金莲花药渣及发酵物总黄酮含量测定

钱 庄，周 哲，石雪静，敖 杨，韩淑英，吕志伟

(河北联合大学，河北 唐山 063000)



金莲花药渣及发酵物总黄酮含量测定

钱 庄，周 哲，石雪静，敖 杨，韩淑英*，吕志伟

(河北联合大学，河北 唐山 063000)

目的：测定金莲花药渣及发酵物中总黄酮含量，为金莲花药渣资源的充分利用提供实验依据。方法：分别以水和乙醇-水为溶剂提取金莲花药渣及其发酵物中总黄酮；采用UV法，以芦丁为对照品，测定其中总黄酮含量。结果：金莲花原药材、金莲花药渣和药渣发酵物的水提物中总黄酮含量依次为8.16%、1.93%和0.93%；乙醇提取物中总黄酮含量依次为13.93%、9.27%和3.51%。结论：金莲花药渣中仍具有较高含量的黄酮成分，应充分开发利用其价值。

金莲花；药渣；发酵；总黄酮；UV法

中草药经药厂提取有效成分后的药渣仍含有一定量的活性成分，但多数中药渣被废弃掉，如何充分利用中药资源，解决中药渣环境污染，是亟待解决的问题。金莲花(TrolliuschinensisBunge)为毛茛科植物金莲花，富含黄酮类成分，如荭草苷、牡荆苷等[1]，具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化等作用[2]。目前，用金莲花制备的中药很多，用于治疗上呼吸道感、扁桃体炎、咽炎等，因此，每年有大量金莲花药渣废料。本文对金莲花药渣中主要成分总黄酮的含量进行了测定，旨在为金莲花资源的充分利用提供参考依据。

1 材料

1.1 药品及试剂

金莲花药渣(由唐山百善药业提供)，芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号0080-9705)，安琪高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)，蛋白胨(北京奥博星生物技术有限公司)，葡萄糖(天津市北方天医化学试剂厂)，无水乙醇为分析纯，水为超纯水。

1.2 仪器

电子天平(型号:FA2104N,上海菁海仪器有限公司)；恒温箱(型号:TO-2123，上海尚域环境仪器有限公司)；DHG102型电热干燥箱(山东潍坊医疗器械厂)；

水浴锅(型号:H.H.S 21-4B，上海医疗器械五厂)；离心沉淀机(型号LXJ-Ⅱ，上海医用分析仪器厂)；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

2 方法及结果

2.1 金莲花药渣发酵及总黄酮提取

2.1.1 金莲花药渣发酵[3-4]酵母菌活化增值：称取7g安琪干酵母置于锥形瓶中，同时加入100mL蒸馏水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒温箱中培养24h。药渣发酵：称取30g干燥金莲花药渣粉末，置上述活化增值酵母菌液中，再加入30mL蒸馏水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒温箱中继续培养48h，70℃烤箱干燥即得金莲花药渣发酵物。

2.1.2 发酵物中总黄酮提取[5-6]称取10g干燥的金莲花药渣发酵物2份，分别以10倍量的70%乙醇和水为溶剂，70℃水浴提取2次，每次2h，离心除去不溶性杂质，合并提取液，将提取液置蒸发皿中，70℃水浴浓缩至浸膏状，即得金莲花药渣发酵物的乙醇提取物(EELRT)和水提物(AELRT)，未发酵金莲花药渣和金莲花原药材的提取方法同上，即得金莲花药渣乙醇提取物(EERT)和水提物(AERT)以及金莲花原药材乙醇提取物(EET)和水提物(AET)。

2.2 UV法测定提取物中总黄酮含量[7-8]

2.2.1 对照品溶液制备 精密称定10mg芦丁对照品于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液制备 精密称定EET、AET、EERT、AERT、EELRT、AELRT各30mg于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，摇匀即得。

2.2.3 测定波长选择 精密量取一定量“2.2.1”项下的对照品溶液和“2.2.2”项下的供试品溶液，以30%乙醇为空白对照，在200～400nm波长范围内测定总黄酮的紫外吸收光谱，结果显示对照品和供试品在355nm波长附近均有最大吸收，故确定测定波长为355nm。见图1。

