新疆石河子地区某规模化猪场断奶仔猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及临床防治

齐向涛 许 追 齐亚银

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)

新疆石河子地区某规模化猪场断奶仔猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及临床防治

齐向涛 许 追 齐亚银*

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)

本试验从新疆石河子地区某规模化猪场采集疑似由副猪嗜血杆菌引起的病变组织，进行实验室分离鉴定，确诊为副猪嗜血杆菌致病。对患病的3头猪进行治疗发现，恩诺沙星、氟苯尼考、林克霉素对该病都有很好的效果，对于感染严重的猪只建议使用头孢喹肟、头孢噻呋，同时建议对全群用恩诺沙星和替米考星配合拌料或用氟苯尼考和替米考星配合拌料进行药物预防。规模化猪场为防止该病的发生，还应选择正规厂家的药物进行治疗，注意猪场的严格消毒，做好猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型的免疫，防止继发感染。

副猪嗜血杆菌；断奶仔猪；细菌培养；临床治疗

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（HPS）引起的以多发性浆膜炎和关节炎为特征的细菌性传染病[1]，主要引起肺的浆膜、心包、腹腔浆膜和四肢关节浆膜的纤维素性炎症，该病可能引发高发病率和高死亡率的全身性疾病，影响猪生长的各个阶段，通常早期断奶的仔猪在母源抗体不存在的情况下，副猪嗜血杆菌的晚期感染可能会导致严重的后果[2]。

有人认为副猪嗜血杆菌是机会致病菌，只在与其他病毒或其他细菌协同时才会致病。该病一般多继发于其他呼吸道病毒和细菌感染，并且引起在猪群中常见的呼吸道疾病综合征，近年来，从患肺炎的猪群中分离出副猪嗜血杆菌的比率越来越高，这与支原体肺炎、病毒性肺炎等疾病的日趋流行有关。

若要确诊该病，可在临床症状和尸体剖检的基础上，再结合实验室检测，作出初步判定，咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱是主要临床症状[3]。副猪嗜血杆菌病是密集饲养，特别是猪繁殖与呼吸综合征广泛流行后才日益严重的一种疾病，在鉴别诊断上应注意与猪多发性浆膜炎与关节炎、猪丹毒、猪链球菌病相区别，同时也应注意与其他败血性细菌病相区别。

1 材料与方法

1.1 病料

2013年9月6日，新疆石河子地区某规模化猪场送检疑似因呼吸道疾病而引起死亡的仔猪。病死猪关节肿大，关节剖开后流出蛋清样液体（图1、2），可见典型的绒毛心（图3），无菌-采集其肺脏以及胸腔积液，于20℃保存备用。

1.2 菌株及血液

绵羊血采自石河子大学动物医院。将健康绵羊血放入装有玻璃珠高压灭菌的三角瓶，摇至纤维蛋白与血清完全分离为止，放冰箱冷藏保存备用。金黄色葡萄球菌由石河子大学动物科技学院传染病实验室保存并提供。

1.3 主要仪器

HDX-9162MBE电热恒温培养箱、ZHWY-2102C恒温培养振荡器、单人双面超净工作台、CX21FS1生物显微镜、高速冷冻离心机、电子天平、隔水式恒温培养箱、立式电热压力蒸汽灭菌锅等。

1.4 试验动物

25日龄左右的小白鼠12只（均购于石河子大学动物养殖中心）。

图1 关节肿大

图2 关节剖开后流出蛋清样液体

图3 绒毛心

2 主要培养基的配制

2.1 血琼脂培养基

按说明书配制普通营养琼脂培养基，121℃高压灭菌15～20分钟后，室温冷却到50℃左右，加入新鲜的脱纤绵羊血，轻微摇匀，待均匀后倒入高压灭菌后的平板中。

2.2 巧克力琼脂培养基

称取营养琼脂等试剂，调节pH值，121℃高压灭菌15～20分钟后，室温冷却到80℃左右，加入无菌新鲜比例为5%～10%的脱纤绵羊血，轻微摇匀，等培养基变为巧克力色时取出，待温度降至45℃左右时倾注平板即成。

2.3 TSA和TSB培养基

TSA和TSB培养基均按照相应说明书进行配制，121℃高压灭菌20分钟后，室温保存备用。培养胸膜肺炎放线杆菌（APP）用的TSA在倾注平板前加入20 μg/mL的NAD（1-萘乙酰胺）和5%小牛血清，TSB待冷却后加入20 μg/mL的NAD和5%犊牛血清。

3 试验方法

3.1 HPS的分离培养

无菌条件下从疑似病猪的肺脏、胸腔积液等病料组织中取样，分别无菌接种到TSA培养基（含20 μg/mL的NAD、5%小牛血清）、巧克力琼脂平板、鲜血琼脂平板中，放入37℃恒温箱内培养24～36小时，挑起单个菌落进行纯培养和镜检。

3.2 细菌CAMP试验

在无菌的条件下，用接种环挑取形态和培养特性疑似HPS的菌株，接种到无NAD的鲜血琼脂培养基上，同时用接种环将金黄色葡萄球菌在培养基上垂直划两条平行线，放入37℃恒温培养箱内培养24小时，再用接种环挑取纯化的可疑菌落在金黄色葡萄球菌的线上交叉划线，放入37℃恒温箱培养24小时，观察结果。

3.3 生化试验

将上述卫星试验中未出现溶血的菌株进行生化鉴定，进行生化鉴定前先在生化鉴定管中加入5%血清和20 μg/mL的NAD，然后将菌株分别加入蔗糖、鸟氨酸、麦芽糖、硝酸盐、靛基质、甘露醇、吲哚、鼠李糖、阿拉伯糖、棉子糖、木糖、接触酶、乳糖、葡萄糖、VP、脲酶、核糖、果糖等一系列生化培养基中，置37℃摇床内进行培养，24小时后可以陆续观察结果。

