高危型HPV检测技术在提高宫颈癌前病变检出率中的临床价值

曹军 邱建学 陈玉 李春飞

高危型HPV检测技术在提高宫颈癌前病变检出率中的临床价值

曹军 邱建学 陈玉 李春飞

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，位于女性恶性肿瘤病死率的第2位。宫颈癌存在着一个较长时间的、可逆转的癌前病变期；从宫颈不典型增生发展为原位癌的时间约为10年[1]，若能早发现并及时治疗早期宫颈癌，其治愈率达90%以上[2]。细胞学涂片可筛查癌前病变及原位癌，但存在着较高的假阴性和假阳性率。由于长期持续感染高危人乳头状瘤病毒（HR-HPV）是宫颈癌发生的必要条件[3]，宫颈癌筛查时通过联合检测HR-HPV可大幅度提高阳性及阴性符合率，因此,我们在筛查宫颈癌时行液基细胞学和HR-HPV联合检测，现将结果报道如下，并对其临床应用价值作一探讨。

1 资料和方法

1.1 一般资料 2011-07—2013-06我院临床妇科及体检中心送检的宫颈液基细胞学筛查病例（19～70周岁，有性生活史女性），从结果为阳性［包括临界状态（非典型鳞状上皮细胞，ASC-US）］的997例对象中，有阴道镜下多点病理活检对照的共347例，同时检测HRHPV及阴道镜下多点病理活检对照的共320例。

1.2 方法

1.2.1 液基细胞学检测 标本采集及处理用无菌专用细胞刷插入宫颈管内收集宫颈外口和宫颈管的脱落细胞标本，放入专用的细胞标本保存液中，采用安必平液基薄层制片仪完成制片，巴氏染色，TBS分级系统，结果分为正常细胞（NILM）、ASC-US、低度鳞状上皮内病变（LISL）、高度鳞状上皮内病变（HISL）。

1.2.2 HR-HPV检测 采用第二代杂交捕获技术（HC2），标本用专用小刷于宫颈口与颈管交界处收集分泌物保存于专用试管中。采用美国Digene公司提供的试剂盒，检测对象为可导致浸润性宫颈癌的高危HPV的 13种亚型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68），通过基因捕获技术，仪器分析确定RNA-DNA的含量。

1.2.3 活检对照 阴道镜下观察，醋酸白、碘试验阳性处进行多点取材。宫颈组织病理学诊断分为：炎症、湿疣样变、CIN I、CINⅡ、CINⅢ、浸润癌。

1.3 观察指标 （1）液基细胞学检查：阴性结果包括NILM，阳性结果包括ASC-US、LISL、HISL。（2）HR-HPV检测：计算机判读结果＜1pg/ml为阴性，≥1pg/ml为阳性。（3）活检：炎症为阴性，阳性结果包括低度病变（湿疣样变、CINI）、高度病变（CINⅡ、CINⅢ）及浸润癌。

1.4 统计学处理 采用Excel of Office 2013统计软件，计数资料比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 液基细胞学、HR-HPV检测结果与活检结果对照 见表1～2。

由表1～2可见，液基细胞学检测与活检对照，阳性符合率为56.48%（196/347），其中为LISL及以上的187例，与活检对照阳性符合率为67.91%（127/187）。液基细胞学和HR-HPV联合检测与活检对照可将阳性符合率提升至82.69%（172/208），其中为LISL及以上阳性的122例与活检对照阳性符合率可提升至91.80%（112/ 122），与单独检测相比，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

2.2 HR-HPV检测阴性预测值 320例HR-HPV行检测，有112例检测结果阴性，对照活检结果（炎症106例、湿疣样变3例、CINⅠ2例、CINⅡ1例），阴性预测值为94.64%（106/112）；高度病变阴性预测值为99.11%（111/112）。

