MyD88、NF－κB及TNF－α在梅毒患者血清中的表达

刘志芳 马元龙 阿拉腾楚鲁 于希军 贺 伟

MyD88、NF－κB及TNF－α在梅毒患者血清中的表达

刘志芳 马元龙 阿拉腾楚鲁 于希军 贺 伟

目的: 检测髓样分化因子88(MyD88)、核因子－κB(NF－κB)及肿瘤坏死因子－α(TNF－α)在梅毒患者血清中的表达。方法: 采用ELISA方法检测82例临床确诊的一期及二期梅毒患者与48名正常人血清MyD88、NF－κB和TNF－α水平。结果: 82例梅毒患者血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平均高于正常对照组，两者比较差异均有显著性(P＜0.001)。结论: MyD88、NF－κB和TNF－α可能与TP感染机体后的免疫应答有关。

梅毒； 梅毒螺旋体； 髓样分化因子88； 核因子－κB； 肿瘤坏死因子－α

Toll样受体(Toll－like recepter，TLR)家族中的TLR2参与了免疫细胞对TP的识别和信号转导，可通过其跨膜结构将TP膜脂蛋白刺激信号导入细胞内，产生复杂的级联信号反应，引起相应炎症介质的释放，其中髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是Toll样受体超家族的重要成员，是启动活化核因子－κB(nuclear factor－kapaB，NF－κB)的必要衔接蛋白。1NF－κB作为信号传导途径中的枢纽，是一种重要的核转录因子，可通过调控TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等多种重要因子的表达，在机体的免疫应答、炎症反应及细胞的生长调控等方面发挥重要作用，其活化也参与细胞增殖和凋亡的过程。2有研究报道TNF－α是TP感染后机体免疫应答的重要炎症介质，3，4因此本实验进一步对TNF－α及上游调控因子MyD88、NF－κB进行了研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择有典型皮肤损害的未经治疗的首诊一期梅毒23例及二期梅毒59例，其中男48例，女34例，年龄17～65岁，平均37岁，均无自身免疫性疾病及其它可出现梅毒抗体阳性的疾病。HIV检测阴性。所有病例均通过梅毒螺旋体乳胶凝集试验(TPPA)检测为阳性，RPR(快速血浆反应素环状卡片试验)阳性，滴度在1∶8～1∶128。将患者的血清吸入EP管内，－80℃保存待测。二期梅毒表现为手足红斑21例，躯干玫瑰糠疹样红斑20例，银屑病样皮疹11例，其他少见皮疹6例。正常对照组48名来自体检中心，病例组与对照组的年龄和性别分布无统计学差异。

1.2 实验方法 将标本取出，复温。采用ELISA法检测患者及正常对照组血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平。ELISA试剂盒购自美国RB公司，严格按说明书操作。主要仪器BIO－BAD680酶标仪、BIO－BAD1575洗板机。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，测得结果用¯x±s表示，一期梅毒、二期梅毒及正常对照3组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，组内比较用LSD法。

2 结果

见表1。一期、二期梅毒患者中3种因子的含量高于对照组(MyD88:F＝91.334，P＜0.001；NF－κB:F＝84.225，P＜0.001；TNF－α:F＝161.099，P＜0.001)；一期、二期梅毒患者MyD88、NF－κB组间无显著性差异(P＞0.05)，两组间TNF－α有显著性差异(P＜0.001)。

表1 3组血清MyD－88、NF－κB及TNF－α的检测结果

3 讨论

MyD－88是Toll样受体转导通路中关键的转接分子，是信号向下游转导的关键靶分子，被称为万能衔接蛋白。5TP具有膜脂蛋白，与脂多糖结合蛋白CD14和TLR相互作用。一些糖脂可以导致强烈的直接免疫应答，其他一些可能作为强有力的抗原，诱导适应性免疫反应。6因此推断，梅毒螺旋体侵入皮肤黏膜后，其膜脂蛋白作为最重要的病原相关分子模式(PAMP)，被单核细胞膜上的TLR2识别，在CD4协同下将信号由胞区外传至胞浆TLR区域，主要经MyD88途径活化NF－κB，NF－κB移至细胞核内，并结合启动子和前炎性基因增强子上的IκK－β位点，开始转录过程。7NF－κB作为信号传导途径中的枢纽，是一种重要的核转录因子，可诱导TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等炎症因子的释放，8而TNF－α是一种具有介导炎症、免疫应答和凋亡等多种生物效应的细胞因子，主要由单核－巨噬细胞、淋巴细胞和角质细胞产生，能够增强中性粒细胞的趋化性，协助炎症性细胞穿透血管壁，导致炎症细胞的活化，诱发炎症反应，促使单核细胞，淋巴细胞聚集形成局部炎症，利于清除TP，同时造成组织学上典型的血管炎和细胞浸润。9