3.4 动物致病试验

选取小白鼠进行感染试验，将预先准备好的12只小公鼠随机分为两组，一组为试验组另一组设置为对照组。试验组每只小鼠腹腔注射菌液0.3 mL，对照组腹腔注射相同体积的生理盐水LB肉汤，隔离饲养并观察小鼠的症状，对发病或死亡的小鼠进行剖检，无菌采集其心血进行细菌培养鉴定。

4 结果

4.1 细菌分离鉴定及生化特性

4.1.1 细菌的培养特性及形态

从新疆石河子地区某规模化猪场送检的疑似因呼吸道疾病引起病变的病料中分离细菌，经过涂片染色，镜检可知均为革兰氏阴性小短杆菌，与猪多杀性巴氏杆菌相似。该菌为两极浓染的小球杆菌，菌体形态多样，大部分为纤细杆状菌，有的为长而弯曲的丝状菌体，该细菌在TSA（含5%小牛血清和20μg/mL的NAD）和含有NAD的鲜血平板培养基中生长旺盛，但是在麦康凯琼脂平板和普通琼脂平板上未见生长，在TSA（含5%小牛血清和20 μg/mL的NAD）的平板上生长，为露珠状、半透明、边缘整齐的光滑小菌落，但是该菌在鲜血平板和巧克力平板上生长不好。

4.1.2 细菌的生化特性

4.1.2.1 细菌CAMP试验结果

从试验结果可知，细菌CAMP试验呈阳性，选取的菌株在鲜血平板上出现明显的卫星现象，该菌越靠近金黄色葡萄球菌菌落的地方生长越好；相反，越远离金黄色葡萄球菌菌落的地方，其菌落明显变少变小，再远离则没有菌落生长，试验中未发现溶血现象。

4.1.2.2 生化试验结果

从生化试验结果可知（表1），分离菌株能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、果糖、蔗糖等碳水化合物，不能发酵甘露醇、鼠李糖、山梨醇，硝酸盐，脲酶试验、吲哚试验等显阴性。

4.2 动物接种试验结果

试验组小鼠腹腔注射稀释好的菌液，4小时之后，陆续有小鼠开始震颤，小鼠相互拥挤，24小时后两只小鼠死亡，另外两只小鼠基本恢复正常。对死亡的小鼠进行解剖，采集其心血进行培养，经过镜检可以看出分离菌的形态特征和接种前的特征基本一致，对照组没有明显变化。

5 治疗方案

试验选择某厂家主要成分为恩诺沙星、氟苯尼考和林可霉素的3种临床上常用的抗生素，对临床出现典型症状的3头病猪进行治疗。经过3天的治疗，病猪的症状明显减轻，7天后病猪痊愈。对于严重患病的猪可考虑用头孢喹肟、头孢噻呋进行治疗，会取得更好的效果。

如果遇上副猪嗜血杆菌病的严重暴发，建议对全群用恩诺沙星和替米考星配合拌料，或者用氟苯尼考和替米考星配合拌料，进行药物预防，而不只是对表现出临床症状的猪用药。用药时选择正规厂家生产的药物，按照说明书合理用药，以减少致病菌耐药现象的出现。

表1 生化试验结果

6 分析与讨论

6.1 HPS的生物学特性

根据发病猪群的流行病学特征、临床征状、实验室检验结果，综合鉴定此分离菌为副猪嗜血杆菌。经过与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌发病猪的临床征状、剖检病变和流行病学特征进行对比，可知副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌有相似的致病特征，故临床上经常发生对该病的误诊，造成治疗失败。

由于副猪嗜血杆菌饲养较难，对营养要求高，很难分离到，所以建议从全身各重点组织或体液中采取新鲜样品作为试验组织病料。本试验从釆集病料到送检不超过12小时，这样可以提高该菌的分离效率。

该菌在鲜血平板和巧克力平板上生长不好，在TSA（含5%小牛血清和20 μg/mL的NAD）培养基和含有NAD的鲜血平板培养基中生长旺盛，在麦康凯琼脂平板和普通琼脂平板上未见生长，这为该菌培养条件的选择提供了参考。

6.2 HPS的临床治疗方法

HPS一年四季均可引发，常伴随着猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型的发病而产生继发感染，根据临床实践发现，患有副猪嗜血杆菌病的猪一般都伴有猪繁殖与呼吸综合征病毒感染。本试验送检猪场的病变猪只是否存在原发性病毒感染，仍需做进一步检测。

6.3 HPS的防治措施

预防副猪嗜血杆菌病要尽量减少各种应激，控制温度及饲养密度，注意产房及保育舍的温度不能过低。仔猪在断尾、断牙、去势时，如果消毒不彻底也可以造成该病的发生。猪场还应同时做好猪繁殖与呼吸综合征和圆环病毒病的免疫。

[1] 王平利,梁宏德,陈福伟.猪副猪嗜血杆菌感染的病理学观察[J].河南农业科学, 2005(12):82-85.

[2] 林雪玲,黄耿森,冼琼珍.副猪嗜血杆菌分离鉴定与PCR检测方法的建立及应用[J].吉林农业大学学报,2006(3):321-324.

[3] 蔡旭旺,刘正飞,陈焕春,等.副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定[J].华中农业大学学报,2005,24(1):55-58.

S858.28

B

1673-4645(2014)02-0047-03

2013-11-23

齐向涛（1987-），男，汉族，陕西西安县人，硕士研究生，从事兽医技术服务

*通信作者：齐亚银（1980-），博士研究生，副教授，主要从事动物传染病的诊断与防治工作