图1 对照品(a)和EET(b)吸收光谱

2.2.4 线性关系考察 精密量取“2.2.1”项下对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置25mL量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，以30%乙醇为空白对照，用紫外分光光度计在355nm波长处测定吸收度, 以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，计算得回归方程为Y=21.164 3X+0.020 7(R2=0.999 2)，线性范围为0.008～0.048mg/mL。

2.2.5 精密度考察 精密量取“2.2.1”项下对照品溶液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，测定其吸光度，其RSD为1.7%，表明该方法精密度较好。

2.2.6 重复性考察 精密量取“2.2.2”项下的同一供试液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，测定其吸光度，其RSD为1.2%，表明该方法重复性较好。

2.2.7 稳定性考察 精密量取“2.2.2”项下的同一供试液1mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，分别在0.5、1、2、4、8h测定其吸光度，其RSD为0.6%，表明该样品在8h时内稳定性较好。

2.2.8 加样回收率试验 移取已知总黄酮含量的样品溶液3mL，共9份，分别置25mL容量瓶中，再按低、中、高系列浓度分别加入“2.2.1”项下对照品溶液1mL、1.5mL、2.0mL，每种浓度各3份，用30%乙醇定容，测定其吸光度，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.2.9 提取物中总黄酮含量测定 精密量取“2.2.2”项下的供试液各3mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，测定其吸光度，依回归方程计算提取物中总黄酮的含量，结果见表2。

表2 提取物中总黄酮含量测定结果

3 讨论

本实验采用金莲花药渣为原材料，首次研究了分别以水和70%乙醇为溶剂提取金莲花药渣及其发酵物中总黄酮，并与相同提取工艺下金莲花原药材中总黄酮含量进行比较，结果表明，金莲花药渣乙醇提取物中总黄酮含量为9.27%，金莲花原药材乙醇提取物的总黄酮含量13.93%，虽然药渣中总黄酮含量低于原药材，但只减少了1/3，说明药渣中还有2/3的总黄酮没有被提取出来；以水为溶剂提取金莲花药渣总黄酮含量较低。目前多数药厂主要以水为溶剂提取金莲花中药用成分，故金莲花药渣中仍残存较高含量的黄酮成分，由此说明金莲花药渣仍具有较高的利用价值。

本实验利用中药发酵技术[9]将金莲花药渣进行了发酵，结果表明，发酵后的药渣中总黄酮含量明显低于未发酵的药渣，黄酮成分含量降低的原因可能是药渣中部分黄酮类成分经过酵母菌代谢产生了新物质[9]，具体是什么物质有待进一步研究。

[1] 葛晓艳.浅析金莲花的药用研究概况[J].黑龙江医药,2012,25(3):444-445.

[2] 刘婉莹,傅立新,任立楠.金莲花的药理活性研究[J].中国医药指南,2013,11(21):454-455.

[3] 桑秀妹,高华君,敖杨,等.金莲花药渣发酵物葡萄糖含量测定及影响因素[J].河北联合大学学报：医学版,2013,15(6):803-804.

[4] 王珊,桑秀妹,高华君,等.金莲花药渣发酵物对小鼠应激能力的影响[J].河北联合大学学报：医学版,2013,15(6):800-801.

[5] 孔庆兰,韩志强,李薇,等.金莲花提取工艺研究[J].辽宁中医药大学学报,2013,15(6):43-44.

[6] 萨楚拉图,莎木嘎,赵智宏,等.芙蓉花中总黄酮的提取工艺研究[J].内蒙古农业大学学报,2012,33(5-6):306-308.

[7] 苏连杰,张卫平,赵波,等.不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷的动态变化研究[J].中草药,2012,43(10):2058-2061.

[8] 严力群,丁万隆,朱殿龙.坝上地区金莲花及其茎叶总黄酮的测定[J].世界科学技术——中医药现代化,2009,11(3):407-409.

[9] 卢君蓉,王世宇,盛菲亚,等.中药发酵研究概况[J].中药与临床,2012,3(4):47-49.

(责任编辑：宋勇刚)

2014-04-05

教育部大学生创新创业训练计划项目(201210081007)；唐山市“十二五”科技重点项目(10130203-3)；河北联合大学大学生创新实验计划项目(X2013062)

钱庄(1991-)，男，河北联合大学在读生，研究方向为中药药理学。

韩淑英(1959-)，女，河北联合大学教授，硕士生导师，研究方向为中药防治心血管疾病。E-mail:shuyinghan59@126.com。

R284.2

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1673-2197(2014)15-0022-02