液基薄层制片技术与传统涂片法在痰脱落细胞检查中的应用

曲灿华，李 莹，赵德明，牟洪香

(佳木斯大学附属第一医院检验科，黑龙江 佳木斯 154003)

痰脱落细胞检查是早期肺癌诊断的重要方法之一，该方法安全、简便、重复性好、患者容易接受等优点广泛应用于临床。传统痰涂片方法存在盲点取材、痰黏稠不易取材、涂片厚薄不均，干扰阅片等弊端，导致临床痰细胞诊断假阴性结果过多。20世纪90年代末出现了液基薄层细胞学检测(liquid-based cytology test，LCT)技术，LCT最早被应用于妇科阴道及宫颈上皮内病变与筛查，极大的提高了宫颈癌及癌前病变的检出率及诊断率[1]。此后，逐渐在非妇科细胞学领域也得到了很好的应用[2]，我院痰液基细胞学检查应用于2007年，收集我院门诊及住院患者855例痰标本脱落细胞检查，采取传统涂片、液基薄层制片技术两种方法联合应用，分析两种制片法在肺癌诊断上的优缺点，探讨在临床中的应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012-09～2013-08我院门诊及住院患者855例痰脱落细胞检查，其中，男468例，女387例，年龄33～89岁，平均(45.7±8.3)岁，对每例患者痰标本同时采用传统方法涂片和液基薄层制片进行细胞学检查。试剂：北京华叶液基细胞处理液。

1.2 方法

①传统涂片：咳痰前晨起漱口，将口水、鼻涕排净，深呼吸几次后再咳，痰必须从肺的深部咳出，一般以血丝痰为好。采用拉片制片法，取合格痰约绿豆粒大小于载玻片上，上压一载玻片，压下，上下玻片向两侧对拉，制成2张涂片，1张干燥后进行瑞氏-吉姆萨染色、1张95%酒精固定10min后，进行巴氏染色。其余标本置于液基细胞处理液中。 ②液基制片：将上述标本置于处理液中后，加入3滴DDT，于振荡器上震荡5min充分混匀，静止30min，消化黏液，加筛网过滤，取滤液倒于离心管中，以1500r/min离心沉淀5min，用一次性吸管吸取上清液弃去，留取约2mL液体，将其混匀，利用甩片机制片1张，95%酒精固定10min后，进行巴氏染色，树脂胶封固涂片后与传统涂片一起显微镜阅片。

1.3 统计学处理

采用SPSS15.0软件对所得出的数据进行χ2检验，P>0.05无统计学意义。

2 结果

2.1 两组涂片整体质量对比

传统涂片上细胞分布不均匀、堆积重叠、黏液多、背景杂乱、读片视觉效果差，但细胞排列方式较好。痰液基涂片细胞分布均匀、数量多、背景清晰、细胞结构易于辨认，读片视觉效果佳。

2.2 细胞学诊断阳性符合率

在所检测的855例痰标本中，细胞学诊断阳性共43例。传统涂片瑞氏-吉姆萨染色：可疑癌4例、癌标本33例，假阴性6例，阳性符合率77%(33/43)。传统涂片巴氏染色：可疑癌4例、癌标本35例，假阴性4例，阳性符合率81%(35/43)。液基薄层制片巴氏染色：可疑癌2例、癌标本39例、假阴性2例，阳性符合率91%(39/43)。

2.3 传统涂片两种染色方法对比

瑞氏-吉姆萨染色阳性符合率77%(33/43)、巴氏染色阳性符合率81%(35/43)，经χ2检验显示传统涂片两种染色方法阳性符合率无统计学意义(P>0.05)。