有研究报道TNF－α在梅毒的免疫中发挥着重要作用。10本研究结果显示，一期及二期梅毒患者血清中MyD88，NF－κB及TNF－α水平明显高于对照组(P＜0.001)，说明MyD88，NF－κB可能在TP感染人体后的信号转导中起重要作用，在其诱导下产生重要的炎症因子TNF－α。朱慧兰等3研究发现，与正常对照组相比，一期、二期和潜伏梅毒患者血清TNF－α水平明显增高，在一定程度上表明TNF－α是TP感染后机体免疫应答的重要炎症介质，参与了TP感染后机体的病理反应。曹双林等4研究认为TNF－α可能与二期梅毒银屑病样皮疹的产生有关，但本组样本未观察银屑病样皮疹与其它类型皮疹之间TNF－α的差异，TNF－α是否与其他类型皮疹的发生有关有待于进一步研究。本研究结果显示二期梅毒血清中TNF－α水平高于一期梅毒(P＜0.001)，推测可能是由于随着梅毒病程的进展，梅毒螺旋体由淋巴系统进入血液循环，形成菌血症散播全身，导致梅毒螺旋体膜脂蛋白刺激信号持续存在，通过MyD88、NF－κB途径不断向下游转导，使其诱导产生的TNF－α在二期梅毒患者血中高表达，而TNF－α在体内的大量释放可造成机体的多种病理损伤。

1旺盛，张谊芝.TOLL样受体与梅毒免疫.国外医学皮肤病学分册，2005，31(3):139－141.

2 Kaisho T，Akira S.Toll－like receptor function and signaling.J Allergy Clin Immunol，2006，117(5):979－987.

3朱慧兰，曾志荣，叶兴东，等.梅毒患者细胞免疫的研究.中国性病艾滋病防治，2002，8(3):139－141.

4曹双林，傅玲玲，符梅，等.二期梅毒患者血清白介素6、白介素8及肿瘤坏死因子α测定.中华皮肤科杂志，2001，34(6): 423－424.

5 Jeong E，Lee JY.Intrinsic and extrinsic regulation of innate immunereceptors.Yonset Med J，2011，52(3):379－392.

6周玉平，顾志英，钱伊弘，等.早期梅毒皮损形成机制的研究.中华皮肤科杂志，2006，39(5):254－256.

7 Chang L，Karin M.Mammalian MAP kinase signaling cascades. Nature，2001，410(6824):37－40.

8Eisenbarth SC，Flevell RA.Innate instruction of adaptive immunity revisited:the inflammasome.EMBO Mol Med，2009，1(2): 92－98.

9杜军兴，李文竹.细胞因子与梅毒细胞免疫研究进展.中国现代医药杂志，2011，13(2):126－128.

10邱彦龙，李树华，穆象山，等.肿瘤坏死因子－α的药理和病理学研究.中国卫生检验杂志，2012，19(19):18－21.

(收稿:2013－09－24 修回:2013－10－22)

Expression of M yD－88，NF－κB and TNF－αin the patientswith syphilis

LIU Zhi-fang，MAYuan-long，ALATENGChu-lu，etal.Department ofDermatology，the Affiliated Hospital of InnerMongolia Medicol University，InnerMongolia Hohehot，010050

Objective:Tomeasure the expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αin the sera of patients with syphilis.Methods:Eighty－two patients with syphilis and forty eight healthy controls were recruited into the study.The expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αweremeasured with ELISA.Results:The levels of MyD88，NF－κB and TNF－αin patients with syphilis were significantly higher than those in healthy controls (P＜0.001).Conclusion:MyD88 and NF－κB may play a part of role in the immune response to treponema pallidum infection.

syphilis；treponema pallidum；MyD88；NF－κB；TNF－α

内蒙古自治区自然科学基金(编号:2010MS1153)

内蒙古医科大学附属医院皮肤性病科，内蒙古呼和浩特，010050