艾塞那肽对非酒精性脂肪肝病大鼠总蛋白及总胆红素改善作用研究

武俊紫，牛世伟，李 燕*

(1.昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明 650504；2.云南省第一人民医院 干部保健科，云南 昆明 650036)



艾塞那肽对非酒精性脂肪肝病大鼠总蛋白及总胆红素改善作用研究

武俊紫1,2，牛世伟2，李 燕2*

(1.昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明 650504；2.云南省第一人民医院 干部保健科，云南 昆明 650036)

目的：探讨艾塞那肽对高脂诱导非酒精性脂肪肝病大鼠(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)肝脏切片HE染色、肝脏占大鼠体重百分比、大鼠体重、总胆红素(TBIL)以及总蛋白(TP)的影响。方法：将100只大鼠随机分为空白对照组(CON)、模型对照组(HFD)和艾塞那肽低、中、高(ELD、EMD、EHD)剂量治疗组，每组各20只。HFD、ELD、EMD和EHD组均采用灌胃法建立SD大鼠NAFLD模型，12周造模成功后，ELD、EMD和EHD治疗组分别给予艾塞那肽1μg、2μg和4μg，每天治疗1次；HFD组给予生理盐水辅助治疗，CON组不加以任何干预。分别于治疗第4周、第8周后处死大鼠各半，观察相关指标改善情况。结果：治疗后ELD、EMD和EHD组大鼠肝脏切片HE染色无任何脂滴浸润现象，大鼠肝脏占体重百分比呈现出明显的下降(P<0.05)，大鼠的体重、总胆红素和总蛋白含量也明显改善。结论：艾塞那肽可明显降低非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏脂肪含量，总胆红素和总蛋白含量也均得到明显改善。

艾塞那肽；非酒精性脂肪肝；大鼠；总蛋白；总胆红素

肝脏为人体内最重要的代谢器官之一[1]，主要负责糖、脂肪、蛋白质及维生素等物质代谢，同时还担负着解毒、胆汁分泌、免疫及凝血等生理生化功能。由于生活习惯或基因的影响，腹部脂肪沉积，造成脂肪在肝脏细胞内过量堆积，从而导致非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)[2]。艾塞那肽为胰高血糖素类似物，在体内可明显提高胰岛素含量，且无血糖依赖性[3]。根据非酒精性脂肪肝模型大鼠试验，测定艾塞那肽对大鼠总蛋白和总胆汁酸的干预作用，探讨艾塞那肽对非酒精性脂肪肝病的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验分组 雄性SD大鼠100只，体重为160～180g。在适应性喂养2周后随机分为空白对照组(CON)、模型对照组(HFD)及艾塞那肽低、中、高(ELD、EMD、EHD)剂量治疗组，每组各20只。SD大鼠、基础饲料及饲养垫料均由昆明医科大学动物实验部提供。

1.1.2 高脂溶液配制 高脂溶液的化学成分为97%猪油、2%胆固醇与1%胆酸钠，大鼠灌胃量为每100g大鼠体重灌1mL高脂溶液，每天早上灌胃1次。

1.1.3 药品与试剂 胆固醇(北京鼎国生物技术公司)；胆酸钠(上海金穗生物公司)；猪油；艾塞那肽；总胆红素、直接胆红素和间接胆红素(酶法)、总蛋白、白蛋白和球蛋白(酶法)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 非酒精性脂肪肝模型的建立 空白对照组全程只喂食普通饲料，模型对照组与艾塞那肽组给予高脂溶液灌胃12周，促使NAFLD模型的形成。造模成功后， 艾塞那肽低、中、高剂量治疗组分别给予艾塞那肽1μg、2μg和4μg治疗，分别于治疗第4周和第8周处死大鼠各半，测定相应指标。

1.2.2 血清采集 大鼠称重后采用腹腔内注射3%水合氯醛2mL麻醉；麻醉后，大鼠四肢及头部固定在解剖台，无菌操作暴露腹腔，于心脏迅速取血；血液分装于1.5mL的离心管内离心(5000r/s)，分离取上清液于-86℃保存，取出肝脏称重后放入超低温冰箱储存。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 肝脏切片HE染色

CON组无任何脂滴浸润现象，HFD组有不同程度的细胞变性及脂肪空泡，4周时治疗组脂肪空泡明显减少；8周时治疗组脂肪空泡进一步减少，且EMD和EHD组看不到任何脂肪空泡。具体见图1。

