合细菌内毒素检查法有效性的规定。建议积累更多的数据后，将该品种的细菌内毒素检查法（凝胶法）载入国家标准中。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录99.

[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M].北京:中国医药科技出版社，2010:310.

[3]肖贵南，孙清萍，盛英美.如何建立新药的细菌内毒素检查方法[J].中国医药导报，2011，8（32）:159 －161.