针刺风府穴对紧张型头痛大鼠张颌反射的影响

吴宏赟王希友王福文侯书伟

1.山东中医药大学附属医院脑病科，山东济南250014；2.山东中医药大学，山东济南250014；3.山东省医学科学院药物研究所，山东济南250062；4.山东中医药大学针灸推拿学院，山东济南250355

针刺风府穴对紧张型头痛大鼠张颌反射的影响

吴宏赟1王希友2王福文3侯书伟4

1.山东中医药大学附属医院脑病科，山东济南250014；2.山东中医药大学，山东济南250014；3.山东省医学科学院药物研究所，山东济南250062；4.山东中医药大学针灸推拿学院，山东济南250355

目的探索针刺风府穴对紧张型头痛大鼠张颌反射波幅和潜伏期的影响。方法采用大鼠双侧半棘肌注射三磷酸腺苷二钠注射液（ATP）的方法制备紧张型头痛大鼠模型。体重220～260 g的SPF级Wistar大鼠40只，雌雄各半，分为空白组、模型组、风府穴组和假穴组四组，通过定量分析紧张型头痛模型大鼠张颌反射波幅及潜伏期，反映头颈部皮肤肌肉筋膜痛阈及敏感性变化。结果空白组半棘肌注射生理盐水不引起张颌反射波幅及潜伏期变化（P＞0.05）；模型组半棘肌注射ATP导致张颌反射波幅下降（P＜0.05），潜伏期见缩短趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）；针刺风府穴可见风府穴组JOR波幅升高（P＜0.05），潜伏期延长（P＜0.05）；针刺假穴见张颌反射波幅升高（P＜0.05），潜伏期延长，但差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组相比，风府穴组波幅明显升高（P＜0.01），假穴组差异无统计学意义（P＞0.05）；风府穴组波幅较假穴组升高明显（P＜0.01）。与模型组相比，风府穴组潜伏期明显延长（P＜0.01），假穴组差异无统计学意义（P＞0.05）；风府穴组潜伏期与假穴组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论针刺风府穴可提高张颌反射波幅，延长潜伏期，即提高痛阈，降低头颈部肌筋膜敏感性。

风府穴；紧张型头痛；张颌反射；针刺

紧张型头痛（tension-type headache，TTH）是原发性头痛中最常见的一种。2010年数据显示，我国18～65岁人口中，TTH发病率为10.77%，约占原发性头痛的45.00%。其发病机制未完全明了，影响患者工作生活学习能力，缺乏针对性治疗方法，医疗花费高。有研究表明，颅周肌筋膜组织持续的伤害性痛觉传入在脊髓及三叉神经核水平产生中枢敏化，这在慢性TTH的产生中起重要作用[1]。根据这一机制，采用颈部双侧半棘肌注射三磷酸腺苷二钠注射液（ATP）模拟TTH颈部肌筋膜伤害性传入增强建立TTH大鼠模型[2]，前期研究结果表明此模型科学可靠，简单易于复制[3]，可用于评价中药干预TTH疗效[4]。风府穴是临床治疗TTH常用腧穴。但既往研究多采用定性或视觉模拟评分法粗略定量评价临床疗效，精确度不佳。本研究通过记录张颌反射（jaw-opening reflex，JOR）波幅及潜伏期，定量分析针刺风府穴对TTH模型大鼠镇痛疗效，探索临床针刺风府穴治疗TTH提供实验学证据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重220～260 g，购于山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心[许可证号SCXK（鲁）20130001]，实验动物质量合格证号：No.0014890。动物分笼饲养，自由饮水。SPF大鼠生长繁殖饲料，批号13040123，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2009-0012，北京市实验动物饲料质量合格证号No.11002900000991。

1.2 方法

1.2.1 主要仪器与试剂

电子天平，大鼠固定器，大鼠手术台，秒表，WZ-50C66T单通道微量注射泵（浙江史密斯医学仪器有限公司），BioPAC多导生理信号采集分析系统，ATP（广东天丰药业有限公司，批号：120501，规格2mL∶20mg）临用前用生理盐水配制成1μmol/L溶液；10%水合氯醛（购于山东大学齐鲁儿童医院）。

