麻桔喘咳口服液的质量标准研究

呼梅，安小梅，卢云

·炮制制剂·

麻桔喘咳口服液的质量标准研究

呼梅1，安小梅2，卢云1

目的：建立麻桔喘咳口服液的质量标准。方法：采用TLC法对麻桔喘咳口服液中麻黄、瓜蒌皮、桔梗、苦杏仁进行定性鉴别。采用HPLC法测定制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。结果：所采用的TLC方法能有效鉴别出麻黄、瓜蒌皮、桔梗、苦杏仁。盐酸麻黄碱峰在0.0798 µg～0.798 µg浓度范围内呈良好线性关系（r=0.99997）。盐酸伪麻黄碱在0.0875 µg～0.875 µg浓度范围内呈良好线性关系（r=0.99993）。两种生物碱的平均回收率为101.1%，RSD为0.91%。结论：该方法操作简单，结果准确，专属性强，可用于麻桔喘咳口服液的质量控制。

]麻桔喘咳口服液；薄层色谱法；麻黄；瓜蒌皮；桔梗；苦杏仁；高效液相色谱法

麻桔喘咳口服液为我院临床经验方，目前正在申报医院制剂，由麻黄、桔梗、苦杏仁等8味药组成，具有宣肺平喘，豁痰开胸的功效。用于痰浊内阻所致肺胀，喘哮，咳嗽等症。为有效控制该制剂质量，本试验采用薄层鉴别色谱法对制剂中主要药味麻黄、瓜蒌皮、桔梗、苦杏仁进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对方中麻黄进行定量分析。

1 材料

1.1 仪器

HP-1100高效液相色谱仪（美国惠普）；二极管阵列检测器；惠普四元梯度泵； BP211D电子分析天平（Sartorius，德国），KH3200型超声波清洗器（220V，50Hz）；薄层色谱层析缸等。

1.2 药品与试剂

盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：171241-200506）；盐酸伪麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号171241-200505）；麻黄对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：121051-200704）；桔梗对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：121028-200507）；瓜蒌皮对照药材（中国药品生物制品检定所，批号121185-200802）；苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水；硅胶G（青岛海洋化工厂）；麻桔喘咳口服液（批号20120601,20120602,20120603）及其阴性对照样品均由成都中医药大学附属医院制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别试验

2.1.1 麻黄 取本品10 mL，加浓氨试液2 mL，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰，结果见图1。

图1 麻黄薄层鉴别

2.1.2 瓜蒌皮 取本品20 mL, 加三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取瓜蒌皮对照药材2 g, 加乙醇20 mL, 超声处理30分钟, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加甲醇1 mL使溶解, 作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰，结果见图2。

图2 瓜蒌皮薄层鉴别

2.1.3 桔梗 取本品20 mL，加盐酸1 mL，加热煮沸5分钟，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，三氯甲烷液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材0.5 g，加水20 mL，煎煮10分钟，滤过，滤液加盐酸0.5 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰，结果见图3。

图3 桔梗薄层鉴别

2.1.4 苦杏仁 取本品20 mL，加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨水洗涤2次，每次20 mL，合并正丁醇层，蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇振摇溶解，制成1 mL含2 mg的对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5 µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯-甲醇－水(15:40:22:10)，5～10℃下放置12 h的下层溶液为展开剂，展开，取出，立即用0.8%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品的相应位置上，均显相同颜色斑点。阴性无干扰，结果见图4。

图4 苦杏仁薄层鉴别

2.2 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总碱的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil-C18柱（250×4.6 mm，5 µm）；流动相；乙腈-0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（6:94）；流速：1mL．min-1；检测波长：210nm。柱温：30℃，进样量：5 µL。

2.2.2 溶液的制备

（1）对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品2.85mg和3.12mg，加甲醇制成每1 mL含盐酸麻黄碱114 µg、盐酸伪麻黄碱125 µg的混合溶液，摇匀，作为对照品溶液。

（2）供试品溶液的制备 精密吸取本品5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

（3）麻黄阴性对照溶液的制备 精密吸取阴性样品（缺麻黄）5 mL，按 “（2）”项下制备方法制备麻黄的阴性对照溶液。

2.2.3 方法学考察

（1）专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 µL，按上述色谱条件进样，进行测定。供试品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的色谱峰分离度大于1.5，阴性无干扰，见图5。

图5 高效液相色谱图

（2）线性关系考察 精密吸取盐酸麻黄碱（0.114 mg．mL-1）和盐酸伪麻黄碱（0.125 mg．mL-1）混合对照品溶液0.7 µL、1 µL、3 µL、5 µL、7 µL分别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标Y，进样量（µg）为横坐标X，绘制标准曲线。结果表明：盐酸麻黄碱峰在0.0798 µg-0.798 µg范围内线性关系良好，回归方程是Y=2097.8X-5.858，R=0.99997(n=5)；盐酸伪麻黄碱在0.0875 µg -0.875 µg范围内线性关系良好，回归方程是Y=2029.8X-4.221，R=0.99993(n=5)。

