人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈病变的关系

陈岳青 王一凤 陈文学

人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈病变的关系

陈岳青 王一凤 陈文学

目的 探讨HPV感染与宫颈病变发生的关系。方法 将病理检查确诊宫颈有病变的187例患者分为3组:慢性炎症组(n=41)、宫颈上皮瘤变(CIN)组(n=62)和宫颈癌组(n=84)。采用人乳头瘤病毒核酸扩增分型技术对患者宫颈脱落细胞样本作HPV基因分型检测，分析HPV感染状况及HPV基因型在各组疾病中的分布。结果 ①187例患者中共检出HPV阳性者136例，阳性率为72.72%(136/187)，其中高危型HPV感染阳性率为95.58%(130/136)。在被测的21个HPV亚型中最常见的6个类型依次为16型(46.32%、63/136)，58型(21.32%、29/136)，52型(15.44%、21/136)，18型(12.50%、17/136)，33型(9.56%、13/136)，31型(8.09%、11/136)，未检测出44型、43型及6型。②慢性炎症组HPV阳性率为14.63%(6/41)；CIN组HPV阳性率为85.48%(53/62)、其中CINⅠ组、CINⅡ组、CIN Ⅲ组中HPV感染率分别为62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.00%(24/25)；宫颈癌组HPV阳性率91.67%(77/84)。CIN及宫颈癌组HPV阳性率均高于炎症组，而CINⅡ～CINⅢ组及宫颈癌组HPV阳性率又明显高于CINⅠ组。3组阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。③HPV阳性者中单一感染率为67.65(92/136),多重感染率为32.35%(44/136)，其中以双重感染为主，占79.55%(35/44)。④HPV感染患者年龄以 30～59岁最高，但各年龄段HPV感染检出率比较无统计学差异(P>0.05)。⑤慢性炎症组、CIN组和宫颈癌组的16型感染率分别为16.67%(1/6)、47.16%(25/53)、48.05%(37/77)。CIN组和宫颈癌组的16型感染率高于慢性炎症组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV感染与宫颈病变发生、发展密切相关，HPV基因分型诊断对宫颈病变高危人群的筛查、预防、临床诊断、治疗可提供重要的理论依据。

人乳头瘤病毒;宫颈病变;基因分型

(ThePracticalJournalofCancer,2014,29:1540～1543)

宫颈癌是全球妇女第二大常见肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌，80%左右发生在发展中国家。在我国宫颈癌发病通常在35岁以后，高峰年龄段为45～49岁，近年来我国宫颈癌的发生有明显上升和年轻化趋势，发病以每年2%～3%的速度增长[1]。通过现有的研究显示HPV持续感染是导致宫颈上皮内瘤变并进一步引发宫颈癌的主要病因[2]。本研究进一步分析HPV感染与宫颈病变的相关性,深入了解宫颈病变患者HPV感染状况,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年9月-2013年10月在我院门诊就诊的表现为不规则阴道流血、流液，接触性阴道出血，或无症状仅在妇科体检时发现宫颈外观异常的187例患者，经阴道镜活检、病理学检查确诊为慢性炎症、宫颈上皮瘤变CIN及浸润癌，年龄27～74岁，平均年龄(39.80±9.14)岁，其中慢性炎症41例、宫颈上皮瘤变CINⅠ16例、CIN Ⅱ 21例、CIN Ⅲ 25例，浸润癌(鳞癌、腺癌)84例。

1.2 方法

1.2.1 HPV DNA取样 受检者由妇产科医生用窥阴器暴露宫颈，用无菌棉拭下将宫颈口的分泌物擦去，将专用宫颈刷伸入宫颈口处，宫颈刷沿一个方向旋转3～5圈取出，放入专用的细胞保存液中，送实验室置4 ℃冰箱保存，1周内完成检测。患者通常在行阴道镜及宫颈活组织病理检查同时取HPV DNA样。

1.2.2 HPV基因分型检测 采用凯普HPV分型检测试剂盒，通过分离提取宫颈细胞中的DNA、PCR扩增、导流杂交3个步骤检测出21种HPV基因型。结果的判定通过肉眼观察获得:检测结果阳性者为清晰可见的蓝紫色圆点。根据杂交条膜HPV分型分布图判断阳性点的HPV病毒亚型。每一批同时扩增阳性对照和阴性对照。21种亚型包括16种高危亚型(16,18,31,33,35,39，45,51,52,53,56,58,59，66,68,CP 8304)和 5种低危亚型(6,11,42,43,44)。