1.2.2 分组方法

分为4个组，分别是空白组（半棘肌注射生理盐水）10只，模型组（半棘肌注射ATP）10只，风府穴组（半棘肌注射ATP后针刺风府穴）10只，假穴组（半棘肌注射ATP后针刺假穴）10只。

1.2.3 实验步骤

1.2.3.1 造模方法采用大鼠颈部双侧半棘肌注射ATP造模法[3]。①腹腔注射10%水合氯醛3.5 mL/1000 g，麻醉程度以后爪疼痛刺激不引起躲避为准。②大鼠俯卧位，颈部备皮，消毒，从大鼠枕骨顶嵴后枕寰关节背凹陷处下0.5 cm开始，沿颈部正中纵向切开1.5～2.0 cm，分离出双侧半棘肌。再将大鼠仰卧位，沿颈部正中切口1.0～1.5 cm，分离出二腹肌前腹。③大鼠右侧卧位，将两根直径150μm不锈钢针刺激电极纵向插入舌右侧，将两根记录电极插入右侧二腹肌前腹肌肉内，两电极间距3～5 mm，以记录舌刺激诱发的JOR；同时将两台单通道微量注射泵头皮针插入双侧半棘肌。④模型组大鼠双侧半棘肌同时以20μL/min的速度泵入ATP，空白组大鼠同样速度泵入生理盐水，持续1min。

1.2.3.2 针刺方法风府穴按照《实验动物学》于大鼠枕骨顶嵴后枕寰关节背凹陷处取穴，向后下方斜刺2 mm持续捻转行针，留针10min。假穴按照《实验动物学》于大鼠枕外嵴外缘上方取穴，向前平刺2 mm，持续捻转行针，留针10min。

1.2.3.3 JOR信号记录待生理信号采集分析系统的波形基线稳定后，给予舌电极电刺激。刺激参数：方波刺激，频率为1 Hz，波宽200μs，强度0～10mA。记录并测定JOR出现的波幅、潜伏期，连续测定3次，间隔2min，取其平均值。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，组内比较采用配对t检验，组间比较采用协方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组别刺激诱发大鼠JOR波幅的比较

实验前后JOR波幅组内比较，空白组差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组、风府穴组和假穴组差异均有统计学意义（P＜0.05）。实验后JOR波幅组间比较，风府穴组较模型组增加，差异有高度统计学意义（P＜0.01），假穴组与模型组变化相似，差异无统计学意义（P＞0.05）；风府穴组较假穴组增加，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 不同组别刺激诱发大鼠JOR波幅比较（mA，s）

表1 不同组别刺激诱发大鼠JOR波幅比较（mA，s）

?

2.2 不同组别刺激诱发大鼠JOR潜伏期的比较

实验前后JOR潜伏期组内比较，空白组、模型组、假穴组差异均无统计学意义（P＞0.05）；风府穴组实验后JOR潜伏期延长差异有统计学意义（P＜0.05）。实验后JOR潜伏期组间比较，风府穴组较模型组延长差异有高度统计学意义（P＜0.01），假穴组与模型组变化相似，差异无统计学意义（P＞0.05）；风府穴组与假穴组变化相似，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同组别刺激诱发大鼠JOR的潜伏期的变化（ms，±s）

表2 不同组别刺激诱发大鼠JOR的潜伏期的变化（ms，±s）

注：与模型组比较，*P＜0.01；与本组实验前比较，#P＜0.05

组别只数实验前实验后空白组模型组风府穴组假穴组10 10 10 10 8.370±1.350 7.517±0.573 7.627±0.635 8.980±1.642 8.277±1.300 7.420±0.610 8.233±0.710*#9.163±1.660

3 讨论

头颈部肌肉外周致敏是TTH患者最显著的异常[5]，TTH患者较健康志愿者颅周肌筋膜敏感度增加，敏感度与TTH强度和频率正相关[6-8]。JOR是一种在伤害和抗伤害研究中比较实用的模型，JOR的抑制作为镇痛指标是可行的[9]。Rydenhag等[10]就通过电刺激牙髓引起JOR，并记录到了二腹肌肌电和脑干诱发电位。因此，采用颈部半棘肌注射ATP增加颈部肌肉伤害性传入，并通过神经电生理记录JOR的潜伏期及波幅的变化来反映肌筋膜痛敏感程度也是可行的。JOR波幅代表痛阈，潜伏期代表肌筋膜敏感性[9]，痛阈的提高说明动物对伤害性电刺激不敏感，起到镇痛作用。为避免ATP溶液注入肌肉后局部压迫导致颈部刺激引起疼痛，本研究设立半棘肌注射生理盐水的空白组。

