全自动血细胞分析仪稀释模式用于脑脊液细胞计数及分类检测的可能性

侯辰蕊，刘敏丽，李 红

(山西大医院，山西 太原 030032)

脑脊液常规检测目前多采用手工操作，不同操作者的熟练程度、主观判断不一致，特别是脑脊液细胞计数和分类长期以来一直存在结果重复性差、耗时长等问题。因此，目前临床上采用自动化程度高、检验结果客观准确的全自动血细胞分析仪替代手工操作应用于脑脊液细胞计数和分类分析，全自动血细胞分析仪ABX PENTRA 60采用半导体激光流式结合核酸荧光染色以及鞘流电阻抗原理。本资料采用ABX PENTRA 60血细胞分析仪的稀释模式对脑脊液进行细胞计数分类，并与传统手工计数法进行比较，进一步探讨ABX PENTRA 60血细胞分析仪应用于脑脊液细胞计数、分类的可能性及效果。

1 材料和方法

1.1 材料

标本来源于2013年3月至8月山西大医院住院患者脑脊液标本100份。

1.2 仪器与试剂

采用日本ABX PENTRA 60自动血细胞分析仪及配套质控品、试剂，日本Olympus光学显微镜，上海无光公司改良牛鲍氏计数板。

1.3 方法

1.3.1 手工计数方法 按照第3版全国临床检验操作规程中脑脊液检验方法采用改良牛鲍氏计数盘进行操作。全部标本均由两名工作经验丰富的主管技师计数分类，结果取平均值。

1.3.2 全自动血细胞分析仪检测 按ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪标准操作规程的稀释模式对脑脊液标本进行测定。

1.3.3 相关性分析 比较ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪和手工计数法(显微镜法)的白细胞计数、红细胞计数、单个核细胞绝对计数、多个核细胞绝对计数的结果，并进行相关性分析。

1.3.4 标本稳定性观察 将10份脑脊液在室温中分别放置1、2、3、4 h，然后用 ABX PENTRA 60 全自动血细胞分析仪检测，观察白细胞、红细胞计数及白细胞分类指标有无变化:

1.3.5 重复性观察 使用XT-4000i自动血细胞分析仪，对细胞密度不同的5份脑脊液标本(高、中、低三个密度)分别进行5次连续测定，求出平均值和变异系数(CV%)。

1.4 统计学处理

采用SPSS12.0软件对数据进行配对t检验和直线相关性分析及线性回归分析。

2 结果

2.1 相关性

分别用手工计数法和ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪稀释模式两种方法对100份脑脊液标本进行白细胞计数、红细胞计数、单个核细胞绝对计数及多个核细胞绝对计数，结果经统计学处理差异无统计学意义(P＞0.05)，两者呈现良好的相关性(白细胞计数r=0.988，红细胞计数r=0.988，单个核细胞绝对计数r=0.953，多个核细胞绝对计数r=0.981)见图1。

图1 仪器与手工计数的相关性Fig 1 Relevance between Instrument and Manual Counting

2.2 稳定性

将10份不同细胞密度的脑脊液分别置于室温下放置1、2、3、4 h，用 ABX PENTRA 60 全自动血细胞分析仪测定，观察白细胞计数、红细胞计数及分类指标的变化，应用线性回归分析结果得出脑脊液中白细胞计数、红细胞计数及白细胞分类在4 h内偏倚值均无统计学意义(P＞0.05)，但单个核细胞(主要为淋巴细胞)百分比随着时间的延长而降低，多个核细胞(主要为中性粒细胞)百分比随着时间的延长而升高。因此对于脑脊液标本要及时检测，以免结果不准确。见表1～4。

表1 ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪白细胞计数 个/μLTable 1 WBC Counts of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer unit/μL

表2 ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪红细胞计数 个/μLTable 2 RBC Counts of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer unit/μL

表3 ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪单个核细胞百分比 %Table 3 Mononuclear Cell Percentage of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer %

表4 ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪多个核细胞百分比 %Table 4 Multinuclear Cell Percentage of ABX PENTRA 60 Automatic Blood Cell Analyzer %

2.3 重复性

将白细胞计数分别为456.2 个/μL、89.4 个/μL、6.9个/μL的3份脑脊液标本分别连续测定10次，ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪检测结果显示CV值分别为3.1%、4.3%、9.7%，虽然低细胞密度标本CV值上升，但明显低于手工操作的CV值(手工法一般＞20%)，表明自动血细胞分析仪检测重复性良好，精密度明显提高。

