毛云芝子实体抗氧化活性研究

摘 要：毛云芝子实体分别用石油醚、乙酸乙酯、乙醇及水提取其中的活性物质，并对所有提取物从DPPH自由基的清除、抑制脂质过氧化力及金属离子螯合力，这三个方面进行体外抗氧化活性的测定。结果表明：毛云芝子实体的各提取物在清除DPPH自由基、抑制脂质过氧化、金属离子鳌合力的抗氧化活性实验中，均表现出不同程度的抗氧化活性，且随浓度的增加活性越强，其中乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最高。

关键词：毛云芝；抗氧化活性；有机溶剂提取物；多糖

毛云芝（CorioLus hirsutus）又名毛栓菌，隶属于非褶菌目多孔菌科云芝属，它是一种药用真菌，民间常用于除风湿、疗肺疾、化脓止咳等，也具有一定的抗肿瘤效果[1]。大型真菌的抗氧化活性，越来越受到关注，野生毛云芝产量较大，易于采集，而且现在已能人工栽培，所以对毛云芝抗氧化活性的研究具有一定的意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料

毛云芝子实体采自承德围场县。石油醚、乙酸乙酯、乙醇等为国产分析纯，DPPH、BHA等购自sigma公司，Ferrozine等购自生工生物工程（上海）有限公司。

1.2 毛云芝子实体活性物质的制备

将子实体干粉，按1：10的比例，依次用石油醚、乙酸乙酯，乙醇浸提。浸提物浓缩干燥，得到的干燥品为各有机相。用有机溶剂萃取后，往干燥的子实体干粉加入蒸馏水，80℃浸提，将提取液浓缩，加入2倍体积的95%乙醇过夜沉淀，离心得沉淀即子实体多糖。

1.3 毛云芝子实体提取物抗氧化活性测定

（1）清除DPPH·的测定方法

参考Brand-Williams W等（1995）实验方法 [2]。以Vc和BHA作为阳性对照。

（2）抑制脂质过氧化活性实验方法

参考Joao C·M·Barreira等（2008）的实验方法[3]。以Vc和BHA作为阳性对照。

（3）金属离子螯合能力测定实验方法

参考DinisT·C·P等（1994）实验方法[4]。以EDTA作为阳性对照。

2 结果与分析

2.1 毛云芝提取物清除DPPH的测定结果

清除DPPH自由基法是一种简单快速的验证提取物对自由基清除能力的方法，常用来评估抗氧化物的供氢能力[5]，毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖清除DPPH自由基的测定结果：除了毛云芝石油醚相在0.5mg/mL时不具有清除DPPH自由基的作用外，其它提取物在不同浓度下均具有不同程度的清除作用。而毛云芝石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖清除率的IC50值分别是12.23mg/mL、1.25mg/mL、1.31mg/mL、7.24mg/mL，可见乙酸乙酯提取物清除自由基的能力最强。

2.2 毛云芝提取物抑制脂质过氧化活性测定结果

脂质过氧化的终产物MDA，使细胞的新陈代谢紊乱、免疫能力减低、结构和功能的改变等，而脂类是构成生物膜的重要成分[6]。因此，抑制脂类的过氧化具有重要的生物学意义。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的抑制脂质过氧化活性测定结果：毛云芝各有机相的提取物在不同浓度下均具有不同程度的抑制肝脂质过氧化作用。在不同浓度下，乙酸乙酯提取物的抑制过氧化作用均高于其它提取物。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分别是5.02mg/mL、0.26mg/mL、1.17mg/mL和10.54mg/mL，也表明乙酸乙酯提取物抑制脂质过氧化作用最强。

2.3 毛云芝提取物金属离子鳌合力测定结果

抗氧化机制中螯合过渡金属离子也是判定某物质抗氧化能力的重要指标，螯合Fe2+不仅能终止Fe2+参与的自由基链式反应，还能抑制高攻击性OH的释放，从而中断脂质氧化的反应链，对抑制脂质过氧化非常重要[7]。另外，对Fe2+的络合可以抑制含Fe2+脂肪酶的活性，延缓氧化进程。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的金属离子螯合力测定结果：毛云芝各提取物在不同浓度下均有不同程度的金属离子螯合能力。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分别是118.24mg/mL，4.32mg/mL，7.88mg/mL和9.16mg/mL，可见乙酸乙酯提取物螯合金属离子的能力最强。

3 结束语

通过对毛云芝子实体的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和多糖的抗氧化力的测定，表明几种提取物均具有不同程度的抗氧化活性。根据实验数据所计算出的IC50值，得到乙酸乙酯提取物在清除DPPH自由基，抑制脂质过氧化和螯合金属离子方面具有较高活性，随提取物浓度的增加抗氧化活性增加显著，优于或接近于阳性对照。虽然对多糖的抗氧化性研究的较早也较成熟，但实验结果显示毛云芝多糖的抗氧化性不高。研究较多的抗氧化物质有酚类、三萜类、黄酮类等，但乙酸乙酯提取物中的抗氧化物质有几种、是哪种物质，就需要做进一步的分离纯化才能得出结论。

参考文献

[1]卯晓岚.中国大型真菌[M].郑州：河南科学技术出版社，2000.

[2]Brand-WiLLiams W.， CuveLier M. E.， Berset C.. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity[J]. Food Science and Technology， 1995， 28： 25-30.

[3] Joao C.M. Barreira ， Isabel C.F.R. Ferreira ， M. Beatriz P.P. OLiveir ，et al. Antioxidant activities of the extracts from chestnut flower，leaf， skins and fruit[J]. Food Chemistry， 2008， 107： 1106-1113.

[4] Dinis T.C.P.， Madeira V.M.C.， ALmeida L.M.. Action of phenolic derivates （acetoaminophen， salycilate， and 5-aminosalycilate） as inhibitors of membrane lipid peroxidation and as peroxyl radical scavengers[J]. Archive Biochemistry Biophysics， 1994， 315： 161-169.

[5]彭长连，陈少薇，林植芳，等. 用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力[J].生物化学与生物物理进展， 2000.

[6]李燕，蔡东联，胡同杰，等. 银耳多糖对实验性衰老小鼠的保护作用[J]. 第二军医大学学报，2004.

[7]BraughLer J.M.，Chase R.L.，Pregenzer J.F. Oxidation of ferrous ion during peroxidation of various lipid substrates[J]. Biochimica Biophysica Acta， 1987， 921： 457-464.

作者简介：李洁（1984，4-），女，籍贯：河北省定州市，学位：硕士，职称：助理工程师，研究方向：真菌生化与分子生物学。