实验结果显示，空白组半棘肌注射生理盐水不引起JOR波幅及潜伏期变化（P＞0.05）；模型组半棘肌注射ATP导致JOR波幅下降（P＜0.05），潜伏期见缩短趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）；针刺风府穴可见风府穴组JOR波幅升高（P＜0.05），潜伏期延长（P＜0.05）；针刺假穴见JOR波幅升高（P＜0.05），潜伏期延长，但差异无统计学意义（P＞0.05）。由于大鼠不同个体间痛觉敏感性存在差异，导致基线水平不齐，本研究采用协方差分析进行组间两两比较。与模型组相比，风府穴组波幅明显升高（P＜0.01），假穴组未见显著性差异（P＞0.05）；风府穴组波幅较假穴组升高明显（P＜0.01）。与模型组相比，风府穴组潜伏期明显延长（P＜0.01），假穴组未见显著性差异（P＞0.05）；风府穴组潜伏期与假穴组相比无显著性差异（P＞0.05）。JOR波幅代表痛阈[9]，因此，针刺风府穴可以提高痛阈，延长潜伏期，缓解TTH；而针刺假穴同样可以提高痛阈，但较针刺风府穴疗效差，且不能明显延长潜伏期。

目前中医药治疗TTH以中药、中成药为主，有确切疗效和相对优势。而针刺作为非药物疗法越来越受到重视。针刺治疗TTH的临床报道[11-12]，显示出较好的疗效。其中，针刺风府穴对TTH有良好的缓解肌肉紧张、止痛的效果[13]。风府穴属督脉，为督脉、阳维脉交会穴。项后入发际一寸，大筋内宛宛中。《伤寒论》，“尺寸俱浮者，太阳受病也。当一二日发，以其脉上连风府，故头项痛而腰脊强”，肯定了头项强痛与风府有关。《素问·骨空论》云，“大风颈项痛，刺风府”，直接明确颈项强痛的病症可以针刺风府穴。《普济方·针灸》提出风府穴：“治头痛，颈急不得回顾目眩……又云，主头项急不可倾侧。”《针灸大成》亦有类似论述，“主……头痛，项急不得回顾，……头中百病”。

《千金方》：“有阿是之法，言人有病痛，即令捏其上，若里当其处，不问孔穴，即得便快或痛，即云阿是，灸刺皆验，故曰阿是穴也。”本研究针刺非经非穴的假穴，虽然不是压痛（敏感）点，但是位于疼痛局部，类似于阿是穴。针刺假穴可提高痛阈，缓解TTH，在一定程度上为阿是穴的临床疗效提供了实验依据。针刺风府穴可明显提高阈值和延长潜伏期，但针刺假穴仅提高阈值，未明显延长潜伏期，肯定了准确定位选取风府穴在TTH中的特异性疗效。

总之，针刺风府穴，可以缓解TTH，疗效优于针刺非经非穴的假穴。其疗效机制之一是提高痛阈，降低头颈部肌筋膜敏感性，可作为临床治疗TTH的要穴。但风府穴其深层解剖结构邻近颈髓和延髓下段，针刺过深可能导致蛛网膜下腔出血或伤及颈髓和延髓生命中枢而危及生命。故针刺时，要严格掌握风府穴的安全针刺深度和针刺方法。

[1]Ashina M，Bendtsen L，Jeusen R，et al.Nitric oxide-inducede headache in patients with chronic tenstion-type headache[J].Brain，2000，123（Pt9）：1830-1837.

[2]Ellrich J，Makowska A.Nerve growth factor and ATP excite different neck muscle nociceptors in anaesthetized mice[J].Cephalalgia，2007，27（11）：1226-1235.

[3]胡志强，吴宏赟，全伟，等.一种紧张型头痛动物模型的建立与评价[J].中国疼痛医学杂志，2012，18（11）：678-681.

[4]吴宏赟，胡志强.柔筋方对紧张型头痛大鼠张颌反射的影响及机制研究[J].中国医药导报，2012，9（3）：21-22.

