颈复康颗粒中芍药苷的含量测定方法研究

张 灿段树卿李云霞*

（1 承德医学院，河北 承德 067000；2 颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000）

颈复康颗粒中芍药苷的含量测定方法研究

张 灿1,2段树卿2李云霞2*

（1 承德医学院，河北 承德 067000；2 颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000）

目的研究颈复康药业集团有限公司独家生产几十年的中药大复方制剂-颈复康颗粒中芍药苷的含量测定方法。方法用HPLC法测定颈复康颗粒中芍药的含量，采用C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱，流动相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；检测波长：230 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃。结果 所建立的芍药苷含量方法，线性范围为0～0.4896mg/mL，r=0.9999，平均加样回收率为99.7%，RSD=1.27%（n＝9）。最低检测限为4.938 ng。结论 所建立的方法简便准确，重现性好，按现行工艺制备的阴性样品无干扰，专属性强；通过方法的优化，通过不同年份、不同批号的多批数据检测，认为可作为颈复康颗粒中芍药苷的含量测定方法。

颈复康颗粒；芍药苷；HPLC；含量测定

颈复康颗粒是颈复康药业集团的独家品种，由羌活、川芎、葛根、秦艽、威灵仙等21味中药组成。具有活血通络、散风止痛的功效，对颈椎病引起的脑供血不足，头晕，颈项僵硬，肩背酸痛，手臂麻木等症具有明显疗效，是治疗颈椎病的首选药物[1]。上市二十多年以来，以其确切的疗效和明显的治疗特点赢得广大消费者的认可，收载于《中国药典》2010版[2]。现行质量标准中有葛根的含量测定及其他几项薄层鉴别，白芍作为其中的重要药材，与药品质量有密切关系。目前市场上白芍的质量差异较大，药材的质量必须严格控制，因此控制制剂中芍药苷的含量很有必要。本研究采用HPLC对颈复康颗粒中芍药苷含量进行测定。

1 仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪，Agilent HC-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)色谱柱，梅特勒万分之一分析天平，KQ-500DE型数控超 声波清洗仪。

芍药苷对照品（批号110736-201136）由中国药品生物制品鉴定所购得，乙腈为色谱纯、磷酸为优级纯，其余为分析纯，颈复康颗粒（批号290843、290844、290845、290846、290847、290855、290909、190628、190706）由颈复康药业集团有限公司提供。阴性样品制备所用药材经颈复康药业集团有限公司工程师、中药鉴定师商春丽鉴定为正品，均由颈复康药业集团有限公司提供，阴性样品由颈复康药业集团有限公司制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent HC-C18（5μm，4.6 mm×250 mm）柱；流动相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；检测波长：230 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃，进样量：10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇使溶解，并稀释定容，制成0.05 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品及阴性对照溶液的制备

取颈复康颗粒，研匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，超声30 min，放冷，用70%的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水5 mL溶解，置聚酰胺柱（80-120目，5 g）上，用水100 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加70%乙醇适量使溶解，并定容至10 mL，摇匀即得供试品溶液。按处方中的药味比例配制不含白芍的阴性样品，依供试品制备方法制备阴性对照液。

2.4 阴性试验

按上述仪器和试验条件，将芍药苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液分别进样测定（图1）。从色谱图可见，其他成分对芍药苷的测定无干扰。

图1 颈复康颗粒HPLC图

2.5 线性关系考察

精密量取对照品溶液（0.489 6 mg/mL）0.3、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL分别置10 mL量瓶中，用70%乙醇定容，分别取上述溶液10 μL进样，按上述色谱条件进行HPLC分析。以芍药苷的峰面积Y对芍药苷的浓度X绘制标准曲线，得回归方程Y=12779X-3.7579，r=0.9999（n=6）。结果表明，芍药苷进样量在0～0.4896 mg/mL，范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

表1 加样回收率试验结果

2.6 精密度试验

分别精密吸取芍药苷标准品溶液、颈复康颗粒供试品溶液（批号290843）各10 μL，连续进样6次，记录每次的峰面积。结果：芍药苷的峰面积的RSD值分别为0.43%、0.36%。表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取对照品溶液10 μL，每隔1 h进样1次，连续进样8次，记录每次的峰面积。结果：芍药苷峰面积RSD=0.33%（n=8），表明芍药苷对照品在8 h内稳定。

精密吸取供试品溶液（批号290843）10 μL，每隔1 h进样1次，连续进样8次，记录每次的峰面积。结果：芍药苷峰面积RSD=0.25%（n=8），表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.8 重现性试验

精密称取同一批颈复康颗粒（批号290843）粉末9份，第1～3份每份0.25 g，第4～6份每份0.5 g，第7～9份每份0.75 g，按供试品的制备方法制成供试液，并按色谱条件进行HPLC分析，测定芍药苷峰面积，计算含量。结果，芍药苷的平均含量为3.197 mg/g，RSD=1.08%（n=9）。表明芍药苷该样品处理方法重现性好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的颈复康颗粒（批号290843）9份，精密加入芍药苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法分别制备9份样品，精密吸取10 μL，注入色谱仪。结果，平均回收率为99.70%，RSD=1.26%，见表1。

2.10 检测限的确定

将浓度分别为0.004938、0.002469、0.0009876、0.0004938、0.0002469 mg/mL的试样，按2.4.7的色谱条件，在Agilent1100液相色谱仪进行检测，进样量为10μL，测出试样浓度为0.0004938 mg/mL溶液的信噪比值为3，确定检测限为4.938ng。