1.2.3 统计学处理 建立Excel数据库，采用SPSS 16.0统计软件，计数资料采用例数或百分率描述，组间比较用χ2检验或精确概率检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV检测阳性率及各亚型分布情况

187例宫颈病变患者中共检出HPV感染阳性者136例，阳性率为72.72%(136/187)。慢性炎症组HPV感染阳性率14.63%(6/41)，宫颈上皮瘤变CINⅠ～Ⅲ组HPV感染阳性率85.48%(53/62)、其中宫颈上皮瘤变CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组中的感染率分别为62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.00%(24/25)，宫颈癌组HPV感染阳性率91.67%(77/84)。高危型感染最多见，在被测的21个HPV亚型中最常见6个类型依次为16型(46.32%、63/136)，58型(21.32%、29/136)，52型(15.44%、21/136)，18型(12.50%、17/136)，33型(9.56%、13/136)，31型(8.09%、11/136)，未检测出44型、43型及6型。

2.2 多重感染分布情况

136例HPV感染阳性样本中，HPV单一感染92例，占67.65%(92/136)；多重感染44例，占32.35%(44/136)。多重感染中以二重感染为主，占多重感染的79.55%(35/44)；三重感染9例，占多重感染的20.45%(9/44)；未见四重及以上多重感染病例。最常见的是HPV16合并其他型别的感染。

2.3 HPV感染年龄分布情况

不同年龄组(<30岁、30 ～39岁、40～49岁、50～59岁、≥60岁)HPV感染率分别为33.33%(2/6)、75.67%(28/37)、79.66%(47/59)、72.72%(40/55)、63.33%(19/30)，经检验，差异无统计学意义(P>0.05)。HPV感染高峰年龄在30～59岁。

2.4 宫颈病变与HPV 16及18亚型的关系

本组病例中HPV16共感染63型次，慢性炎症、CIN Ⅰ、 CIN Ⅱ 、 CINⅢ、宫颈浸润癌中HPV 16的感染率分别为：16.67 %(1/6)、20.00%(2/10)、42.10%(8/19)、62.50%(15/24)、48.05%(37/77)，显示随着宫颈肿瘤癌变级别的升高，HPV16感染的阳性率逐渐升高，且CIN组和宫颈癌组的16型感染率明显高于慢性炎症组，差异有统计学意义(P<0.05)。HPV18亚型共感染17型次，88.23%(15/17)出现在宫颈浸润癌中，其中5例出现在鳞癌中，10例出现在腺癌中，2例出现在CIN瘤变中，慢性宫颈炎症未见HPV18型次感染。

3 讨论

自从1976年ZurHausen推测HPV感染与宫颈癌发生有关后，国内外学者对HPV感染与宫颈癌的相关性进行了大量的研究，并证实HPV感染是宫颈癌发病的必要因素[3]。也有研究结果报道，大约82.4%的宫颈癌前病变和92%的宫颈浸润癌都存在HPV感染[4]。本研究结果显示，宫颈上皮瘤变HPV感染率85.48%和宫颈癌HPV感染率92%，与上述报道结果一致。HPV检测是宫颈病变及宫颈癌筛查的重要方法之一，对早期预防、早期发现和早期治疗宫颈癌有重要作用。本组资料显示，宫颈病变HPV感染以HPV16亚型的感染率最高(63.9%)，并随着宫颈病变分级升高，HPV16亚型感染的阳性率逐渐升高，HPV16亚型在CINⅠ及以上级别的宫颈肿瘤中起了至关重要作用,HPV16是致宫颈癌常见原因,但HPV18致癌作用比HPV16更大,HPV18一旦致病均出现在宫颈癌病例中[5]。

本文HPV感染者以单一感染为主，占67.65%，HPV多重感染率为32.35%，高于蒋旭峰等[6]报道的金华地区多重感染率21.87%，低于陶萍萍等[7]报道的多重感染率44.35%。在多重感染中双重感染占较大比例，为79.55%。HPV多重感染是否促进宫颈病变发生和进展，一直是学者们争议颇多的问题。有学者认为，HPV多重感染是宫颈病变的一个重要危险因素[7-8]，也有学者认为HPV多重感染并不增加宫颈病变的发生率[9-10]。有研究发现，HPV单一感染和多重感染的清除率相当，但部分型别更难以被机体清除，可能更易致持续性感染，从而成为导致宫颈病变及宫颈癌的主要病因[11]。

