瑶药地菍不同提取部位的降血糖活性研究

李 丽， 罗泽萍， 周焕第， 杨秀芬

（广西中医药大学药学院药理教研室， 广西 南宁 530001）

瑶药地菍不同提取部位的降血糖活性研究

李 丽， 罗泽萍， 周焕第， 杨秀芬*

（广西中医药大学药学院药理教研室， 广西 南宁 530001）

目的 观察瑶药地菍不同提取部位的降血糖活性。 方法 地菍用 95%乙醇提取， 再依次用石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇萃取制备不同提取部位，分别采用四氧嘧啶、链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型、肾上腺素及高浓度葡萄糖致小鼠高血糖模型，观察地菍的降血糖活性。结果 地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述模型小鼠的空腹血糖。结论 瑶药地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位为其主要降糖活性部位，尤以乙酸乙酯部位疗效较佳。

地菍；活性部位；降血糖

地菍是广西瑶族民间药材，为野牡丹科植物地菍Melastoma dodecandrum Lour.的 干 燥 全 草， 在 瑶 语 中 被 称为 “ 莫翁样” ， 主 要 治疗 “ 消 渴 ” 、 “ 虚 劳 ” 等 病证［1-2］。地菍中所含的主要成分有黄酮类、 多糖类、 酚类等［3］。 本课题组首次对地菍开展了一系列抗糖尿病药效学研究，发现地菍的水提取物可降低高血糖模型小鼠的血糖［4-5］， 具有降血脂作用［6］； 地菍的乙醇提取物可显著提高正常小鼠的葡萄糖耐量， 但对其空腹血糖无影响［7］。 为探寻地菍降血糖作用的主要药效物质基础，本实验采用系统溶剂法分离地菍的不同提取部位，观察各部位对多种高血糖动物模型的降血糖作用，筛选其降血糖有效部位，为进一步研究与开发提供实验依据。

1 材料

1.1 实验动物 健康昆明种小白鼠， 体质量 18 ～22 g， 雌雄各半，由广西中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK桂 2010-0001。

1.2 药物与试剂 地菍购自广西南宁市小瑶王药店， 经本校中药鉴定教研室田辉教授鉴定为野牡丹科植物地菍Melastoma dodecandrum Lour.的 干 燥 全 草。 取 地 菍 药 材 适量， 切碎， 加 95%乙醇浸泡过夜， 加热回流提取 3 次， 每次1 h， 过滤， 合并滤液， 减压浓缩得总浸膏。 总浸膏与硅胶 （1 ∶2） 拌样， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇加热回流萃取，分别浓缩成浸膏，得石油醚部位 （得膏率约0.53%）、 乙酸乙酯部位 （得膏率 1.51%） 和正丁醇部位（得膏率 3.64%）， 备用。 盐酸二甲双胍片， 北京四环制药有限公司生产， 批号 20100414。 四氧嘧啶 （ Alloxan）， 美国 Sigma公司产品， 批号 BCBB7829。 链脲佐菌素 （ Streptozotocin， STZ） ， 美国 Sigma公司产品， 批号 031M1287V。 盐酸肾上腺素注射液，天津药业集团新郑股份有限公司，批号 1009221； 口服葡萄糖， 广西梧州制药 （集团） 股份有限公司生产， 批号 111005。 葡萄糖氧化酶法测定试剂盒，四川省迈克科技有限责任公司生产， 批号 1203021。

1.3 主要仪器 TU-1901 双光束紫外可见光分光光 度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； 台式离心机 （16K，珠海黑马医学仪器有限公司）； 旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂）。

2 方法

2.1 对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响 小鼠禁食不禁水24 h 后， 尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶溶液（60 mg/kg）， 72 h 后对小鼠 （禁食不禁水 8 h） 眼眶后静脉丛采血，分离血清，按试剂盒说明测血糖值，以空腹血糖≥11.0 mmol/L的 小 鼠 作 为糖尿病模型小鼠， 纳 入 实验。 糖尿病小鼠随机分为 8 组， 每组 12 只， 另取 12 只正常小鼠作为正常对照组，按设计剂量 （地菍各提取部位以生药量计）灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予等容量生理盐水 （20mL/kg）， 每日灌胃 1 次， 连续10 d。末次给药后 1 h （禁食不禁水 8 h）， 小鼠眼眶后静脉丛取血，按试剂盒说明测定血糖值。

2.2 对链脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影响 小鼠腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素溶液 （150 mg/kg）， 72 h 后对小鼠 （禁食不禁水 8 h） 眼眶后静脉丛采血， 分离血清， 按试剂盒说明测血糖值， 以空腹血糖≥8.0 mmol/L的小鼠作为糖尿病模型小鼠，纳入实验。动物分组、给药及检测方法同 “2.1” 项。

