高效液相色谱法测定地芍消渴颗粒中盐酸小檗碱含量

莫武明

(梧州三箭制药有限公司，广西 梧州 543001)



高效液相色谱法测定地芍消渴颗粒中盐酸小檗碱含量

莫武明

(梧州三箭制药有限公司，广西 梧州 543001)

目的：建立高效液相色谱测定地芍消渴颗粒中盐酸小檗碱含量的方法。方法：色谱柱为Spherigel C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-水(55∶35)，流速为1mL/min，检测波长为345nm。结果：盐酸小檗碱在2.5～20μL进样量范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系，r=0.999 8(n=6)，回收率为101.6%，RSD=1.8%(n=5)。结论：高效液相色谱法操作简便，准确性高，重现性好，可用于地芍消渴颗粒中盐酸小檗碱含量的测定。

高效液相色谱法；地芍消渴颗粒；盐酸小檗碱；含量测定

地芍消渴颗粒由地黄、赤芍、黄连等十一味中药组成，具有滋阴清热、益气养血的功效，用于阴虚热盛兼血瘀型糖尿病的辅助治疗。该药原质量控制标准中已有丹参、赤芍、黄连、牛膝的薄层鉴别及赤芍含量测定方法。但该药组成成分较复杂，为更好地控制其质量，笔者对其含有的黄连的有效成分盐酸小檗碱进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Waters 501泵，484检测器，U6K进样器，SP290积分仪。盐酸小檗碱对照品购于中国食品药品检定研究院(批号：110713-200609)；甲醇、乙醇、乙腈等溶剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Spherigel C18(250mm×4.6mm，5μm)，由大连化学物理所提供。流动相：参照日本药局方中黄连的测定。根据以上试验结果，确定供试品溶液制备方法如下：取条件[1]调节比例：乙腈-水(55∶35)，每1 000mL流动相中含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g。流速：1mL/min，检测波长：345nm。

系统适用性试验：按上述色谱条件，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计为9 000，主峰与相邻色谱峰的分离度为1.5。连续进样数针，被测成分峰面积的RSD为1.6%。

2.2 对照品溶液配制

精密称取盐酸小檗碱对照品20mg，置于100mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液5mL，置于100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得10μg/mL对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

氧化铝除杂质试验：由于本品为复方制剂，成分复杂，向其中加入中性氧化铝(层析用，100～200目)后可除去大部分干扰测定的成分。经试验，在0.3g样品中加入中性氧化铝2g，用乙醇作提取溶剂，可起到较好的杂质吸附效果，且对盐酸小檗碱含量测定无影响。

不同提取方法试验：取同一批样品，分别用水浴加热回流20min，超声处理20min，测得其盐酸小檗碱含量分别为0.097 8、0.030 6mg/g，结果表明加热回流提取效率较高。

不同提取时间比较：取同一批样品，用乙醇作提取溶剂，分别提取不同时间，测定盐酸小檗碱含量，结果见表1。从表1可知，回流提取60min效果最好。

表1 不同提取时间含量测定结果

取地芍消渴颗粒适量，研细，精密称取约0.3g，置于150mL烧瓶中，精密加入乙醇25mL，称定重量，水浴加热回流1h，放冷至室温，称定重量，用乙醇补足减失重量；加入中性氧化铝2g，超声处理5min，稍放置，吸取上清液适量，离心，取离心上清液作供试液。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪测定，以峰面积外标法计算小檗碱含量，即得。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液2.5、5、7.5、10、15、20μL，分别进样分析，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，作线性回归，得回归方程为：

Y=71.3X+4.87， r=0.999 8

2.5 精密度试验

取同一批号的样品，按上述色谱条件重复进样测定5次，测得盐酸小檗碱含量分别为 0.797、0.779、0.793、0.783、0.790mg/g，平均值为0.788mg/g，RSD=0.9%，表明该仪器精密度良好。

2.6 回收率试验

取已知小檗碱含量的样品(批号110720)0.2g，精密加入适量盐酸小檗碱对照品，按含量测定方法测定，计算回收率，其中回收率=(C-A)/B×100%，结果测得平均回收率为101.6%，RSD=1.8%，该方法回收率满足要求，见表2。

表2 回收率测定结果

2.7 样品测定

按上述色谱条件测定4批样品中盐酸小檗碱的含量，不同批次样品的盐酸小檗碱含量差异较大，见表3。

表3 不同批次盐酸小檗碱测定结果

3 讨论

地芍消渴颗粒中的黄连味苦、性寒，具清热燥湿、泻火解毒的功效，盐酸小檗碱为其主要有效成分。研究表明[2-8]， 盐酸小檗碱具有降血脂、降血糖等作用，与通脉降糖颗粒的部分功效相符，可选作本品的质控指标之一。本文选用的高效液相色谱法操作简便、准确性高、重现性好，可用于地芍消渴颗粒中盐酸小檗碱含量的测定，进而控制本品质量。

[1] 日本药局方编辑委员会.日本药局方[M].第十三改正下册，2005:1118.

[2] 唐红黄.连素对不同中医证型2型糖尿病降糖作用临床研究[J].上海中医药杂志,2008,42(12):22-25.

[3] 陆灏.黄连素对实验大鼠胰岛素抵抗的影响[J].辽宁中医学院学报,2002,4(4):259-260.

[4] 张一波.黄连素降血糖及糖尿病慢性并发症的作用和机制[J].中国中医信息杂志,2003,10(1):83-84.

[5] 张茜.黄连素降糖调脂机制的研究[J].中国实验动物学报,2011,19(1):30-32.

[6] 朱卫东.黄连素治疗2型糖尿病200例效果观察[J].齐鲁护理杂志,2010,16(25):124-125.

[7] 孙秀琴.黄连素治疗2型糖尿病60例疗效观察[J].浙江中医杂志,2011,46(2):109-110.

[8] 李玉贤.黄连素作为抗糖尿病药物的临床应用及优势[J].中国实用医药,2010,5(12):255-256.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-01-09

莫武明(1963- )，男，广西梧州三箭制药有限公司总经理，执业药师，研究方向为制药学。

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