[5]Jensen R，Rasmussen BK，Pedersen B，et al.Muscle tenderness and pressure pain thresholds in headache：a population study[J].Pain，1993，52：193-199.

[6]Buchgreitz L，Lyngberg AC，Bendtsen L，etal.Frequency of headache is related to sensitization：a population study[J]. Pain，2006，123（1-2）：19-27.

[7]Fernandez-De-Las-Penas C，Cuadrado ML，Arendt-Nielsen L，et al.Increased pericranial tenderness，decreased pressure pain threshold，and headache clinical parameters in chronic tension-type headache patients[J].Clin JPain，2007，23（4）：346-352.

[8]Lipchik GL，Holroyd KA，O'Donnell FJ，et al.Exteroceptive suppression periods and pericranialmuscle tenderness in chronic tension-type headache：effects of psychopathology，chronicity and disability[J].Cephalalgia，2000，20（7）：638-646.

[9]姚天华，屠军波，张引成，等.脂质体阿霉素对大鼠三叉神经形态与功能影响的实验研究[J].实用口腔医学杂志，2004，20（4）：447-450.

[10]RydenhagB，Shyu BC，OlaussonB，etal.Influenceofchanges of tooth temperature on reflex and central activity evoked by stimulation of tooth pulp afferents[J].Brain Res，1986，367（1-2）：337.

[11]付梅.针刺治疗紧张型头痛的临床观察[J].中国中医基础医学杂志，2013，19（7）：810-811.

[12]陈白云，李文金.针刺治疗紧张型头痛随机对照观察[J].实用中医内科杂志，2013，27（1）：126-127.

[13]张培永，秦文栋.合刺风府为主治疗肌收缩性头痛[J].山东中医杂志，1995，14（11）：521.

Influence of acupuncturing Feng-fu acupoint on jaw-opening reflex of ratswith tension-type headache

WU Hongyun1WANG Xiyou2WANG Fuwen3HOU Shuwei4
1.Department of Encephalopathy,Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250014,China;2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250014,China;3.Medical Research Institute of Shandong Academy of Medical Sciences,Shandong Province,Ji'nan 250062,China;4.Acumox and Tuina College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Ji'nan 250355,China

Ob jective To explore the influence of acupuncturing Feng-fu acupoint on amplitude and latency of jawopening reflex(JOR)of rats with tension-type headache(TTH).M ethods The TTH ratmodelwas prepared by injecting ATP into rats'bilateral semispinalis capitis.40 SPF-Wistar ratsweighting 220-260 g,halfmale and half female,were divided into four groups:blank group,model group,Feng-fu acupoint group and non-acpoint group.Change of pain threshold and sensitivity ofmuscle and fascia in head and neck was observed by making quantitative analysis on JOR amplitude and latency of TTH model rats.Resu lts No change of JOR's amplitude and latency was caused in blank group with NSinjected into semispinalis capitis(P＞0.05),JOR's amplitudewas decreased inmodel group with ATP injected(P＜0.05)and the shortened tendency of its latencywasnotsignificant(P＞0.05),JOR's amplitudewas increased and latency was shortened in Feng-fu acupoint group,JOR's amplitudewas increased in non-acupoint group(P＜0.05) and the extended tendency of its latency was not significant(P＞0.05).Compared withmodel group,JOR's amplitude and latency of Feng-fu acupoint group were increased remarkably(P＜0.01),by contrast,non-acupoint group had no significant difference(P＞0.05).Compared with non-acupoint group,JOR's amplitude of Feng-fu acupoint group was increased observably(P＜0.01),while latency was not(P＞0.05).Conclusion Acupuncturing Feng-fu acupoint could increase JOR's amplitude and extend its latency,in other words,it can increase pain threshold and decrease sensitivity ofmuscle and fascia in head and neck.

Feng-fu acupoint;Tension-type headache; Jaw-opening reflex;Acupuncture

R741.041

A

1673-7210（2014）08（b）-0036-04

2014-04-28本文编辑：张瑜杰）

山东省自然科学基金项目（编号ZR2011HL011）。

吴宏赟（1982.10-），男，硕士，主要从事中西医结合治疗头痛的研究。

侯书伟（1956.5-），男，教授，主要从事经络腧穴理论与临床应用研究。