2.3 对盐酸肾上腺素致小鼠高血糖的影响 合格小鼠随机分成 9 组， 每组 10 只。 按设计剂量 （地菍各提取部位以生药量计）灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予等容量生理盐水 （20mL/kg）， 每日灌胃 1 次， 连续10 d。 末次给药后1 h （禁食不禁水 8 h）， 除正常对照组给予等容量生理盐水外， 其余各组均腹腔注射盐酸肾上腺素注射液 （0.5 mg/kg） 复制小鼠急性高血糖模型， 分别于注射肾上腺素前 （0 h 血糖） 和注射肾上腺素 0.5 h 后取血测定血糖值。

2.4 对高浓度葡萄糖致小鼠高血糖的影响 小鼠分组与给药方法同 “2.3” 项。 末次给药后 1 h （禁食不禁水 8 h），除正常对照组给予等容量生理盐水外，其余各组均灌胃葡萄糖溶液 （2.5 g/kg） 复制小鼠高血糖模型， 分别于灌糖前 （即 0 h 血糖）， 灌糖后 0.5 h、 1 h 和 2 h， 取血测定血糖值。

3 结果

3.1 对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响 结果如表 1 所示，与正常对照组比较，四氧嘧啶造模后，各组小鼠血糖值明显升高 （P＜0.01） 。 给药 10 d 后， 与 模 型 对 照 组 比较， 地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异 （P＞0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位给药组小鼠血糖值显著降低 （P＜0.05 或 P＜0.01） ， 且给予乙酸乙酯部位的小鼠生长状况好于正丁醇部位给药组小鼠。

表1 地菍不同提取部位对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响 （）

表1 地菍不同提取部位对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响 （）

注： 与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01； 与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 （下同）

给药前 给药后E组别 剂量/（g·kg-1）给药后动物数/只血糖值/（mmol·L-1）正常对照组- 12 5.54 ±0.79 4.75 ±0.77模型对照组 - 10 16.67 ±3.84△△ 16.27 ±1.79△△盐酸二甲双胍组 0.75 12 16.78 ±3.20△△ 12.37 ±1.66**石油醚部位组 60 12 16.64 ±4.35△△ 15.27 ±4.29 40 11 16.84 ±5.64△△ 15.85 ±3.28乙酸乙酯部位组 60 11 16.68 ±2.92△△ 13.34 ±3.03**40 12 16.77 ±4.19△△ 13.38 ±2.95*正丁醇部位组 60 11 16.57 ±4.52△△ 13.46 ±3.93*40 11 16.78 ±4.09△△ 13.41 ±3.46*

3.2 对链脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影响 结果如表 2所示，与正常对照组比较，链脲佐菌素造模后，各组小鼠血糖值显著升高 （P＜0.01）。 给药 10 d 后， 与模型对照组比较，地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异（P＞0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位给药组小鼠血糖值降低非常显著 （P＜0.01）。

表2 地菍不同提取部位对链脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影响 （）

表2 地菍不同提取部位对链脲佐菌素致糖尿病小鼠血糖的影响 （）

血糖值 /（mmol·L-1）给药前 给药后正常对照组组别 剂量/（g·kg-1）给药后动物数/只- 12 5.98 ±0.56 4.42 ±1.88模型对照组 - 11 11.92 ±3.54△△ 17.57 ±7.71△△格列苯脲组 0.4 11 11.98 ±3.10△△ 8.49 ±6.82**石油醚部位组 60 10 11.96 ±3.25△△ 16.52 ±7.20 40 10 12.04 ±4.01△△ 16.79 ±8.01乙酸乙酯部位组 60 12 12.01 ±3.92△△ 10.09 ±5.91**40 11 11.97 ±3.15△△ 8.18 ±5.71**正丁醇部位组 60 11 11.89 ±3.02△△ 8.33 ±6.69**40 10 11.98 ±3.19△△ 8.62 ±5.94**

3.3 对盐酸肾上腺素致小鼠高血糖的影响 结果如表 3 所示， 与正常对照组比较， 腹腔注射盐酸肾上腺素 0.5 h 后各组小鼠血糖显著升高 （P＜0.01）。 与模型对照组比较，地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值无显著差异 （P＞ 0.05）， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位则显著抑制盐酸肾上腺素引起的小鼠急性血糖升高 （P＜0.05 或 P＜0.01）。

表3 地菍不同提取部位对盐酸肾上腺素致小鼠高血糖的影响 （， n=10）

表3 地菍不同提取部位对盐酸肾上腺素致小鼠高血糖的影响 （， n=10）

0 h 0.5 h正常对照组组别 剂量/（g·kg-1）血糖值 /（mmol·L-1）- 3.54 ±1.19 3.48 ±0.94模型对照组 - 3.92 ±3.43 11.27 ±2.84△△盐酸二甲双胍组 0.75 4.64 ±3.15 8.66 ±2.49△△*石油醚部位组 60 3.31 ±4.02 10.10 ±2.66△△40 3.31 ±0.87 10.33 ±2.31△△乙酸乙酯部位组 60 3.82 ±3.12 8.58 ±2.42△△*40 2.86 ±3.00 7.48 ±2.13△**正丁醇部位组 60 3.65 ±2.51 8.81 ±2.70△△*40 2.59 ±1.06 8.17 ±2.52△△*

