藏药二十一味寒水石丸的定性鉴别

朱林燕，孔子铭，韩泳平

·炮制制剂·

藏药二十一味寒水石丸的定性鉴别

朱林燕，孔子铭，韩泳平

目的：建立藏药二十一味寒水石丸的定性鉴别方法。方法：采用薄层色谱法对制剂中诃子、藏木香、木香和牛黄进行了薄层色谱鉴别。结果：在薄层色谱中均能检测出诃子、木香、藏木香、牛黄四味药材，薄层色谱斑点清晰，阴性对照品溶液无干扰。结论：本文所建立的方法灵敏、可靠，专属性强，可为二十一味寒水石丸的质量控制提供一定的依据。

]藏药；二十一味寒水石丸；薄层色谱

藏药二十一味寒水石丸为藏医临床常用药，用于治疗“培根木布”引起的各种胃炎、胃溃疡等疾病，具有健脾和胃、理气止痛、活血祛瘀，制酸、止痛，愈溃疡等功效[1～2]。处方由寒水石、渣驯膏、波棱瓜子、止泻木子、木瓜、紫檀香、石榴子、豆蔻子、牛黄、甘青青兰、莲座虎耳草、绿绒蒿、余甘子、榜嘎、沙棘膏、荜菝、獐牙菜、藏木香、塞北紫堇、木香、诃子等21味药材组成。由于藏医的用药习惯和发展水平，加之处方组成本身比较复杂，因此针对二十一味寒水石丸能够保证疗效、符合现代要求的质量标准尚未建立。

为保证制剂临床应用的安全性和有效性，考虑到方中诃子[3]、木香[4]、藏木香[5]和牛黄[6]等药材活性较强，且与复方的临床应用相关，因此本文建立了针对上述药材的薄层鉴别方法。本文的研究为该制剂质量标准的建立提供了较为可靠的依据。

1 仪器和试药

METTLEB TOLEDO AE240 电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DZF-6065型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；紫外灯（北京智源通生物技术研究所）；硅胶G（青岛海洋化工集团有限公司）。

试验中所用对照品均购自中国药品生物制品检定所，没食子酸对照品（批号：0831-9501）；木香烃内酯对照品（批号：111524-200503）；去氢木香内酯对照品（111525-200505）；乌头碱对照品(批号：110720-200410）；胆酸对照品（批号：100078-200414）；藏木香对照药材（批号：8821-0338）；二十一味寒水石丸（由阿坝藏族羌族自治州藏医院提供，批号：20120712）。试剂乙醇、异辛烷、乙酸乙酯、冰乙酸、甲苯、氯仿、环己烷、正己烷、甲酸、硫酸等为分析纯，均购自成都恒力化玻实验仪器经营部。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1诃子 取本品粉末2 g，加乙醇10 mL，超声处理30分钟，滤过处理后，水浴上蒸干，残渣以乙醇1 mL溶解后作为供试品溶液。另取没食子酸对照品,以乙醇制成浓度为0.5 mg．mL-1的溶液作为对照品溶液。再取缺诃子的阴性药材2 g，按照上述方法制成缺诃子的阴性样品溶液。

按照《中国药典》（一部）附录ⅥB进行试验，分别移取供试品溶液、没食子酸对照品溶液、缺诃子的阴性样品溶液4 μL点于同一硅胶G板上进行薄层展开，展开系统为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6:4:：1)，展开，取出，晾干，喷以2 %三氯化铁乙醇试液为显色剂。置紫外光灯(365 nm)下检视。结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而缺诃子的阴性样品无干扰，见图1。

图1 二十一味寒水石丸诃子的TLC鉴别

2.1.2 木香 取本品粉末2 g，加氯仿10 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯、木香烃内酯对照品，以氯仿制成浓度为0.5 mg．mL-1的溶液作为对照品溶液。取缺木香的阴性药材2 g，按照上述方法制备成缺木香的阴性样品溶液。按照《中国药典》（一部）附录ⅥB进行试验，分别移取供试品溶液、去氢木香内酯对照品溶液、木香烃内酯对照品溶液、缺木香的阴性样品溶液4 μL点于同一硅胶G板上进行薄层展开，以氯仿-环己烷（5:1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以1%香草醛乙醇试液为显色剂。在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果表明，供试品与对照品相近位置显相同颜色的荧光斑点，而缺木香的阴性样品无干扰，见图2。

