瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠血清炎症因子影响的实验研究

卞 海， 宋 燕， 王雅娟， 李亚军， 孙洪胜， 陈赛赛， 龙子江*

（1.安徽中医药大学药理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中医院，安徽 合肥 230038）

［科研报道］

瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠血清炎症因子影响的实验研究

卞 海1， 宋 燕2， 王雅娟1， 李亚军2， 孙洪胜1， 陈赛赛2， 龙子江1*

（1.安徽中医药大学药理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中医院，安徽 合肥 230038）

目的 探讨瓜蒌薤白白酒汤大、中、小剂量对硬膜下血肿模型大鼠血清中炎症因子的影响。方法 建立硬膜下血肿大鼠模型， 随机分为假手术组、 模型组、 阳性组 （华佗再造丸）、 瓜蒌薤白白酒汤大、 中、 小剂量组， 每组10 只， 各组连续灌胃 14 d 后， 腹主动脉取血， 以酶联免疫吸附测定法 （ELISA） 检测各组血清中 IL-2、 IL-6、 IL-8、TNF-α的水平。 观察各项指标的差异性及瓜蒌薤白白酒汤大、 中、 小剂量组对硬膜下血肿的治疗作用， 并对瓜蒌薤白白酒汤大、中、小剂量组的治疗效果进行对比。结果 瓜蒌薤白白酒汤高、中剂量组能够升高硬膜下血肿模型大鼠血清炎症因子 IL-2 水平， 升高 IL-6、 IL-8 水平， 与模型组比较， 差异具有统计学意义 （ P＜0.01、 P＜0.05 ） 。 结论 瓜蒌薤白白酒汤能减小血肿面积起到有效的脑保护作用。

瓜蒌薤白白酒汤；硬膜下血肿；炎症因子

硬膜下血肿是指颅内出血的血液积聚于硬脑膜下腔形成积液或血肿， 是临床上的常见病之一［1］。 颅内 CSDH的病因机制尚未明确，由于其特殊的易患人群，死亡率达1.5% ～8%， 术后复发率达 9.2% ～26.5%［2］。 由于多种原因导致颅内出血聚集于硬膜下腔称为硬膜下血肿 （Subdural Hematoma， SDH）， 为神经外科最常见的颅内血肿之一，可呈多发性、并常伴脑实质损伤或与别种血肿合并发生， 其发病率约占创伤性颅内血肿的 50%［3］。 硬膜下血肿一旦发生，不易自愈，通常需采用手术治疗，但病残率与死亡率较高［4］。 临床症状不明显、 不能手术或不愿手术的硬膜下血肿患者，则可采用包括中医中药在内的保守治疗方法。中医可采用活血化瘀法促进脑部积液的吸收治疗硬膜下血肿［5］。 诸多研究证实， 白介素不仅参与缺血性脑损伤局部炎症反应，而且在复杂的细胞因子网络中处于中心地位［4］。 本实验通过对大鼠 血清中炎症 因子 IL-2、 IL-6、IL-8、 TNF-α水平的检测以及抗凝血的研究， 探讨瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠的作用及作用机制，为临床用药提供实验依据。

瓜蒌薤白白酒汤出自东汉张仲景 《金匮要略》， 由瓜蒌、薤白、白酒组成。去白酒即为瓜蒌薤白汤，功用通阳散结、行气祛痰，主治胸痹，症见胸部隐痛，甚至胸痛彻背，喘息咳唾，短气，舌苔白腻，脉沉弦或紧。方中以瓜蒌理气宽胸，涤痰散结，为君药。薤白温通滑利，通阳散结，行气止痛，为臣药。两药相配，一祛痰结、二通阳气，相辅相成，为治胸痹之要药。佐以辛散温通之白酒，行气活血，增强薤白通阳之功。