3.4 对高浓度葡萄糖致小鼠高血糖的影响 结果如表 4 所示，与正常对照组比较，模型组小鼠灌胃给予葡萄糖后血糖逐渐升高， 到 0.5 h 达到最高峰 （P＜0.01）。 与模型对照组比较， 灌胃给予葡萄糖后 0.5 h， 地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位高剂量有显著的降糖作用 （P＜0.05）。 1h 后，地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位的降糖作用显著 （P＜0.05 或 P＜0.01）。 2 h 后， 地菍乙酸乙酯部位仍有显著的降糖作用 （P＜0.05）。 地菍石油醚部位给药组小鼠血糖值与模型组无显著差异 （P＞0.05）。

表4 地菍不同提取部位对高浓度葡萄糖致小鼠高血糖的影响 （， n=10）

表4 地菍不同提取部位对高浓度葡萄糖致小鼠高血糖的影响 （， n=10）

血糖值 /（mmol·L-1）0 h 0.5 h 1 h 2 h正常对照组组别 剂量/（g·kg-1）2.89 ±1.01 2.67 ±0.94 2.74 ±0.85 2.94 ±1.14模型对照组 2.76 ±5.92 16.10 ±3.26△△ 15.88 ±2.35△△ 13.67 ±2.51△△盐酸二甲双胍组 0.75 2.80 ±5.68 12.87 ±3.31△△** 12.11 ±2.47△△** 11.02 ±2.88△△*石油醚部位组 60 2.58 ±6.65 14.80 ±3.11△△ 13.33 ±1.48△△ 12.01 ±2.82△△40 2.80 ±6.65 14.90 ±3.48△△ 13.07 ±2.63△△ 12.48 ±2.20△△乙酸乙酯部位组 60 2.63 ±6.08 13.93 ±2.57△△* 12.19 ±3.95△△* 11.29 ±1.66△△*40 2.75 ±6.15 14.01 ±3.12△△* 12.37 ±3.32△△* 11.59 ±1.88△△*正丁醇部位组 60 2.86 ±6.12 14.21 ±2.60△△* 10.69 ±3.36△△** 11.71 ±3.09△△40 2.74 ±6.45 14.84 ±2.50△△ 12.50 ±3.51△△* 12.34 ±3.58 -△△

4 讨论

四氧嘧啶和链脲佐菌素是胰岛β细胞毒剂，常作为建立糖尿病动物模型的造模用药，两者可选择性地使多种动物的胰岛细胞很快呈现不可逆的损坏或坏死，影响胰岛素的分泌， 最终导致血糖过高和糖尿病的发生［8］。 肾上腺素具有α和β受体激动作用，能促进肝脏及肌肉糖原分解，肌肉中糖酵解生成的乳酸增多，经三羧酸循环糖异生增快，从而使血糖升高， 造成急性高血糖［9］。 为深入研究地菍降血糖活性组份，本实验以不同极性溶剂依次对地菍乙醇提取物进行萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。分别建立四氧嘧啶、链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型，肾上腺素、高浓度葡萄糖致小鼠急性高血糖模型，对地菍各提取部位进行降血糖活性筛选。研究结果表明，瑶药地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述糖尿病或高血糖模型小鼠的血糖，显示出较强的降糖活性，且乙酸乙酯部位给药组小鼠生长状况尤为良好，而石油醚部位对血糖无显著影响。提示乙酸乙酯部位和正丁醇部位为其主要降糖活性部位，尤以乙酸乙酯部位疗效较佳，可能与地菍的降血糖药效物质基础有关，值得深入地研究。

［ 1 ］ 国家中医药管理局 《中华本草》 编委会.中华本草［M］.上海： 上海科学技术出版社， 1999： 628-629.

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［6］ 李 丽，罗泽萍，周焕第，等.地菍提取物降血脂作用的实验研究［ J］ .时珍国医国药， 2012， 23（11） ： 2783-2784.

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［8］ 王维恩，赵维元.熏倒牛生物碱有效部位对链脲霉素致糖尿病小 鼠 血 糖 的 影 响 ［ J］.中 成 药， 2011， 33 （9 ）：1584-1586.

［ 9 ］ 陈 奇.中药药理研究方法学 ［M］.2 版.北京： 人民卫生出版社， 2006： 721.

R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1065-04

066,ebook=187

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.042

2013-06-14

广西自然科学基金资助项目 （2013GXNSFAA019134）； 广西高等学校科研项目 （201203YB107）

李 丽 （1973—） ， 女， 硕士， 副教授， 硕士生导师， 研究方向： 中草药药效及生化药理。 Tel： （ 0771 ） 2279423， E-mail：lilygxnn@163.com

*通信作者： 杨秀芬 （1969—）， 男， 博士， 教授， 硕士生导师， 研究方向： 内分泌、 代谢药理及心血管药理。 Tel： （0771） 2279423，E-mail： xiufenyang@163.com