醇提取法提取大黄中蒽醌成分研究

张 立

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430010)



醇提取法提取大黄中蒽醌成分研究

张 立

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430010)

目的：研究大黄中蒽醌成分提取方法。方法：以提取率、纯度为研究指标，采用醇提取法提取大黄中蒽醌成分。结果：3种单体成分的提取率依次为大黄酸0.3%、大黄素0.6%、大黄酚0.1%；单体纯度分别为大黄酚86.0%、大黄素83.6%、大黄酸81.5%。结论：与单纯采用pH缓冲溶液萃取大黄蒽醌类有效成分相比，醇提取法具有费用低、操作简单、提出率较高等优点，高压制备系统分离效果较好，有效成分纯度较高，为大黄中蒽醌类成分提取提供了参考依据。

大黄；蒽醌；醇提取法

大黄药物成分比较复杂，蒽醌为其主要成分之一，具有泻下作用。大黄性寒，味苦，主要药效为消炎止血、行癖化积、清热泻下。过去多采用煎煮工艺提取大黄中蒽醌成分，该工艺不仅提取率极低，且还会因长时间高温导致蒽醌结构受到破坏，影响药效[1]。超声法、热回流法能够有效提高蒽醌的提取率，防止长时间受热蒽醌结构受到破坏，从而保持药效。本文采用醇提取法提取大黄中蒽醌成分，并对提取工艺进行深入分析和研究，以期进一步提高蒽醌类成分的纯度及提取率，为大黄中蒽醌类成分提取提供参考依据。

1 提取及分离

1.1 大黄中蒽醌类成分提取

取大黄根茎适量，研磨成粉末，过20目筛，称取滤过粉末140g，放入烧瓶中，加入700mL浓度为95%的乙醇，置于79℃水浴，0.5h后回流提取，连续提取4次；将4次提取液混合过滤，浓缩到100mL，加入280mL稀硫酸(2.5mol/L)，置于沸水浴5min，在回流水解作用下，蒽醌甙转化为游离甙，依次采用乙醚150mL一份、100mL两份、50mL两份萃取水解液，混合萃取液，水浴除去乙醚。

1.2 蒽醌类成分分离

1.2.1 大黄酸混合物Ⅰ制备 大黄蒽醌类成分主要包括大黄酚、大黄素、大黄酸等，具有不同的酸度，萃取分离分别采用相应的pH溶液。在分液漏斗中加入乙醚萃取液，缓冲液为pH 8.0的硼酸盐溶液，每次萃取用量为75mL，连续2次。将2次萃取液合并采用稀盐酸调节pH至3.0，静置沉淀过滤，对所得沉淀物进行干燥处理，并采用丙酮结晶，即得大黄酸混合物Ⅰ。

1.2.2 大黄素混合物Ⅱ制备 萃取液所得醚层依次加入200mL、100mL的硼酸盐缓冲液(pH为 9.2)，连续萃取2次。将2次萃取液合并采用稀盐酸调节pH至3.0，静置沉淀过滤，对所得沉淀物进行干燥处理，并采用丙酮重结晶即得[2]。

1.2.3 大黄酸、大黄素及大黄酚制备 混合大黄酸混合物Ⅰ和大黄素混合物Ⅱ，加入甲醇完全溶解，过滤，采用高压制备系统(型号DeLtar4000)分离滤液，根据色谱条件分别收集3次高峰流分(分别以A、B、C表示)。将得到的3份流出液置于75°C左右水浴蒸发浓缩，至溶液20mL，放置结晶，过滤取沉淀物采用丙酮进行重结晶，所得A、B、C分别为大黄酸、大黄素和大黄酚。采用色谱分析仪分析3种样本色谱，与标准品进行比较分析。

1.3 HPLC色谱分析及计算

1.3.1 色谱分析 制备得到A(大黄酸)、B(大黄素)和C(大黄酚)3种单体结晶，纯化进行色谱分析，参照标准品进行比较分析。

1.3.2 提取率 采用电子天平称重得到的3份单体成分，计算出提取率[3]：提取率=单体重量/滤过粉末重量×100%。

1.3.3 纯度分析 分别精密称取3份单体结晶适量，加入适量甲醇溶液溶解制成样品溶液，根据色谱条件对溶液进行定量、定性分析。根据标准曲线方程，计算所得峰面积得出溶液浓度，分别算出3种单体结晶的纯度[4]。

2 HPLC色谱分析

2.1 线性范围考察

2.1.1 大黄酸线性关系 在大黄酸标准液中加入甲醇溶液稀释，溶液浓度分别为：3、6、12、24、48μg/mL，根据色谱分析条件每个样本各进样3次；计算峰面积，横坐标为溶液浓度，纵坐标为峰面积，所得回归方程为：Y=75 634.37X+31 943.17(r=0.999 6)，线性回归后测定结果显示：大黄酸溶液在浓度(0.48～7.5)×10-3μg/mL范围内线性良好。