目前对HPV感染与年龄的相关性有不同观点。Lozcano Ponce等[12]报道在年龄小于25岁的女性(16.17%)及年龄大于65岁的女性(23.10%)中，有2个HPV感染高峰，35～44岁年龄段的女性HPV感染率最低(3.17%)。Sellors等[13]报道在20～24岁年龄段女性HPV感染率最高为24.0%，而45～49岁年龄段女性HPV感染率降至3.4%,HPV感染率随年龄增长逐渐降低。沈艳红等[14]对山西省子宫颈癌高发区30～50岁的女性HPV感染进行调查，不同年龄组之间的HPV感染率经统计学比较无显著性差异(P>0.05)。杨晓华等[15]报道成都农村地区女性HPV高危型感染率50岁以内差异不显著，50岁以上明显降低。本研究发现，HPV感染率在不同年龄段(<30岁、30 ～39岁、40～49岁、50～59岁、≥60岁)无显著差异，60岁以上有所降低，30岁以下感染率明显降低。HPV感染高峰年龄在30～59岁。与山西省、成都地区相近，与国外文献报道[12-13]并不一致。

宫颈癌已成为人类通过注射疫苗、筛查和早诊早治来预防并消灭的第一种恶性肿瘤。宫颈癌作为一种感染性疾病，其预防性疫苗在疾病预防中的作用具有临床意义。根据现有资料，已经上市和在进行临床试验的HPV预防性疫苗，均仅保护有限的几个型别[16-18]。目前HPV预防疫苗针对宫颈癌只能保护HPV16,18型的感染。HPV各亚型引起的感染有明显地域差异[19]，HPV52和HPV58型引起的宫颈癌在亚洲地区所占比例明显高于非洲及西方国家[20]。并有研究发现，宫颈癌中最常见的亚型为HPV16,HPV18,HPV56,HPV58等。通过对本地区宫颈病变妇女HPV感染情况分析，显示感染HPV16,58,52亚型最多，与Lin等[21]报道的一致。根据各地区HPV感染情况及亚型分布规律，针对各亚型研发单价及多价HPV疫苗，对预防及降低宫颈癌的发生，保护妇女健康具有重要意义。

[1] 陈听华,虞永麟.宫颈HPV感染、CIN及宫颈癌3年发生情况分析〔J〕.中国妇幼保健,2011,26(13):1001-1011.

[2] 黄 锐,李有恒,黄碧青.高危型HPV病毒负荷在宫颈癌前病变中的临床意义〔J〕.中国医药指南,2011,23(8):1671-1694.

[3] 王贵宇,刘春江,彭 俏,等.人乳头状瘤病毒感染与子宫颈病变的关系探讨〔J〕.中华医院感染学杂志,2010,20(11):1628-1630.

[4] Fernandes JV,Meissner RV,Carvalho MG,et al.Prevalence of human papillomavirus in archival samples Obtained from patients with cervical pre-malignant and Malignant lesions from Northeast Brazil 〔J〕.BMC Res Notes,2010,3(1):96.

[5] Berlin Crace VM.HPV type 18 is more oncopotent than HPV16 in uterine cervical carcinogenesis although HPV16 is the prevalent type in Chennai,India 〔J〕.Indian J Cancer,2009,46(3):203-207.

[6] 蒋旭峰,蒋群芳.金华地区女性感染人乳头廇病毒基因类型分析〔J〕.放射免疫学杂志,2009,22(1):85-87.

[7] 陶萍萍,卡美璐,李 敏,等.HPV多重感染与宫颈病变关系探讨〔J〕.中国妇产科临床杂志,2006,7(2):94-96.

[8] Fife KH,Cramer HM,Schroeder JM,et al.Detection of multiple human papillomavirus types in the lower genital tract correlates with cervical dysplasia 〔J〕.J Med Virol,2001,64(4):550-559.

[9] Munoz N,Bosch FX，de-Sanjose S,et al.Epidemiologic cla- ssification of human papillomavirus types associated with cervical cancer〔J〕.N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

[10] An HJ,Cho NH,Lee SY,et al.Correlation of cervical carcinoma and precancerous lesions with human papillomavirus (HPV) genotypes detected with the HPV DNA chip microarray method〔J〕.Cancer,2003,97(7):1672-1680.

[11] 毕 惠,赵 健,陈 锐,等.人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈上皮内廇变的相关性〔J〕.中国实用妇科与产科杂志,2005,26(5):362-364.

[12] Lozcano-Ponce E,Herrero R,Munoz N,et al.Epidemiology of HPV infection among Mexican women with normal cervical cytology 〔J〕.Int J Cancer,2001,91(3):412-420.

[13] Sellors JW,Mahony LB,Kaczorowski J,et al.Prevalence a- nd predictors of human papillomavirus infection in women in Ontario,Canada.Survey of HPV in Ontario Women (SHOW) Group 〔J〕.CMAJ,2000,163(5):503-508.