（3）精密度试验 精密吸取“（1）”项下的混合对照品溶液5 µL，按上述色谱条件，重复进样6次，结果显示，盐酸麻黄碱的RSD为1.35%，盐酸伪麻黄碱的RSD为0.99%，表明精密度良好。

（4）稳定性试验 精密吸取同一批（批号20120601）供试品溶液5μL，于 0h、2h、4h、6h、10h分别进样，测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积，结果10h内其峰面积基本不变，盐酸麻黄碱RSD为1.88%，盐酸伪麻黄碱RSD为1.50%，表明供试品溶液在10h内稳定性良好。

（5）重复性试验 取同一批号样品（批号20120601）6份，按“（2）”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总含量的平均值为0.8252 mg．mL-1，RSD值为1.44%，说明该方法的重复性良好。

（6）加样回收率试验 精密量取已知含量的样品（批号：20120601）6份，每份1 mL，分别加入盐酸麻黄碱（0.1945 mg．mL-1）和盐酸伪麻黄碱（0.2183 mg．mL-1）对照品混合溶液各 2 mL，按“（2）”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，两种生物碱的平均回收率为101.1%，RSD= 0.91%，表明该方法的准确度较好。

（7）样品测定 取批号20120601,20120602, 20120603的麻桔喘咳口服液样品，按溶液的制备“（2）”项下方法，制备三批中试样品的供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，结果见表1。

表1 麻桔喘咳口服液中试样品的含量测定（n=2）

3 讨论

对制剂中瓜蒌皮的薄层鉴别参考药典及相关文献，对薄层的展开系统，曾选用石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯(4:1)[1]、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯－甲醇（6:1:1）[2]的展开系统，结果样品的斑点较模糊，分离效果不佳，后选用三氯甲烷-甲醇（10:1）[3]的展开系统，瓜蒌皮的分离效果较好。对桔梗的提取条件进行了优化，药典的制备方法，操作复杂，耗费时间，考察了盐酸煮沸水提方法，操作简便，样品的斑点清晰，分离效果好。

对制剂中麻黄的含量测定参考药典方法[4]，供试品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱与其他组分的分离不佳，峰形不对称。参考相关文献[5～7]，采用Diamonsil-C18柱，曾试用流动相为乙腈:0.02mol/L磷酸二氢钾（含0.2%三乙胺）（6:94）、乙腈: 0.1%磷酸（6:94）、乙腈：0.1%磷酸（含0.1%三乙胺）（6:94），结果后者分离度大于1.5，盐酸麻黄碱理论塔板数大于3000，且阴性无干扰。故试验采用乙腈-0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（6:94）作为流动相。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:105.

[2] 曹冬红,苏辉,邓泽宜.咳咳止口服液质控方法的研究[J].中南药学,2007,5(2):185.

[3] 周琴妹,邵家德. 冠心平片鉴别及含量测定方法研究[J]. 时珍国医国药,2007, 18(5):1189.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:300.

[5] 太成梅, 那微, 赵晓霞,等.HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量[J] .中国药品标准，2010,11(5):380.

[6] 温畅. 关于HPLC对小儿止咳剂中盐酸麻黄碱的含量的测定[J].中国中医药咨讯,2010,10:81.

[7] 郭东艳,史亚军,宋逍. HPLC 测定复方麻黄止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量[J] .陕西中医,2005,26(4):373.

（责任编辑：李芸霞）

Study on the quality standard of Majie Chuanke Oral Liquid/

HU Mei1, AN Xiao-mei2, LU Yun1//(1. Affliated hospital of Chengduuniversity of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China ; 2.Zhucheng People’s Hospital, Zhucheng 262200, Shandong)

Objective: To establish the quality standard of Majie Chuanke Oral Liquid. Method: TLC was used for the qualitative identification of Mahuang, Gualoupu, Jiegeng, and Kuxingren in Majie Chuanke Oral Liquid. HPLC was used to simultaneously detect the contents of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in preparation. Result: The TCL approach could effectively identify Mahuang, Gualoupu, Jiegeng, and Kuxingren. HPLC experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.0798 μg ～0.798 μg for ephedrine hydrochloride(r=0.99997)and 0.0875 μg～0.875 μg for pseudoephedrine hydrochloride(r=0.99993). The average recoveries were 101.1% with RSD of 0.91% for two kinds of alkaloids. Conclusion: The method has characteristics of good specifcity, sensitivity and reproducibility, so it can be used for the quality control of Majie Chuanke Oral Liquid.

Majie Chuanke Oral Liquid; TLC; Mahuang; Gualoupu; Jiegeng; Kuxingren；HPLC

R 917

A

1674-926X(2014)02-016-03

2009年成都中医药大学附属医院院基金重点项目（Y2009046）

1.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072；

2.山东省诸城市人民医院，山东 诸城 262200

呼梅，硕士，副主任药师，从事中药质量控制与新制剂研发方向研究

Tel:028-87783257 Email:humei1222@sina.com

2013-07-31