高效液相色谱法测定生骨散中柚皮苷的含量

赵明会 付凌燕 程晓英

(吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 132001)

生骨散是由骨碎朴、续断、自然铜等16味中药制成的散剂，具有益髓生骨、养血强筋，通经止痛的作用[1]。用于 “骨蚀”中后期，肝肾不足所致的髋部疼痛，患肢活动不利明显，肉萎筋缩，腰膝酸软无力，健忘失眠，舌淡苔白，脉沉细；股骨头坏死等骨病见上证候者[2]。该制剂无含量测定方法，不能有效控制成药的质量。骨碎补为此方中主药，柚皮苷为骨碎补药材主要活性成分，也是质量控制常用的指标性成分。现采用实用、有效、普及的高效液相法测定柚皮苷的含量以提高质量标准[3-5]，以便控制其质量，给用药提供保障，结果满意，可供该制剂质量控制参考。

1 仪器与试药

岛津LC-2010C高效液相色谱仪，包括 （配套的泵，柱温箱，自动进样器，紫外检测器 （岛津），CLASS-VP色谱工作站），Sartorius电子分析天平；柚皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为110722-200309（供含量测定用）；生骨散为医院制剂样品 （吉林市股骨头坏死专科医院，批号：20121101，20121102，20121103）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱 条件 Warters-C18柱 （250mm×4.6mm，5μm） 色谱柱；流动相为甲醇-水(33∶67)；流速 1．0mL·min-1；检测波长283nm；柱温25℃。在此条件下，柚皮苷峰形对称，分离效果良好，阴性试验无干扰。见图1。

图1生骨散HPLC色谱图

2.2 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥12h后的柚皮苷对照品适量，加甲醇制成235μg·ml-1的对照品溶液；再加甲醇制成21.15μg·ml-1的对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取生骨散8g，精密称定，精密加入甲醇40ml，称定重量，加热回流3h，放冷后用甲醇补足减失的重量，滤液转移至50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液，即得[1]。

2.4 阴性样品溶液的制备 依照 “2.3”项下制备缺骨碎补的阴性对照溶液。

2.5 线性 精密吸取柚皮苷对照品溶液 （浓度：235μg·ml-1） 3、 9、 15、 30、 45、 60ml， 分 别 置 于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下各进样10μl， 以浓度 （C）-峰面积 （A），回归方程为： A=18988.62C-3969.52， r=1.0000 （n=6）。柚皮苷在 7.05～141.00μg·ml-1范围内呈良好线性关系。

2.6 稳定性 取同一批样品 （批号20121101）制备后的0、1、2、4、8、12h测定，按柚皮苷的峰面积计算，RSD=0.7% （n=6），柚皮苷对照品溶液在12h内稳定。

2.7重复性 取同一批样品 （批号20121101），按供试品溶液的制备方法分别制备共6份，进行测定，求得柚皮苷含量的RSD=0.8% （n=6），表明重复性较好。

2.8 精密度 取同一批样品 （批号 20121101）10μl，按相同色谱条件，连续进样5次测定， RSD=0.3%（n=5），表明精密度较好。

2.9 回收率 取同一批已知含量的生骨散 （批号20121101， 柚 皮 苷 含 量 103.37μg·g-1， 平 均 袋 重8.1151g·袋-1）粉末约8g，共9份，分别加入柚皮苷对照品溶液 （235μg·ml-1） 4ml、 6m l、 8ml各 3 份混匀后，按 “2.3供试品溶液的制备”方法制备样品测定，结果见表1。

表1回收率试验结果

2.10 样品测定 取3个批号的样品，经2次平行测定，结果见表2。

表2生骨散含量测定结果

3 讨论

流动相的选择试验中采用不同的流动相：甲醇-醋酸-水 （35∶4∶61）， 甲醇-水 （33∶67）， 因为前者含酸较高，对色谱柱有一定的损坏，洗脱条件易发生变化，故选用后者。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2010年版.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：239-240.

[2]吉林省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准JLZJ-ZB-0016-2006.

[3]王舒，王苗苗，吕述丽.高效液相色谱法测定红宝散中欧前胡素的含量[J].中国中医药现代远程教育，2013，8：149-150.

[4]付凌燕，李亚荣.高效液相色谱法测定救尔心胶囊中原儿茶醛含量[J].中国药师，2010，15：30-31.

[5]付凌燕，赵明会，高效液相色谱法测定舒冠片中原儿茶醛的含量[J].中国药师，2010，3：373-374.