图2 二十一味寒水石丸样品木香TLC鉴别

2.1.3 藏木香 取藏木香对照药材0.5 g，加氯仿10 mL，超声5分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL作为对照药材溶液。取本品粉末3 g，加氯仿15 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 mL作为供试品溶液。取缺藏木香药材的阴性样品3 g，同样的制备方法制成缺藏木香药材的阴性样品溶液。

按照《中国药典》（一部）附录ⅥB进行试验，分别移取供试品溶液、藏木香对照药材溶液、缺藏木香的阴性样品溶液4 μL点于同一硅胶G板上进行薄层展开，以氯仿－环己烷(5:1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。缺藏木香的阴性样品无干扰，见图3。

图3 二十一味寒水石丸样品藏木香TLC鉴别

2.1.4 牛黄 取本品粉末2 g，加氯仿10 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩蒸干加1 mL乙醇溶液溶解，作为供试品溶液。取胆酸对照品，以乙醇制成浓度为0.5 mg．mL-1的溶液作为对照品溶液。取缺牛黄的阴性药材2 g，同法制成缺牛黄的阴性样品溶液。按照《中国药典》（一部）附录ⅥB进行试验，分别移取供试品溶液、胆酸对照品溶液、缺牛黄的阴性样品溶液4 μL点于同一硅胶G板上进行薄层展开，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:7:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液为显色剂。在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果显示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而缺牛黄的阴性样品无干扰，见图4。

图4 二十一味寒水石丸样品牛黄TLC鉴别

3 讨论

本文研究主要采用薄层色谱方法对二十一味寒水石丸中的诃子、木香、藏木香、牛黄等药材进行鉴别。所建立的方法重现性好、可操作性强。实验表明，在薄层层析之前薄层板应进行预饱和，以防止斑点的扩散及产生边缘效应，从而达到更好的分离效果。通过TLC实验，制定了诃子、木香、藏木香、牛黄等药材的薄层色谱鉴别方法，特征斑点明显，色谱分离清晰，可用作制剂中诃子、木香、藏木香、牛黄等的专属性鉴别。本文的研究结果可为二十一味寒水石丸质量标准的制定提供依据。

[1] 西藏、青海等卫生局. 二十一味寒水石丸. 藏药标准(第一版), 1978: 114.

[2] 罗布藏,旦增. 藏药二十一味寒水石丸治疗消化系溃疡病50例临床报告[J].中国民族医药杂志,1997,3 (2):11.

[3] 刘芳,秦红飞,刘松青.诃子化学成分与药理活性研究进展[J].中国药房,2012,23(7):670.

[4] 王永兵,王强,毛福林,等.木香的药效学研究[J].中国药科大学学报,2001,32(2):66.

[5] 张婷.藏木香和云木香化学成分及生物活性研究[D].北京协和医学院博士论文,2011.

[6] 闫焕,赵文静,常惟智.牛黄的药理作用及临床应用研究进展[J].中医药信息,2013,30(2),114.

（责任编辑：何瑶）

The qualitative identifcation of Tibetan medicine Ershiyiwei Hanshuishi pill/

ZHU Lin-yan,KONG Zi-ming, HAN Yong-ping//(Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, Sichuan)

Objective: To establish the method of qualitative identifcation of Ershiyiwei Hanshuishi pill. Method: Thin-layer chromatography (TLC) was used to identify Hezi, Zangmuxiang, Muxiang and Niuhuang. Result: Hezi, Zangmuxiang, Muxiang and Niuhuang were detected by TLC. The spots in chromatogram were clear, and no disturb could be found in negative sample. Conclusion: The method is sensitive, reliable and specifc, and can be used for quality control of Ershiyiwei Hanshuishi pill.

Tibetan medicine; Ershiyiwei Hanshuishi pill; TLC

R 283.6

A

1674-926X(2014)02-017-03

国家科技部十二五支撑计划资助(2012BAI27B07)；西南民族大学研究生创新型科研项目资助(CX2014SP262)

西南民族大学，四川 成都 610041

朱林燕（1990-），女，湖南汝城人，在读研究生， 研究方向：民族药物化学

韩泳平，教授，硕士生导师

Tel:(028)85522315 Email:yphan65@tom.com

2013-10-08