1 材料与方法

1.1 实验动 物与药 物 健 康 SD大鼠 60 只， 体质量（200 ±20） g， 雄性， 由安徽医科大学动物中心提供， 许可证号 SCXK （苏） 2010-0004； 瓜蒌薤白白酒汤购自安徽中医药大学第一附属医院 ［制备方法： 瓜蒌实一枚 （24 g）、薤白半升 （12 g）、 白酒七升 （适量）。 三味同煮， 取二升，分温再用］； 阳性药为华佗再造丸 （广州奇星药业有限公司） 批号 9350。

1.2 实验试剂与器材 水合氯醛， 天津市光复精细化工研究所， 批号 20110304； IL-2 试剂盒， 上海源叶生物技术有限公司， 批号 CK-E95459C； IL-6 试剂盒， 上海源叶生物技术有限公司， 批号 CK-E67489C； IL-8 试剂盒， 上海源叶生物技术有限公司， 批号 CK-E87059C； 牙骨粉， 上海二医张江生物材 料 有限公司， 批号 120605； EDTA-Na2抗 凝 管，江西精致医疗器械有限公司， 批号 2012025； STRONG-204牙科钻 （ Saeshin 公司）； ACS-6 电 子 计 价 秤 （ 华 鹰 衡 器 有限公司）； JW-3021HR低温离心机 （安徽嘉文有限公司）；DK-420 电热恒温水槽 （上海三发科学仪器有限公司）； RT-6000 酶标分析仪 （深圳雷杜生命科学股份有限公司）。

1.3 动物模型制备 取 SD大鼠 60 只， 适应性饲养 7 d 后称重， 腹腔注射 3.5%水合氯醛 （1 m L/100 g） 麻醉大鼠，将大鼠头部剃去 3 cm×3 cm鼠毛， 消毒后用手术刀沿头顶正中线切长3 cm的切口， 剥离右侧的头皮、 肌层及骨膜；眼眦取血约 600 μL， 吸入注射器， 用牙科钻在大鼠头顶前囟右 下 侧 3.0 mm处 钻 出直径为 1.0mm的骨 孔， 向 硬 膜 下腔隙缓 慢 注射 300 μL自 体血 液， 留针 5 min 后 拔 出 并 用 牙科粉封闭骨孔，缝合头皮，在缝合处滴加青霉素以防止感染。假手术组大鼠造模方法相同，但不注射自体血液。

1.4 动物分组及给药 将造模完成后的大鼠随机分为模型组、假手术组、阳性药组、瓜蒌薤白白酒汤大剂量组、瓜蒌薤白白酒汤中剂量组、瓜蒌薤白白酒汤小剂量组，每组10只； 各组大鼠按设定剂量灌胃给药， 其中阳性药组为0.54 g/kg， 瓜蒌薤白白酒汤大剂量组 （ 所用药物均为已制备好的 成 药） 为 5.65 g/kg， 瓜 蒌 薤 白 白 酒 汤 中 剂 量 组 为2.83 g/kg， 瓜 蒌 薤白白酒 汤 小剂量组 为 1.41 g/kg， 模 型 组和假手 术 组灌胃给 同 等容量蒸 馏 水， 连 续 给药 14 d。

1.5 动物处理 于第14 天各组大鼠末次灌胃给药1 h 后， 用3.5%水合氯醛 （1.0mL/100 g体质量） 腹腔注射麻醉， 进行腹主动脉采血， 并将血液放入 EDTA-Na2抗凝管和软管， EDTA-Na2抗凝管以 3 000 r/min 低温离心 15min， 取血浆放入 EP管中， 软管中的血 3 000 r/min 离心 15min 得血清。

2 实验结果

2.1 瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模型大鼠血清 IL-6、 IL-8水平影响 实验结果见表1。

表 1 各 用药组对 硬 膜 下 血 肿 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影响 （， n=10）

表 1 各 用药组对 硬 膜 下 血 肿 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影响 （， n=10）

