乳癖舒片的质量标准研究

胡军林顾承刚吴 宁

（1 湖北省食品药品监督检验研究院，湖北 武汉 430064；2 武汉药谷科技开发有限公司，湖北 武汉 430070）

乳癖舒片的质量标准研究

胡军林1顾承刚2吴 宁2

（1 湖北省食品药品监督检验研究院，湖北 武汉 430064；2 武汉药谷科技开发有限公司，湖北 武汉 430070）

目的建立乳癖舒片的质量控制方法。方法用薄层色谱法对乳癖舒片中的丹参、延胡索、土贝母、赤芍进行定性鉴别；采用HPLC法，以芍药苷为对照品，测定乳癖舒片中赤芍的含量。色谱柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流动相：乙腈-水（12∶88）；检测波长：230 nm。结果在薄层色谱中均能检出丹参、延胡索、土贝母、赤芍；含量测定中芍药苷线性范围0.178～1.78 μg（r=0.9999），回收率为100.68%，RSD=0.73%（n=6）。结论本方法操作简便，灵敏度高，专属性和重线性好，可有效地控制乳癖舒片的质量。

乳癖舒片；芍药苷；反相高效液相色谱法；丹参；延胡索；土贝母；赤芍

乳癖舒片由瓜蒌皮、蒲公英、丹参、赤芍、土贝母、柴胡、延胡索等七味中药组成，由乳癖舒胶囊改变制剂成型工艺而成，具有舒肝解郁，活血解毒，软坚散结之功效，用于肝气郁结，毒瘀互阻所致的乳腺增生，乳腺炎。原胶囊剂收载于中华人民共和国国家药品监督管理局标准地标升国标外科分册，标准号：WS-10152-（ZD-0152）-2002[1]。在将原剂型改变剂型的研究过程中，对新制剂的质量标准进行了研究，以控制本品的质量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司），型号P3000，检测器3000UV；CQ250超声波仪（上海超声波仪器厂），硅胶G（青岛海洋化工厂），羧甲基纤维素钠（国药集团化学试剂有限公司）。乳癖舒片由武汉药谷科技开发有限公司提供（批号20090701、20090702、20090703、20090801、20090802、20090803）；芍药苷对照品（批号110736-200421供含量测定用）、丹参酮ⅡA对照品（批号110766-200402供含量测定用）、延胡索乙素对照品（批号110726-200307供含量测定用）、土贝母苷甲对照品（批号1536-200001供含量测定用）均由中国食品药品检定研究院提供，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参的薄层色谱鉴别[1]

取本品20片，除去包衣，研细，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用乙醚振荡萃取3次，每次20 mL，预留水层，乙醚液合并，水浴挥干，残渣用无水乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取不含丹参的自制样品20片，同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。取丹参酮ⅡA对照品，用无水乙醇配制成0.5 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（9.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干。自然光下观察，结果供试品溶液在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无斑点显现，说明阴性样品无干扰。见图1。

2.2 延胡索的薄层色谱鉴别[1]

取2.1项下预留水层，滤过，滤液用氨试液调节pH值至9～10，用乙醚萃取3次，每次20 mL，预留氨试液层备用，合并乙醚液，水浴上挥干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取不含延胡索的自制样品20片，同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。取延胡索乙素对照品，用甲醇配制成0.5 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述3种溶液各5 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－丙酮（9∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，以稀碘化铋钾试液显色。结果供试品溶液在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无斑点显现，说明阴性样品无干扰。见图2。

2.3 土贝母的薄层色谱鉴别[1]

取2.2项下的氨试液层，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水震荡分离3次，每次20 mL，水层弃去，取正丁醇液于水浴上蒸干，残渣用甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取不含土贝母的自制样品20片，同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。取土贝母苷甲对照品，用甲醇配制成2 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 µL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水（12∶3∶8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，以醋酐-硫酸-乙醇（1∶1∶10）混合溶液显色，在110 ℃烘烤至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱与对照品溶液色谱在相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品对结果无干扰。见图3。

2.4 赤芍的薄层色谱鉴别[1]

取不含赤芍的自制样品20片，照2.3项下的供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。另取芍药苷对照品，用甲醇配制成1 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取2.3项下的供试品溶液和上述对照品及阴性样品溶液各5 µL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒5%的香草醛硫酸溶液，加热烘烤至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱与对照品溶液色谱在相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品对结果无干扰。见图4。

2.5 芍药苷的含量测定

2.5.1 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流动相：乙腈-水（12∶88）；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；检测灵敏度：1.0000AUFS；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。色谱图见图5。

2.5.2 对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液制备

精密称取芍药苷对照品适量，以甲醇制成80 μg/mL的对照品溶液。取本品20片，精密称定，除去包衣，研细，取约0.3 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加稀乙醇20 mL，超声处理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。另取不含赤芍的自制样品20片，同法制备阴性对照溶液。

2.5.3 方法学考察

图1 丹参TLC

图2 延胡索TLC

图3 土贝母TLC

图4 赤芍TLC

图5 样品、 对照品、阴性样品色谱图

表1 准确度试验结果

线性相关性考察：取芍药苷对照品，精密称取17.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，分别精密吸取1、3、5、7、9、10 µL，注入色谱仪，测定。得回归方程为y=420439.7x+3117.5（纵坐标为峰面积，横坐标为芍药苷的量），相关系数为0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1781～1.781 μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取芍药苷对照品溶液10 μL，按系统适用性要求，重复测定6次，峰面积测定结果RSD=0.49%，仪器精密度符合实验要求。

稳定性试验：分别在0、2、4、6、8、10 h对同—份供试品溶液10 μL进样测定，测得峰面积结果的RSD为0.83%（n=6），结果显示供试品溶液在10 h的测定时间内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为20090701）6份，按系统适用性要求操作，同时测定样品含量，测得芍药苷平均值为6.24 mg/g，RSD（%）=1.14%，显示方法的重现性符合测定要求。

准确度试验：取已测得含量的样品（批号为20090701，含量为6.24 mg/g）6份，分别精密加入浓度为0.952 mg/mL的芍药苷对照品溶液1 mL，照供试品溶液制备方法配制成加样供试品溶液，测定每份芍药苷含量，计算，测得回收率为100.7%，表明方法的准确度良好。结果见表1。

2.5.4 样品含量的测定

取6批样品，除去薄膜衣，研细，取约0.3 g，精密称定，按前述方法制成供试品溶液和对照品溶液，精密吸取两种溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算芍药苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨 论

①本文建立了乳癖舒片通用的质量控制方法，通过对丹参、延胡索、赤芍、土贝母薄层色谱和赤芍含量测定进行质量控制，可在一定程度上控制乳癖舒片的质量。②目前，中药材染色现象时有发生，本文在控制中药材染色方面有待进一步研究。③本文在丹参的薄层鉴别中，用甲醇为提取溶剂较乙醚提取效率高，提取后的水层可为其余鉴别项利用，减少取样量，缩短产品检验时间。

[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[M]. 2010版.北京:中国医药科技出版社,2005:13-109.

R927.2

B

1671-8194（2014）17-0082-02