2.4 与组织病理对比

在所检测的阳性标本中，28例与组织学结果对照。组织学诊断：鳞癌16例、腺癌11例、小细胞癌1例。传统涂片瑞氏-吉姆萨染色诊断鳞癌12例，与组织学诊断分型符合率为75%(12/16)、腺癌9例，与组织学诊断分型符合率为82%(9/11)；传统涂片巴氏染色诊断鳞癌13例，与组织学诊断分型符合率为81%(13/16)、腺癌9例，与组织学诊断分型符合率为82%(9/11)、小细胞癌1例，与组织学诊断分型符合率为100%(1/1)；液基薄层制片巴氏染色诊断鳞癌15例，与组织学诊断分型符合率为94%(15/16)、腺癌10例，与组织学诊断分型符合率为91%(10/11)、小细胞癌1例，与组织学诊断分型符合率为100%(1/1)。

3 讨论

痰脱落细胞检查已作为肺癌诊断及肺癌高危人群筛查的重要手段，我院已开展近40年。传统涂片瑞氏-吉姆萨染色作为传统方法一直延用，近年来开展了传统涂片巴氏染色，由于传统涂片标本未经过处理，涂片背景不够清晰，癌细胞混杂在红细胞、白细胞、组织细胞、细胞碎片，黏液及坏死成分中，以及标本不能及时固定等影响了细胞形态的观察而报告可疑癌(瑞氏-吉姆萨染色4例、巴氏染色4例)，或由于取材等原因导致漏诊而出现假阴性(瑞氏-吉姆萨染色6例、巴氏染色4例)。对于传统涂片瑞氏-吉姆萨染色，我科延用多年，通过对比，两种染色方法其诊断阳性符合率无显著性差异。 液基薄层制片是近年来引进的新技术。该方法是把痰标本经过细胞处理液，将黏液消化处理，使细胞充分暴露，经过滤，去除了血液、黏液、细胞碎片等等，该方法细胞固定及时、细胞形态保存完好，细胞数量适中、涂片薄、背景干净等优点广泛应用于细胞学的各个领域。本组统计资料液基薄层制片诊断，阳性符合率〔91%(39/43)〕高于传统涂片〔瑞氏-吉姆萨染色77%(33/43)、巴氏染色81%(35/43)〕。可疑癌及假阴性报告例数也低于传统涂片。 28例组织学诊断来源于我院及外院的支气管冲洗液、肺肿瘤切除术的组织病理诊断。液基薄层制片巴氏染色与组织病理诊断符合率(鳞癌94%、腺癌91%)高于传统涂片与组织病理诊断符合率(鳞癌：瑞氏-吉姆萨染色75%、巴氏染色81%；腺癌：瑞氏-吉姆萨染色82%、巴氏染色82%)。

通过上述对比，虽然液基制片阳性符合率高于传统涂片，但日常工作中，我们仍采取传统涂片、液基薄层制片技术两种制片方法联合应用。液基薄层制片克服了传统涂片厚薄

不均、细胞重叠、背景杂乱以及细胞本身退变的影响，细胞均匀分布、背景清晰，但经过过滤使细胞群分散，影响了对肿瘤细胞来源的判定，而传统涂片保持了肿瘤细胞原有的排列方式并伴有肿瘤性素质的背景，更利于判断肿瘤细胞的来源，如鳞癌细胞散在或成小堆，多在坏死即肿瘤性素质的背景中。腺癌细胞多成团，镶嵌状排列。小细胞癌排列成松散的细胞群(葡萄串状)或脊椎骨样排列等等。这些特点有利于癌细胞的分型判定。两种制片相互补充将有助于提高肺癌的检出率[2]。在实际工作中，通过两种制片联合应用，尽可能降低假阴性、减少可疑癌报告例数，有利于提高痰恶性肿瘤细胞的检出率。

[1]Beckwith DG,Shane JJ,Dupree WB.The promise and risk of a new technology: the Lehigh Valley Hospital's experience with liquid-based cervical cytology[J].Cancer,1998 ,84(5):317-378

[2]何淑蓉，马正中，贺青.痰细胞学液基薄片与传统涂片的对比研究[J].中华病理学杂志，2005，34(7)：439