表1 液基细胞学、HR-HPV检测结果与活检结果对照（例）

表2 液基细胞学、HR-HPV检测结果与活检结果对照（例）

3 讨论

一直以来，宫颈脱落细胞学涂片巴氏染色是筛查宫颈癌的主要手段。随着液基细胞学的发展与推广，其漏诊率和误诊率不断降低。但由于细胞学涂片是人为主观判断结果，可重复性差，受诊断医生经验和水平的制约；并且我国宫颈癌大批量筛查时往往集中在基层医疗单位，专职病理细胞学医生的缺乏和人工阅片的极限（100张/工作日），导致其结果不可避免的存在着假阴性和假阳性。研究表明，长期持续感染HR-HPV是宫颈癌发生必要的生物学条件[4]。因此，在宫颈癌筛查时只要能够准确地检测出是否感染了HR-HPV，可以减少液基细胞学涂片的漏诊和误诊。

本文HR-HPV检测采用第二代杂交捕获技术（HC2 HPV DNA Test），是获美国FDA、欧洲CE认证及中国药监局SFDA注册检测技术。采用仪器客观判读结果，有极高的灵敏度，可达99.9%阴性预测值，在国际上被列为金标准。统计结果表明，宫颈癌在筛查中结合HC2检测，可以将阳性符合率由单一液基细胞学检测的56.48%（67.91%）提高至82.69%（91.8%）；具有统计学意义（P＜0.01），可明显提高宫颈癌前病变的检出率。

在液基细胞学筛查结果中，ASC-US是阳性结果中最多的诊断，本资料997例中ASC-US为632例，占63.39%。其也是临床妇科医生和病理细胞学诊断医生以及受检者遇到最多的困惑。由于多种主观因素和客观因素的存在，ASC-US诊断可重复性差，组织学阳性符合率低，较大一部分为炎性病变；临床处理流程一般为随访复查，但易失访，本文160例ASC-US活检阳性对照中高度及以上病变有30例，其中浸润性癌占3例，用单一液基细胞学筛查，易漏诊。HR-HPV阴性112例活检对照中高度病变阴性预测值达99.11%；文献报道，样本量足够大时，HR-HPV阴性预测值，接近100%[5]。因此，HR-HPV检测可以用作AS-CUS人群的有效分流管理手段，浓缩高危人群，阴性结果回归常规筛查流程；阳性结果阴道镜下活检，降低癌前病变及早期宫颈癌漏诊率。

虽然液基细胞学检查方法对宫颈癌的筛查目前仍然很有效，而HC2作为新一代HPV检测方法在临床上可用来辅助细胞学检查，以期提高筛查结果的客观性；有研究显示，两项检查结果均为阴性的病例再次检查的间隔时间可延长至5年[6]，从而可进一步降低筛查成本。

[1]Yang L,Parkin D M,Li L D,et al.Estimation and projection of the rational profile of cancer mortality in China:1991-2005[J].Br J Cancer,2008,90(11):2157-2166.

[2] 张文璎,薛月珍,韩玲.高危型人乳头瘤状病毒负荷量与子宫颈病变严重程度的关系[J].上海交通大学学报:医学版,2007,27(11)1354-1357.

[3]钱德英,岑坚,王丁,等.高危型人乳头状瘤病毒DNA检测与细胞学联合检查对子宫颈癌前病变筛查的研究[J].中华妇产科杂志,2006,41(1): 34-37.

[4]Castle P E.The Potential utility of HPV genotyping in screening and clinical Management[J].J Natl ComprCane Netw,2008,6(1):83-95.

[5] 吕卫国,谢幸.宫颈癌的筛查[J].中国实用妇科与产科杂志,2006,22(1): 8-9.

[6]Roncaglia M T,Tacla M,Vieira da Motta E,et al.Evaluation of the combination of cytology and hybrid capture to safely predict the high-grade lesion status of patients treated with conization with large loop excision of the transformation zone[J].Acta Cyt01, 2011,55(5):421-425.

2013-12-09）

（本文编辑：沈昱平）

桐乡市科技计划项目（201203177）

314500 桐乡市第一人民医院病理科

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