2.1.2 大黄素线性关系 在大黄素标准液中加入甲醇进行稀释，制备所得的溶液浓度分别为：1.3125、2.625、5.25、10.5、21、42、84μg/mL，根据色谱分析条件每个样本各进样3次；计算峰面积，横坐标为溶液浓度，纵坐标为峰面积，所得回归方程如下：Y=27 561.25X-128.3(r=0.999 8)，线性回归后测定结果显示：大黄素溶液在浓度(0.84～1.3125)×10-2μg/mL范围线性良好。

2.1.3 大黄酚线性关系 在大黄酚标准液中加入甲醇进行稀释，制备所得的溶液浓度分别为：0.234 5、0.469、0.938、1.875、3.75、7.5、15μg/mL，根据色谱分析条件将每个样本各进样3次，计算出峰面积，横坐标为溶液浓度，纵坐标为峰面积，所得回归方程为：Y=44 242.47X-2613.80(r=0.999 8)，线性回归析测定结果显示：大黄酚溶液在浓度(0.15～2.345)×10-3μg/mL范围线性良好。

2.2 灵敏度

该方法测定浓度最低值分别为：大黄酸7.56μg/mL，大黄素13.13μg/mL，大黄酚2.35μg/mL。

2.3 色谱结果

采用pH缓冲溶液提取液中蒽醌类成分仅包含大黄酸、大黄素2种，且纯度较低，色谱显示两种成分并不能明显分离，所得样品Ⅰ、Ⅱ色谱基本相似，因此该方法不能得到大黄蒽醌类单体成分。

图1 大黄酸、大黄素、大黄酚HPLC色谱

醇提取法能够有效分离大黄中蒽醌类成分得到大黄酸、大黄素、大黄酚。醇提取法提取液中包含3种单体成分，且含量均较高，色谱显示3种成分混合与标准图一致。采用醇提取法，大黄酸、大黄素、大黄酚单体成分收率极佳，纯度高达80.0%以上。详见图1。

3 结果

3.1 提取效果

由大黄原料提取得到大黄酸、大黄素和大黄酚3种单体成分，黄色结晶物质为大黄酸，桔红色且呈针状物质为大黄素，黄色颗粒状物质为大黄酚，分别计算各成分的提取率，详见表1。

表1 3种单体成分提取效果

3.2 纯度分析

根据色谱分析上述3种单体成分纯度，结果为：大黄酚86.0%，大黄素83.6%，大黄酸81.5%。见表2。

表2 3种单体成分纯度

4 讨论

大黄为多年生蓼科植物，药材部分多为马蹄大黄的根及根茎。大黄味苦微涩，性寒，具有泻火、解毒、破积滞、行瘀血等功效。临床上多用于治疗便秘、谵语发狂、胃热呕吐、咯血、淤血经闭、产后瘀血、小便不利等疾病[5]。近年来药理研究表明，大黄具有抗菌、降压、止血、提升血管韧性等功效；经小鼠试验发现大黄可抑制黑色素瘤、乳腺瘤等。药性研究发现大黄中主要成分为蒽醌类衍生物，其含量达3%～5%，存在形式为葡萄糖结合甙。目前酸水解利用有机溶剂提取方法较为常见，但大黄中蒽醌类成分提取效率较低，且不稳定，提取时间长。

综上所述，醇提取法提取大黄蒽醌类有效成分方法具有费用低、操作简单、提出率较高等优点。与单纯pH缓冲溶液萃取方法相比，醇提取法高压制备系统分离效果大大提高，有效成分纯度较高，为大黄中蒽醌类成分提取提供了参考依据。

[1] 彭秧锡,陈启元,钟世安,等. 玉竹中总黄酮的提取工艺研究[J]. 武汉理工大学学报， 2005，27(12)：103-104.

[2] 宋应华,陶冶,张建新,等.脱脂葡萄籽中原花青素提取工艺研究[J]. 重庆工商大学学报：自然科学版，2010，27(02) :57-58.

[3] 黄琼,陈丽芬,李鑫宇,等.超声波提取牡荆挥发油化学成分的GC-MS分析[J].广西工学院学报,2007，18(04) :69-70.

[4] 聂媛,李梦青,张洁,等.虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素等有效成分的提取[J].河北工业大学学报，2008，37(02):60-65.

[5] 许海丹,顾霞敏.乌药叶中总黄酮提取工艺的研究[J].科学技术与工程，2010，10(26) :6515-6518.

(责任编辑：李岚春)

2014-05-08

张立(1982-)，男，湖北省武汉市中医医院药师，研究方向为药物临床。

R284.2

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1673-2197(2014)16-0023-02