[14] 沈艳红,陈 凤,黄曼妮,等.我国山西省子宫颈癌高发区人乳头瘤病毒感染调查〔J〕.中国医学科学院学报,2003,25(2):381-385.

[15] 杨晓华,秦晓红,夏凤英,等.成都农村地区女性宫颈HPV感染基因型别分布状况〔J〕.中国医疗前沿,2012,7(3):82-83.

[16] 王雪春,孙蓬明,林 芬,等.某地区HPV不同亚型感染与宫颈病变的相关研究〔J〕.国际检验医学杂志,2011,32(10):1024-1025.

[17] 新 琼,沈 铿,李 辉,等.西藏自治区女性子宫颈人乳头状瘤病毒感染现状调查及相关因子分析〔J〕.中华妇科杂志,2009,12(44):898-902.

[18] 陶萍萍.导流杂交基因芯片技术在人乳头状瘤病毒检测中应用研究〔J〕.中华妇产科杂志,2006,41(1):43-47.

[19] 易 为,王建六,李杏红,等.高危型HPV负荷量与宫颈上皮内瘤样变级别Ki-67和P16ink4a表达的关系及随访观察〔J〕.癌症,2008,27(5):520-524.

[20] Clifford GM,Smith JS,Plummer M,et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide:a meta-analysis〔J〕.Br J Cancer,2003,88(1):63-73.

[21] Lin M,Yang LY,Li LJ,et al.Genital human papilomavirus screening by gene chip in Chinese women of Guangdong province〔J〕.Aust N Z J Obstet Gynaecol,2008,48(2):189-194.

(编辑：甘 艳)

Analysis of the Relationships between the Different Subtypes of Human Papillomavirus Infection and Cervical Lesions

CHENYueqing,WANGYifeng,CHENWenxue.

JiangxiCancerHospital，Nanchang,330029

Objective To discuss the relation between human papillomavirus(HPV) infection and the pathogenes of cervical lesions.Methods 187 cases of pathologically confirmed cervical lesions were divided into 3 groups,chronic flammation(n=41) group,cervical intraepithelial neoplasia (CIN)(n=62) group and cervical cancer (n=84)group.The characterization of genotypes of HPV in cervical cells was detected by human papillomavirus PCR method (Kaipu),and the situation of HPV infection and distribution of genotypes of HPV in patients of each group were analyzed.Results 136 patients were infected with HPV,the positive rate was 72.72% (136/187)，and 87 patients were infected with HR-HPV(high risk HPV,95.58%)。HPV-16(46.32%，63/136) was the most common of the 21 subtypes of HPV,followed by subtypes HPV-58(21.32%,29/136)，HPV-52(15.44%,21/136)，HPV-18(12.50%,17/136)，HPV-33(9.56%，13/136)，HPV-31(8.09%，11/136)，and there was no HPV-44 or HPV-43 or HPV-6.The positive rate of HPV in chronic flammation group was 14.63%(6/41),The positive rate of HPV in group of patients with CIN was 85.48%(53/62),and the positive rate of HPV in each typing of CINⅠ、CINⅡ、CINⅢwas 62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.0%(24/25).The positive rate of HPV in group of patiens with cervical cancer was 91.67%(77/84).CIN level and cervical cancer patients of poitive rate of HPV were significantly higher than patients with cervical disease,and the positive rates of HPV in CIN Ⅱ～Ⅲ level and cervical cancer group were significantly higher than type CIN Ⅰ group.The positive rates of the 3 groups were statistically different.HPV-positive rate was 67.65 in single infection (92/136),mixed infection rate was 32.35% (44/136),of which dual infection (35/44) rate was 79.55%.The peak age of HPV infection was 30-59 years old,there was no significant difference in the HPV-positive rates between each group (P<0.05).HPV-16 infection rates of the chronic in flammation,cervical in traepithelial neoplasia and cervical cancer group were 16.67%(1/6)，47.16%(25/53)、48.05%(37/77),respectively.HPV-16 infection rates in cervical in traepithelial neoplasia and cervical cancer group were higher than that of chronic in flammation group,there was significant difference in the positive rate results.(P<0.05).Conclusion HPV infection is closely associated with occurrence and development of cervical lesions,the characterization of HPV-DNA typing can provide significant theoretical basis for screening,prevention,cure and clinical diagnosis of high risk population.

Human papillomavirus(HPV);Cervical lesions;Genotypes

330029 江西省肿瘤医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2014.12.010

R737.33

A

1001-5930(2014)12-1540-04

2014-09-02

2014-10-20)