注： 与空白组比较，**P＜0.01； 与模型 组比 较，△△P＜0.01，△P＜0.05

组 别 剂量/（g·kg-1）IL-6/（ng·L-1）IL-8/（ng·L-1）假手术组- 169.46 ±15.03 497.22 ±76.29模型组 - 211.57 ±10.26** 710.51 ±22.49**瓜蒌薤白白酒汤高剂量组5.65 100.01 ±9.94△△ 362.25 ±35.48△△瓜蒌薤白白酒汤中剂量组2.83 173.74 ±14.19△ 380.01 ±32.87△△瓜蒌薤白白酒汤低剂量组1.41 188.76 ±13.17 476.69 ±45.93华佗再造丸组 0.54 152.56 ±14.56△△543.96 ±42.17△△

与空白组比较， 模型组血清 IL-6 水平上升， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）， IL-8 水平上升 （P＜0.01）， 差异具有统计学意义。与模型组比较，华佗再造丸阳性对照组，IL-6， IL-8 水 平 下 降， 差 异 具 有 统 计 学 意 义 （ P＜0.01、P＜0.01）； 瓜蒌薤白白酒汤高剂量组、 中剂量组 IL-6 水平均下降， 差异具有统计学意义 （P＜0.01、 P＜0.05）； 瓜蒌薤白白酒汤高剂量组、 中剂量组 IL-8 水平均下降， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。

2.2 瓜蒌薤白白酒汤对硬膜下血肿模 型大鼠血清 IL-2、TNF-α水平影响 实验结果见图 1 ～2。

图 1 各用药组对硬膜下血肿模型大鼠血清 IL-2 水平的影响 （， n=10）

图 2 各用药组对硬膜下血肿模型大鼠血清 TNF-α水平的影响 （， n=10）

与空白组比较， 模型组血清 IL-2 水平下降， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。 与模型组比较， 瓜蒌薤白白酒汤高、 中剂量组 IL-2 水平上升， 差异具有统计学意义 （ P＜0.01）； 华佗再造丸阳性对照组 IL-2 水平上升， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。 与空白组比较， 模型组大鼠血清TNF-α水平升高， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。 与模型组比较， 瓜蒌薤白白酒汤高、 中剂量组 TNF-α水平下降， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。 华佗再造丸阳性对照组 TNF-α水平下降， 差异具有统计学意义 （P＜0.01）。

3 讨论

以往 的 研 究 者 从 瓜 蒌 （ Trichosanthes kirilowii Maxim.）里分离出具有血球凝集活性的外源性凝集素。并且从种子油的不皂化部分里分离鉴定出了5 个羟基化甾醇， 10 个 D：C-异齐墩果烷型三萜， 2 个侧链具有羟基四氢呋喃的环阿尔廷醇型三萜，2个葫芦烷型三萜，它们都是新化合物，其中 7-氧代-10α-葫芦二烯醇、 7-Oxoisomultiflorenol、 3-表栝楼仁二醇 （ 3-epikarounidiol） 、 3-Epibry-onolol等 对 TPA诱 导的小鼠耳部炎症具有显著抑制作用。 IL-8 生物学作用主要有激活中性粒细胞并释放超氧化物和溶酶体酶、使其产生呼吸爆发、刺激中性粒细胞产生白三烯而增加血浆渗出，因此炎症反应与其生物学活性密切相关［6］。 研究表明薤白（ Allium macrostemon Bunge） 含有以 下几种 有效成分： 甲基大蒜氨酸、大蒜糖和大蒜氨酸。挥发油主要是甲基丙烯基三硫醚、甲基烯丙基三硫醚、二甲基三硫醚和甲基丙基三硫醚等硫醚类化合物。 N-反式阿魏酰酪胺和 N-香豆酰酪胺可以有效地抗人体血小板聚集［7］。 药理数据显示薤白苷有较强的抑制 ADP诱导的人血小板聚集作用。

