脾虚证结肠癌组织和正常结肠组织中5-羟色胺受体1F表达差异的研究

周细秋，舒祥兵，张静喆，郭修田，许阳贤，陆金根，季 光

脾虚证结肠癌组织和正常结肠组织中5-羟色胺受体1F表达差异的研究

周细秋1,2，舒祥兵3，张静喆1,2，郭修田1,2，许阳贤1，陆金根1,2，季 光3

目的：探讨脾虚证结肠癌组织和正常结肠组织5-羟色胺受体1F（5-HTR1F）的表达差异并探讨其可能的临床意义。方法：中医辨证符合脾虚证的结肠癌患者32例为研究组，以18例同期湿热证结肠癌患者为对照组，SP免疫组化检测两组病例结肠癌组织和相邻结肠黏膜组织5-HTR1F的表达。结果：两组患者肿瘤组织中5-HTR1F的阳性表达率为74.4%，其相邻的结肠黏膜组织中5-HTR1F的阳性表达率为24.3%，两组表达有显著差异；脾虚证患者肿瘤组织中5-HTR1F的阳性表达率为87.5%，湿热证患者肿瘤组织中5-HTR1F的阳性表达率为55.6%，两组表达有显著差异，在不同TNM分期、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有统计学意义。结论：5-HTR1F的表达可能与结肠癌发生发展相关，并可作为结肠癌脾虚证的预测指标。

结肠癌；脾虚证；5-羟色胺受体1F；临床病理

结肠癌根治术后5年生存率约为50%[1]，脾虚是结肠癌常见的临床证侯[2]。5羟色胺受体（5-hydroxytryptamine,5-HTR）多个亚型在肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤中的作用已较明确，但在结肠癌中作用还不明确[3]。2010年1月—2012年12月，我们着手于大肠癌脾虚证的研究，探讨5羟色胺受体家族新成员5-HTR1F在病变和正常结肠组织中的表达，为阐明大肠癌脾虚证的生物学基础提供临床依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 本研究共纳入对象50例，分为研究组和对照组，均行结肠癌根治术，术中切取肠癌组织标本和相邻部位正常肠组织标本。研究组为中医辨证属脾虚证型，共32例，其中男21例，女11例；年龄46～82岁，平均（68±9.4）岁，中位年龄63岁。病理证实有淋巴结转移者9例，无淋巴结转移者23例。高分化腺癌9例，中分化腺癌17例，低分化腺癌6例。TNM分期I～Ⅱ期20例，III～Ⅳ期12例。对照组为中医辨证湿热证，共18例，男11例，女7例；年龄43～84岁，平均（64.6±10.2）岁，中位年龄61岁。病理证实有淋巴结转移者8例，无淋巴结转移者10例。高分化腺癌5例，中分化腺癌9例，低分化腺癌4例。TNM分期I～Ⅱ期11例，III～Ⅳ期7例。两组性别、年龄、病理类型、TNM分期均无统计学差异。

1.2 方法 所有标本采用4 μm连续石蜡切片，采用SP免疫组织化学法检测。羊抗人5-HTR1F多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，SP免疫组织化学试剂盒购自福州迈新公司，染色程序按试剂盒说明书进行。主要步骤：切片常规脱蜡至水，高温高压组织抗原修复，5-HTR1F多克隆抗体按1∶200稀释，DAB显色。常规复染封片，结果用彩色病理图像分析系统采集。以细胞质、核膜或胞膜呈现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片观察10个不同视野（上3，中4，下3），计数阳性细胞占所有细胞的百分数。按阳性细胞数＜5%为（-），5～10%为弱阳性（+），11～50%为中等阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。以阳性表达为+～+++的例数占所在分组总例数的百分比（%）作为该组的阳性表达率,。

1.3 统计学处理 采用Stata 7.0统计软件处理，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 5-HTR1F在结肠癌黏膜组织中的表达 50例入选对象的结肠癌黏膜组织中5-HTR1F的阳性表达率为74.4%，多为中等或强阳性表达（图1A）。而与相邻的癌旁肠黏膜组织中阳性表达率为24.3%，以不表达或弱阳性表达为主（图1B）。结肠癌患者黏膜组织5-HTR1F的阳性表达率显著高于癌旁肠黏膜组织，差异具有统计学意义（P＜0.01），提示5-HTR1F可能在结肠癌发生发展中发挥作用（见图1）。2.2 5-HTR1F表达与结肠癌临床病理之间的关系不同性别、年龄、肿瘤部位、病理类型、分化程度癌组织5-HTR1F的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。TNM分期Ⅰ～Ⅱ期和III～Ⅳ期5-HTR1F表达阳性率分别为29%和79%（P＜0.05）。有无淋巴结转移5-HTR1F表达阳性率分别为88%和30%（P＜0.05）。肿瘤浸润全层及浆膜5-HTR1F表达阳性率为85%，明显高于肿瘤浸润黏膜、肌层的62.5%（P＜0.05）。提示5-HTR1F的表达可能与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、肿瘤浸润深度相关（表1）。2.3 5-HTR1F表达与结肠癌患者证侯表型的关系32例脾虚证结肠癌黏膜组织中有28例5-HTR1F表达为阳性，阳性表达率为87.5%（n=32），以中等或强阳性表达居多（图1C）。18例湿热证结肠癌黏膜组织中有10例5-HTR1F表达为阳性，阳性表达率为55.6%（n=18），以弱阳性表达为主（图1D）（P＜0.05）。提示5-HTR1F在脾虚证和湿热证患者存在表达差异（图1，表2）。