2.1 大鼠肝脏比例对比

对各组大鼠处死前其肝脏重量与大鼠体重进行比较，其中以模型对照组所占比例最高，空白对照组比例最低。治疗4周后，艾塞那肽低、中剂量组相比于模型组有一定的降低(P>0.05)，艾塞那肽高剂量组与模型对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；治疗8周后，艾塞那肽治疗组与模型组相比均明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

图1 肝脏切片HE染色

表1 处死大鼠时大鼠肝脏所占比例对比

注：与模型组相比，*P<0.05。

2.2 治疗前后大鼠体重比较

治疗开始时各组大鼠体重均无明显差异，从第2周开始空白组和模型组大鼠体重增长，艾塞那肽低剂量组与模型组相比有一定的降低(P>0.05)；从第6周开始中剂量组与模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)；从第4周开始高剂量组和模型组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2 治疗前后各组大鼠体重对比

注：与模型组相比，*P<0.05。

2.3 大鼠血清胆碱酯酶、胆红素比较

治疗4周后，艾塞那肽治疗组血清中总胆红素、直接胆红素以及间接胆红素均得到了改善，几乎恢复正常水平(P<0.01)，详见表3。从第4周开始，血清总胆红素、直接胆红素以及间接胆红素呈下降趋势，治疗8周后与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

表3 治疗4周大鼠胆碱酯酶、胆红素的各组比较

注：与模型组相比，*P<0.01。

2.4 大鼠血清总胆汁酸、总蛋白、白蛋白及球蛋白比较

艾塞那肽治疗4周后治疗组与模型组相比，血清总蛋白、白蛋白及球蛋白有一定的降低，详见表5。 治疗8周后，治疗组艾塞那肽血清总蛋白、白蛋白以及球蛋基本维持第4周水平，比较差异有统计学意义(P<0.05),详见表6。

表4 治疗8周大鼠胆碱酯酶、胆红素的各组比较

注：与模型组相比，*P<0.05。

表5 治疗4周大鼠总胆汁酸、总蛋白、白蛋白及球蛋白比较

注：与模型组相比，*P<0.05。

表6 治疗8周大鼠总胆汁酸、总蛋白、白蛋白及球蛋白比较

注：与模型组相比，*P<0.05。

3 结论

目前随着肥胖、糖尿病及其它相关代谢综合征在全球的流行，NAFLD已成为我国乃至世界最为流行的慢性肝病之一[4]。一般而言，NAFLD大多数患者没有典型症状，但如果任由其继续发展，可能会出现疲乏、食欲不振、腹胀、嗳气、肝区胀满等症状[5]，甚至发展为失代偿期肝硬化、肝细胞癌等[6]。近些年NAFLD的相关研究广受医学界的重视，但至今为止仍未发现治疗NAFLD的特效药物，因此寻找有效的NAFLD治疗药物乃当前医学界研究的热点。

有文献报道，高脂饲料喂养的NAFLD模型大鼠体重显著高于普通饲料所喂养的大鼠[7]，但可能存在个别现象影响造模效果，因此实验大鼠造模采用高脂溶液灌胃方法，模型组大鼠体重明显低于空白组，可能是由于艾塞那肽具有明显的脂质代谢作用。本实验采用高脂饮食灌胃SD大鼠成功建立NAFLD模型，模型组肝脏重量与大鼠体重百分比第8周时高达(3.0%±0.2%)，超过空白组的(2.5%±0.2%)，表明脂肪颗粒已经大量附着在肝细胞。采用艾塞那肽治疗后，8周后其肝脏切片可达到正常水平，肝脏所占大鼠体重百分比与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，表明艾塞那肽可明显减少NAFLD肝脏中沉积的脂肪颗粒，起到保护肝脏的作用。

