AmpFℓSTRIdentifilerPlus试剂盒快速直接PCR扩增初探

刘 琳，郝晓明，董 会，欧 元，赵兴春，叶 健

（1.中国人民公安大学，北京100038；2.重庆市公安局巴南区分局，重庆401320；3.法庭科学生物芯片工程实验室，北京 100038；4.公安部物证鉴定中心，北京 100038）

自20世纪90年代以来，以PCR-STR技术为代表的第二代法医DNA分型技术在司法实践中的应用日益广泛，整个DNA分型过程包括DNA提取、定量、PCR扩增和电泳检测与分析，其中DNA提取与PCR扩增是两个重要的限速步骤，常规方法难以满足DNA数据库规模不断扩大和紧急案件检验的需求。本文选用AmpFℓSTRIdentifilerPlus试剂盒与TaKaRa公司的快速PCR试剂盒联合建立快速直接PCR（Rapid Direct PCR[1]）反应体系，采用免提取的方式，以FTA血卡为模板，采用经优化的热循环参数在快速PCR仪上完成扩增，对如何缩短DNA分型检测的时间进行了初步探讨。

1 材料与方法

1.1 样本

FTA血卡样本（公安部物证鉴定中心提供）

1.2 主要仪器及试剂

1.3 PCR扩增方法

1.3.1 快速直接PCR扩增

实验分为四组，第一组：10 μL反应体系，直径0.5 mm FTA血卡为模板；第二组：10 μL反应体系，直径1.0mm FTA血卡为模板；第三组：20 μL反应体系，直径0.5 mm FTA血卡为模板；第四组：20 μL反应体系，直径1.0mm FTA血卡为模板。

四组所用热循环参数：95℃ 3 min；95℃ 10 s，59℃ 15 s，72℃ 20 s，29 个循环；72℃ 3 min；25℃保存。扩增总用时55min。

1.3.2 常规直接PCR扩增

1.4 电泳及数据分析

取上述各PCR扩增产物1μL分别与10μL上样混合物（20μL GeneScan LIZ500内标 +1000μL去离子甲酰胺）混合，用3130XL遗传分析仪，按标准流程进行电泳分离，采用GeneMapper ID V 3.2软件进行基因分型。

图1 10μL反应体系，直径0.5mm FTA血卡为模板

2 结果与讨论

如何缩短DNA分型检测时间一直是法医界学者们研究的焦点之一，例如，Verheij[2]等在 2012年将Thermo快速PCR试剂盒与AmpFℓSTRSGM PlusTM、AmpFℓSTRIdentifiler、AmpFℓSTRSEfilerPlusTM、AmpFℓSTRNGMTM分别组合，探索快速直接PCR扩增在法庭科学领域的应用。

图2 10μL反应体系，直径1.0mm FTA血卡为模板

图3 20μL反应体系，直径0.5mm FTA血卡为模板

3 结论

参考文献：

[1]Aboud M，Oh HH，McCord B.Rapid Direct PCR for Forensic genotyping in under 25 minutes[J].Electrophoresis，2013，34（11）：1539-1547.

[2]Verheij S， Harteveld J， Sijen T.A protocol for direct and rapid multiplex PCR amplification on forensically relevant samples[J].Forensic Science International： Genetics， 2012，6（2）：167-75.