表1 5-HTR1F表达与结肠癌临床病理的关系（n=50）

表2 不同证型结肠癌组织中5-HTR1F的阳性表达

图1 5-HTR1F在大肠癌组织和正常组织的表达（SP法×400倍，箭头示阳性表达）

3 讨论

肿瘤发生是一个复杂的过程，除了基因和表观遗传学改变[4]的因素之外，社会心理因素与肿瘤的发生、发展也存在着一定的联系[3]。循证医学研究分析发现，社会心理因素与肿瘤发生率及生存率有着密切联系[5]。但慢性应激与肿瘤发生之间联系的具体机制仍不十分明确。

5-HT是一种常见神经递质，通过其受体5HTR介导应激的发生，同时也是一种重要的胃肠激素，调控着消化道的分泌、运动、吸收及细胞营养等功能。肠道黏膜在受到刺激时可引起5-HT的释放，作用于肠黏膜上的5-HTR而发生作用[6]。近年来的研究发现，5-HT与胃肠道肠易激综合症、腹泻等多种疾病的发生有关[6-7]。5-HT有多个受体亚型，近年来的研究已经发现5-HTR1A、5-HTR1B、5-HTR1D和5-HTR2A在乳腺癌、前列腺癌和膀胱癌高表达[5]。但是5-HTR与肠癌发生的关系一直没有明确，作为5-HTR家族的新成员，5-HTR1F与肿瘤发生是否有关也尚存在争议，需更高级别的研究证据的支持。

脾虚是结肠癌发生发展的重要中医病理因素，研究表明健脾治疗可以提高化疗对大肠癌术后患者的总体疗效[2]。既往的动物实验表明脾虚时胃窦及十二指肠组织的5-HT细胞数目增多，5-HT及5-HTR含量会增加；运用健脾益气的方药治疗后，大鼠的脾虚症状改善较明显，其胃肠道内源性5-HT及5-HTR含量也相应减少[7]。本研究中选择了脾虚证的结肠癌患者，并以同期湿热证大肠癌患者为对照，比较了肿瘤组织、正常组织5-HTR1F的表达，发现了脾虚证患者结肠癌黏膜组织5-HTR1F阳性表达率显著高于同期湿热证患者，进一步提示5-HTR1F有望作为结肠癌脾虚证患者的生物标志物，对中医脾虚证的临床辨证的客观化，指导结肠癌患者的辨证用药和疗效评价具有一定意义，值得进一步深入研究。

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[3]Pantaleo MA,Palassini E,Labianca R,et al.Targeted therapy in colorectal cancer:do we know enough[J]?Dig Liver Dis,2006,38(2): 71-77.

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[6]罗琦,廉永红,苏俊权,等.加味四君子汤对脾虚型肠易激综合征患者肠黏膜5-羟色胺受体的影响[J].中国中医药信息杂志,2013,20 (1):19-21.

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（收稿：2013-12-06 修回：2014-05-12）

（责任编辑 周振理）

Expression of Serotonin Receptor(5-HTR1F)in Patients with Colon Cancer Differentiated as Deficien-cy in Spleen Qi according to TCM

ZHOU Xi-qiu,SHU Xiang-bing,ZHANG Jing-zhe,et al.Department of surgery,Longhua Hospital,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai(200032),China

Objective To explore the expression and role of Serotonin receptor(5-HTR1F)in the tissue of human colon cancer with deficiency in spleen qi.MethodsThe expression of 5-HTR1F was detected by SP immunohistochemistry.ResultsAmong the 5-patients with colon cancer underwent radical resection,32 patients were with syndrome of deficiency of spleen qi,18 patients were with syndrome of dampness-heat.The expression of 5-HTR1F was significantly different between patients with deficiency of spleen qi and patients with syndrome of dampness-heat.The difference had a statistical significance in the TNM pathological classification, lymph node metastasis and depth of invasion.ConclusionThe expression of 5-HTR1F may be associated with the development of colon cancer and be used as the prediction index of human colon cancer for those with deficiency in spleen qi.

Colon cancer;deficiency of spleen qi;5-hydroxytryptamine receptor 1F;clinical pathology

R735.3+5

A

1007-6948(2014)03-0234-03

10.3969/j.issn.1007-6948.2014.03.003

上海市卫生与计划生育委员会资助（2012L029A）;顾氏外科流派建设项目（ZYSNXD-CC-APGC-JD002）

1.上海中医药大学附属龙华医院外科（上海 200032）

2.上海中医药大学外科研究所（上海 200032）

3.上海中医药大学脾胃病研究所（上海 200032）

季光,E-mail：jiliver@vip.sina.com