TNF-α可促使星形 胶质细 胞中的 IL-6、 IL-8 等炎症因子的 mRNA转录及表达， 起到协同致炎作用。 TNF-α还可诱导强效血管活性物质的释放，从而引发血管收缩，减少局部脑血流量，增加毛细管通透性，进一步加重血脑屏障，促进脑缺血及水肿的发生［8］。 IL-6 与其受体特异性结合， 通过细胞内信号转导促进炎症反应和凝血。在机体感染、创伤等原因时 IL-6 参与了受伤部位的单核细胞和粒细胞的集聚和激活、血栓形成、血管扩张、血小板集聚，加重水肿和脑缺血等。 IL-2 主要由活化的 T淋巴细胞产生， 其生物学活性是自然杀伤细胞增殖和促进细胞毒性淋巴细胞，诱导淋巴因子激活杀伤细胞，促进B淋巴细胞的增殖和分化［9］。 本实验中瓜蒌薤白白酒汤高剂量组、 中剂量组 IL-2高于模型组，由此可看出瓜蒌薤白白酒汤可以促进T淋巴细胞对 IL-2 的产生和释放， 在硬膜下血肿疾病中具有一定的疗效［10］。

硬膜下血肿中 IL-6、 IL-8 和 TNF-α的水平 与其术后复发有明显的相关性。本实验使用的复方瓜蒌薤白白酒汤能够升高 大 鼠 血 清 中 IL-2 的水 平， 降 低 IL-6、 IL-8、 TNF-α水平，对大鼠血清中炎症因子具有一定的调节作用。

［ 1 ］ 陶志强.慢性硬膜下血肿的病因和发病机制［J］.中华神经外科疾病研究杂志， 2009， 8（2）： 190-192.

［ 2 ］ 苏少波.慢性硬膜下血肿发病机制研究进展［J］.国际神经病学神经外科学杂志， 2009， 36（3）： 221-223.

［3］ 陆 将，贺世明，王学廉，等.急性硬膜下血肿新型救治模式的建立及临床研究［J］.中国急救医学， 2006， 26（10）： 656-658.

［4］ 高 瑜，黄伟奇，巫建国.慢性硬膜下血肿的诊断与治疗［J］.中华全科医学， 2009， 7（4）： 368-369.

［5］ 韩 岚，许 钒，章小兵，等.桃红四物汤活血化瘀作用的实验研究［J］.安徽中医学院学报， 2007， 26 （1）：36-38.

［ 6 ］ 郭梅凤， 孙宝玲.急性颅脑损伤患者血清 TNF-α和 IL-2 水平的变化及临床意义［J］.实用临床医学， 2012， 13（3）：1-3.

［7］ 张建堂，李国秀.瓜萎薤白白酒汤的方药药理及临床治验［J］.中国医药指南， 2007（9）： 42-43.

［ 8 ］ 张予阳， 刘 岩， 付守廷.脑缺血与炎症反应［J］.中国药理学通报， 2006， 22（1）： 5-9.

［ 9 ］ 瞿新艳.水蛭的抗凝血作用研究［J］.现代中西医结合杂志， 2010， 19（13）： 1582-1583.

［10 ］ Hong H J， Kim Y J， Yi H J， et al.Role of angiogenic growth factors and inflammatory cytokine on recurrence of chronicsubdural hematoma［ J］ .Surg Neurol， 2009， 71（2） ： 161-165.

R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1051-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.037

2013-08-15

安徽中医药大学 2013 年大学生创新创业基金项目 （201320）； 2013 年度安徽省高等学校省级自然科学研究项目（KJ2013A173）； 2014 年度安徽省自然科学研究项目 （1408085QH181）

卞 海 （1981—） ， 男， 硕士， 讲师， 研究方向： 药理学。 Tel： 13956062588， E-mail： bianhai410@126.com

*通信作者： 龙子江， 教授， 硕士生导师， 研究方向： 中药药理学。 Tel： （0551） 65169216， E-mail： lzjyls@163.com