总胆红素是用来诊断肝脏或胆道是否发生异常的一个重要指标[8]。血清胆红素的升高，表明肝细胞处理、胆红素的排泄发生障碍。总胆红素由直接胆红素和间接胆红素构成，间接胆红素经肝脏代谢又可变为直接胆红素，随胆汁排入胆道，最后经大便排出。肝细胞受损后，直接胆红素不能排入肠道，导致体内直接胆红素偏高[9]。本研究发现，模型组大鼠血清总胆红素、间接胆红素及直接胆红素与空白对照组相比明显升高，艾塞那肽治疗第4周时改变明显(P<0.05)，提示艾塞那肽具有改善肝脏代谢功能，有助于胆红素代谢恢复正常；但治疗第8周后血清总胆红素呈明显的下降趋势，且低于空白对照组。总蛋白是由白蛋白和球蛋白组成，慢性肝病及一些慢性感染类疾病会造成总蛋白略微偏高。本研究结果证明非酒精性脂肪肝病发生时，血清总蛋白、白蛋白及球蛋白均有略微升高，经艾塞那肽治疗后，可得到改善。

综上所述，艾塞那肽可明显降低非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏脂肪含量，对总胆红素和总蛋白均具有明显的改善作用。

[1] BRIOHNY W，SMITH, LEON A，ADAMS. Non-alcoholic fatty liver disease[J].Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences,2011,8(3):97-113.

[2] SUBRAMANYAM D, SUBBAIAH KV, RAJENDRA W, et al.Serum selenium concentration and antioxidant activity in cervical cancer patients before and after treatment[J].Exp Oncol. 2013,5(2):97-100.

[3] LM，ALBA, K LINDOR.Non-alcoholic fatty liver disease[J].Alimentary Pharmacology & Therapeutics，2003,7(8):977-986.

[5] TARANTINO G, FINELLI C.What about non-alcoholic fatty liver disease as a new criterion to define metabolic syndrome[J].World J Gastroenterol,2013,19(22):3375-3384.

[6] ANIL ARORA,PRAVEEN SHARMA.Non-invasive Diagnosis of Fibrosis in Non-alcoholic Fatty Liver Disease[J].Journal of Clinical and Experimental Hepatology,2012,2(2):145-155.

[7] ARON M, LEROYER AS, MAJD Z,et al.PPARα activation differently affects microparticle content in atherosclerotic lesions and liver of a mouse model of atherosclerosis and NASH.[J].Atherosclerosis,2011,18(1):69-76.

[8] KWAK MS, KIM D, CHUNG GE, et al.Serum bilirubin levels are inversely associated with nonalcoholic fatty liver disease[J].Clin Mol Hepatol,2012,18(4):383-390.

[9] JANG BK.Elevated serum bilirubin levels are inversely associated with nonalcoholic fatty liver disease[J].Clin Mol Hepatol，2012，18(4):357-359.

(责任编辑：李岚春)

Research Exenatide to Total Protein and Total Bilirubin of Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Rats

Wu junzi1,2,Huang Hong2, Liu Hua2,Li Yan2*

(1.College of Life Science and Technology , Kunming University of Science and Technology,Kunming Yunnan 650504;2. Cadre Health Care of The First People's Hospital of Yunnan Province, Kunming Yunnan 650031)

Objective:Discuss exenatide on fat-induced non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD) in rats, rat body weight, total bilirubin (TBIL) and total protein (TP).Methods:Rats were divided into control group (CON), model group (HFD), and exenatide low, medium and high (ELD, EMD and EHD) dose group, HFD group and the treatment group with exenatide NAFLD model established gavage SD rats, 12 weeks after successful modeling, ELD, EMD and EHD groups were given exenatide 1μg, 2μg and 4μg once daily, HFD group received its saline adjuvant therapy, CON group did not impose any interference, after 4 and 8 weeks the rats were sacrificed and female, observed improvement related indicators.Results:Rat liver after treatment exenatide HE staining ELD, EMD and EHD groups treatment groups do not see any infiltration of lipid droplets, the percentage of rat liver showing a significant decrease in body weight(P<0.05), another exenatide may also be significantly improve rat body weight, total bilirubin and total protein content.Conclusion:Exenatide for non-alcoholic fatty liver disease in rat liver fat content, total bilirubin and total protein with significant improvement.

Exenatide; Nonalcoholic Fatty Liver Disease; Rat; TP；TBIL

2014-04-22

云南省科技厅-昆明医科大学联合专项基金项目(2011FB225)

武俊紫(1986-)，男，昆明理工大学生命科学与技术学院硕士研究生，研究方向为脂肪肝、糖尿病等代谢性疾病。

李燕(1961-)，女，教授，云南省第一人民医院干部保健科主任医师，研究方向为老年病、神经相关以及代谢性疾病。E-mail: liyanken@126.com。

R977.6;R575.5

A

1673-2197(2014)16-0006-03