3 讨论

脑脊液的细胞学分析可以为临床提供有价值的诊断依据。当成人脑脊液中单个核细胞计数＞5个/μL或新生儿脑脊液中单个核细胞计数＞30个/μL时，可辅助诊断脑膜炎、脑炎、白血病浸润等中枢神经系统疾病［1］。脑脊液白细胞计数也可以用于监视白血病或淋巴瘤的治疗效果。正常脑脊液中无红细胞，当脑脊液中红细胞计数升高时提示脑出血或脊椎穿刺外伤［2］。目前临床实验室仍普遍应用手工计数板进行脑脊液常规检查，不同操作者之间由于熟练程度、规范程度不同，结果具有很大误差，且结果回报时间长，难以满足临床科室需求。脑脊液常规检测中的白细胞计数，红细胞计数及白细胞分类常用手工方法。脑脊液手工计数方法有检测周期长(通常需要30～45 min)、主观差异大等缺陷。与血液和尿液相比，脑脊液样本量少。手工计数所取标本充池量为1 μL，由于取样量少而不能保证计数的精确度。国内外已有许多文献探讨流式细胞术应用于脑脊液细胞计数［3］。另外，白细胞分类计数是脑脊液常规的一个关键组成部分，这对于中枢神经系统疾病特别是脑膜炎的临床鉴别诊断作用非常重要。病毒性脑膜炎脑脊液白细胞分类的特点是单个核细胞(淋巴细胞)占多数。而细菌性脑膜炎是以分叶核细胞(粒细胞)为主［4］。

本研究中，通过比较100例脑脊液常规标本，得出手工计数与仪器对比结果为相关性好。白细胞计数范围是0～290个/μL，相关系数为0.988。仪器 WBC 平均值为55个/μL，手工计数 WBC 平均值为56个/μL。RBC 计数范围是0～190个/μL，相关系数为0.988，仪器RBC平均值为135个/μL，手工计数RBC平均值为139个/μL。回归分析结果经过配对t检验得出，应用仪器进行白细胞计数、红细胞计数及白细胞分类与手工方法有大于95%的相关性。稀释测定模式，实际是吸取标本之后进行了自动稀释，相当于将脑脊液标本浓缩50倍，因此可以得到较理想的结果。用ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪进行脑脊液细胞计数与显微镜手工计数相比具有更好的准确性与精密度，线性范围广，需要标本量少，检测时间短(报告时间为2 min，而手工操作至少需要30 min)，避免了手工操作中间环节，减少误差，大大提高了检测的准确性。标本的稳定性是脑脊液常规检测的关键所在。比较仪器测定采集标本后室温下放置1、2、3、4 h的计数值，应用配对t检验，统计显示无显著差异。本资料对高、中、低三个密度脑脊液标本进行重复性实验，表明ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪检测重复性良好，精密度明显提高。用仪器测定的优势还包括用质控品来保证测定结果的准确性。

本研究结果表明ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪在脑脊液细胞计数方面，完全可以代替传统经典方法显微镜手工计数。但仪器法细胞分类检测仍为筛选检查，特别是出现异常细胞团时，必须进行显微镜涂片染色检查，仔细查找是否为肿瘤细胞，以确认标本中有无肿瘤细胞存在。值得注意的是临床标本最好进行EDTA抗凝，避免标本有凝块造成的结果不准确。ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪在实际工作中有广阔的应用前景。

［1］ Andrews J，Setran E，McDonnel L，et al.An Evaluation of the Celldyn 3200 for Counting Cells in Cerebrospinal and Oyher Body Fluids［J］.Lab Hematol，2005，11:98-106.

［2］ 谭晓玉，王霞莉，王纪敏.流式细胞技术用于脑脊液细胞分析方法学研究［J］.医学检验与临床，2008，19(4):18-19.

［3］ Hoffman JJML，Janssen WCM.Automated Counting of Cells in Cerebrospinal Fluid Using the CellDyn-4000 Hematology Analyser［J］.Clin Chem Lab Med，2002，40:1168-1173.

［4］ Van Acker JT，Delanghe R，Langlois MR，et al.Automated Flow Cytometric Analysis of Cerebrospinal Fluid［J］.Clin Chem，2001，47:556-560.

［5］ 叶应妩，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社，2012.