2.11 定量限的确定

将浓度分别为0.05940、0.005940、0.002376、0.001188 mg/mL的试样，按2.4.7的色谱条件，在Agilent1100液相色谱仪进行检测，进样量为10 μL，测出试样浓度为0.001188 mg/mL溶液的信噪比值为10，确定定量限为11.88 ng，连续进样6次，RSD为1.8%。

2.12 样品含量测定

取不同批号的颈复康颗粒，按上述方法测定，结果见表2。

表2 不同批号颈复康颗粒中芍药苷的含量

3 讨 论

3.1 芍药苷的含量测定方法报道比较多，主要是采用高效液相色谱法[3-7]。颈复康颗粒处方药味太多，是中国药典收载的124个颗粒剂中药味及处方量之最，成分复杂。公司技术人员一直在不断研究与提高其质量标准，从增加定性鉴别到定量检测，曾采用薄层扫描法对颈复康冲剂中芍药苷的含量进行测定[8]，但由于薄层色谱扫描法操作繁琐，准确度及精密度相对较差，未得到应用。其他含量测定方法[9-11]也存在许多不足，方法重现性差，本研究曾采用不同型号色谱柱考察文献方法，结果都未很好的重现出方法结果，分离度等不符要求。本实验通过摸索，采用合适的分离条件，成功的对芍药苷进行了分离和纯化，建立了高效液相色谱液法对颈复康颗粒中芍药苷的含量测定方法。

3.2 本实验通过对提取溶剂、不同型号色谱柱及流动相等的条件考察，确立了最佳方法，并得到了满意的分离效果。加样回收率实验及精密度等实验结果，也表明方法可行，准确度高。用超声法提取出的成分比较多，直接用液相检测，采用等度洗脱不易将芍药苷峰与其他峰有效分离。但如果采用梯度洗脱，数据采集时间变长，考虑到实际生产检验因素，希望能通过改变供试品制备方法来简化检测过程。经过考察，发现过聚酰胺柱能有效地将干扰物质除去。对聚酰胺用量、洗脱剂用量等进行考察，确立了样品制备方法。

3.3 颈复康颗粒属大品种，该品种疗效好，市场广阔，深受患者的好评。对其质量标准进行研究与完善提高，既能提高自身的质量控制水平，也能对其他大品种制剂的质量标准研究提供借鉴。

[1] 柏泓宇.颈复康颗粒可有效治疗各类型颈椎病[J].按摩与康复医学,2011,2(9):62.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[S].北京:化学工业出版社,2010:1138-1139.

[3] 雷波,刘圣梅.HPLC法对通淋胶囊中芍药苷的含量测定[J].齐鲁药事,2005,24(7):407.

[4] 宋永熙,郭美华.安神宁口服液中芍药苷的含量测定[J].中国中医药科技,2011,18(5):F0003.

[5] 孙学勤,洪莲.牡丹皮中芍药苷含量测定方法的研究[J].宿州学院学报,2007,22(3):109-110.

[6] 彭丽丽,刘祥东.逍遥颗粒中芍药苷的含量测定[J].中国现代杂质,2008,10(12):34-36.

[7] 林海,胡黎.不同产地赤芍中芍药苷的含量测定[J].中国医药指南,2009,7(16):91-92.

[8] 李云霞.薄层扫描法测定颈复康冲剂中芍药苷含量[J].中国中药杂志,1994,19(11):674.

[9] 唐道生.薄层扫描法测定颈复康冲剂中芍药苷的含量[J].基层中药杂志,2001,15(2):27.

[10] 杨威,温成立,郭振东,等.HPLC法测定颈复康中芍药甙[J].中成药,1994,16(5):12.

[11] 张科卫,李伟,池玉梅,等.HPLC同时测定颈复康颗粒中葛根素、芍药苷的含量[J].中成药,2004,26(5):359-361.

Study on the Method for the Determination of Paeoniflorin in Jingfukang Granule

ZHANG Can1, DUAN Shu-qing2, LI Yun-xia2
(1 Chengde Medecinal University, Chengde 067000, China; 2 Jingfukang Pharmaceutical Group Co.,Ltd., Chengde 067000, China)

ObjectiveTo study the method for the determination of Paeoniflorin in Jingfukang granule-the Exclusive varieties of Jingfukang Pharmaceutical Group Co.,Ltd.MethodsHPLC was used to determine Paeoniflorin. C18column (5 μm, 4.6 mm×250 mm) was used under the mobile phase of acetonitrile-0.1% phosphoric acid (14∶86).The flow rate was 1.0 mL/min,and the detected wavelength was 230 nm.The column temperature was maintained at 25 ℃.ResultsThe linearity of Paeoniflorin was good in the range of 0～0.4896mg/mL,r=0.9999,The average recovery was 99.7% with RSD=1.27%(n=9).The detection limits of Paeoniflorin was 4.938ng.ConclusionThe results show that the method were simple and reproducible. No interference were found in the negative control. It is accurate and reproducible for the determination of Paeoniflorin in Jingfukang granule, with the detection results of different years and batch numbers.

Jingfukang granule; Paeoniflorin; HPLC; Content determination

R284

B

1671-8194（2014）13-0079-02

*通讯作者：E-mail:cdjfk-lyx@163.com